GB 5009.139-2014 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 飲料中咖啡因的測定.pdf

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn) GB 5009.1392014 2014-12-01 發(fā)布 2015-05-01 實施 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 飲料中咖啡因的測定 GB 5009.1392014 I 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替GB/T 5009.139-2003飲料中咖啡因的測定，GB/T19182-2003咖啡 咖啡因含量的測定-液相色譜法。 本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T 5009.139-2003相比，主要變化如下： 刪除原標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009.139-2003中第一法 紫外分光光度法； 增加樣品分類； 修改樣品處理條件； 修改檢出限，增加定量限； 修改色譜條件。 本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為： GB/T 5009.139-2003； GB/T 19182-2003。 GB 5009.1392014 1 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 飲料中咖啡因的測定 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了可樂型飲料，咖啡、茶葉及其固體和液體飲料制品中咖啡因含量的測定方法高效液相色譜法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于可樂型飲料，咖啡、茶葉及其固體和液體飲料制品中咖啡因含量的測定。 2 原理 可樂型飲料脫氣后，用水提取、氧化鎂凈化；不含乳的咖啡及茶葉液體飲料制品用水提取、氧化鎂凈化；含乳的咖啡及茶葉液體飲料制品經(jīng)三氯乙酸溶液沉降蛋白；咖啡、茶葉及其固體飲料制品用水提取、氧化鎂凈化；然后經(jīng)C18色譜柱分離，用紫外檢測器檢測，外標(biāo)法定量。 3 試劑和材料 注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。 3.1 試劑 3.1.1 氧化鎂（MgO）。 3.1.2 三氯乙酸(CCl3COOH)。 3.1.3 甲醇（CH3OH）：色譜純。 3.2 試劑配制 三氯乙酸溶液（10 g/L）：稱取1g三氯乙酸（3.1.2）于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度。 3.3 標(biāo)準(zhǔn)品 咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品（C8H10N4O2）：純度99%。 3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 3.4.1 咖啡因標(biāo)準(zhǔn)儲備液（2.0 mg/mL）：準(zhǔn)確稱取咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品20 mg（精確至0.1 mg）于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解定容。放置于4冰箱，有效期為六個月。 3.4.2 咖啡因標(biāo)準(zhǔn)中間液（200 g/mL）：準(zhǔn)確吸取5.0 mL咖啡因標(biāo)準(zhǔn)儲備液（3.4.1）于50 mL容量瓶中，用水定容。放置于4冰箱，有效期為一個月。 3.4.3 咖啡因標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液：分別吸取咖啡因標(biāo)準(zhǔn)中間液（3.4.2）0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、10.0 mL至10 mL容量瓶中，用水定容。該標(biāo)準(zhǔn)系列濃度分別為10.0 g/mL、20.0 g/mL、40.0 g/mL、100 g/mL、200 g/mL。臨用時配制。 GB 5009.1392014 2 4 儀器和設(shè)備 4.1 高效液相色譜儀，帶紫外檢測器或二極管陣列檢測器。 4.2 天平：感量為0.1 mg。 4.3 水浴鍋。 4.4 超聲波清洗器。 4.5 0.45 m微孔水相濾膜。 5 分析步驟 5.1 試樣制備 5.1.1 可樂型飲料： a) 脫氣：樣品用超聲清洗器在40下超聲5 min； b) 凈化：稱取5 g（精確至0.001 g）樣品，加水定容至5 mL（使樣品溶液中咖啡因含量在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)），搖勻，加入0.5g氧化鎂，振搖，靜置，取上清液經(jīng)微孔濾膜過濾，備用。 5.1.2 不含乳的咖啡及茶葉液體制品：稱取5 g（精確至0.001 g）樣品，加水定容至5 mL（使樣品溶液中咖啡因含量在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)），搖勻，加入0.5g氧化鎂，振搖，靜置，取上清液經(jīng)微孔濾膜過濾，備用。 5.1.3 含乳的咖啡及茶葉液體制品：稱取1 g（精確至0.001g）樣品，加入三氯乙酸溶液定容至10 mL（使樣品溶液中咖啡因含量在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)），搖勻，靜置，沉降蛋白，取上清液經(jīng)微孔濾膜過濾，備用。 5.1.4 咖啡、茶葉及其固體制品：稱取1 g（精確至0.001g）經(jīng)粉碎低于30目的均勻樣品于250 mL錐形瓶中，加入約200 mL水，沸水浴30 min，不時振搖，取出流水冷卻1 min，加入 5g氧化鎂，振搖，再放入沸水浴20 min，取出錐形瓶，冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中，加水定容至刻度（使樣品溶液中咖啡因含量在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)），搖勻，靜置，取上清液經(jīng)微孔濾膜過濾，備用。 5.2 儀器參考條件 色譜柱：C18柱（粒徑5m，柱長150 mm 直徑3.9 mm）或同等性能的色譜柱。 流動相：甲醇+水=24+76。 流速：1.0 mL/min。 檢測波長：272 nm。 柱溫：25。 進樣量：10 L。 5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入液相色譜儀中，測定相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（咖啡因標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見附錄A中圖A.1）。 5.4 試樣溶液的測定 將試樣溶液注入液相色譜儀中，以保留時間定性，同時記錄峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中咖啡因的濃度，平行測定次數(shù)不少于兩次。 6 分析結(jié)果的表述 GB 5009.1392014 3 試樣中咖啡因含量按公式（1）計算： 10001000c VXm （1） 式中： X試樣中咖啡因的含量，單位為毫克每千克（mg/kg） ； c 試樣溶液中咖啡因的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升（g/mL） ； V被測試樣總體積，單位為毫升（mL） ； m稱取試樣的質(zhì)量，單位為克（g） ； 1000換算系數(shù)。 計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。 7 精密度 可樂型飲料：在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的5 %；咖啡、茶葉及其固體液體飲料制品：在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10 %。 8 其他 本方法線性范圍為220 ng/mL439 g/mL。檢出限：以3倍基線噪音信號確定檢出限0.7 ng；可樂、不含乳的咖啡及茶葉液體飲料制品檢出限為0.07 mg/kg，定量限為0.2 mg/kg；以含乳咖啡及茶葉液體飲料制品取樣量1 g，確定檢出限為0.7mg/kg，定量限為2.0 mg/L；以咖啡、茶葉及其固體飲料制品取樣量1g，確定檢出限為18 mg/kg，定量限為54 mg/kg。 G