藥物分析教案-第三章.pptVIP

天津醫(yī)科大學藥學院藥物分析第三章,藥物的雜質(zhì)檢查,Tianjin Medical University,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)的檢查方法,第一節(jié) 概述,內(nèi)容：,一、藥物的純度要求 1藥物純度的概念： 藥物的純度是指藥物的純凈程度 藥物中的雜質(zhì)是影響藥物純度的主要因素 2. 藥物純度的要求是不斷提高,第一節(jié) 概 述,3藥物純度的評價： 應把藥物的性狀、理化常數(shù)、雜質(zhì)檢查、含量測定等作為一個有聯(lián)系的整體來評價藥物的純度。 純度檢查也稱為雜質(zhì)檢查,評價標準,性狀：1. 結晶粉末 2. 溶程變長 3. 顏色有異,雜質(zhì)檢查超標,含量測定含量低,二、雜質(zhì)的來源與種類,雜質(zhì)的概念 藥物中存在的無治療用，影響藥物的療效和穩(wěn)定性，甚至對人體健康有害的物質(zhì)，稱為藥物的雜質(zhì)。,（一）雜質(zhì)的來源 有兩個方面：在生產(chǎn)過程中引入 在貯藏過程中引入,1. 生產(chǎn)過程中引入的雜質(zhì) 主要指藥物在合成過程中，未反應的 原料、中間體和副產(chǎn)物,生產(chǎn)過程中殘留有機溶劑、酸性或堿性 雜質(zhì)的檢查。 藥物中無效、低效異構體或晶型的檢查 例如：無味氯霉素存在A、B晶型，其 中B為有效，A為低效。,主要指外界條件的變化或微生物的作用可能發(fā)生的水解、氧化、潮解、溫度等變化，而產(chǎn)生的有關雜質(zhì)。 如：阿托品水解生成莨菪醇和莨菪酸； 麻醉乙醚氧化為醛和有毒的過氧化物,2.貯藏過程引入的雜質(zhì),二、雜質(zhì)的分類,來源：,一般雜質(zhì): 具有普遍性,特殊雜質(zhì): 具有特殊性,毒性：,有毒雜質(zhì): 嚴格控制,信號雜質(zhì): 監(jiān)測生產(chǎn),三、雜質(zhì)的限量檢查,1雜質(zhì)限量的概念 藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量，叫做 雜質(zhì)限量。 通常用百分之幾或百萬分之幾（ppm） 來表示。,3、雜質(zhì)限量檢查 指所檢查的雜質(zhì)不得超過雜質(zhì)的限量,2、限量制定的考慮因素 不得影響藥物的質(zhì)量 根據(jù)藥物的用途制定限量的大小 根據(jù)雜質(zhì)本身毒性的大小制定限量 利于生產(chǎn),4雜質(zhì)限量的計算 雜質(zhì)限量的計算公式： 雜質(zhì)限量 = 雜質(zhì)的最大允許量供試品的量100% 標準液濃度體積供試品的量100%,L（%） = CV/S100%,例1葡萄糖中重金屬的檢查： 已知：S = 4.0 g；C = 10g/ml； L = 510-6； 求： V = ？ 解：V = LS / C = 510-64.0/1010-6 = 2.0(ml) 例2葡萄糖中砷鹽的檢查： 已知：V = 2.0 ml；C = 1g/ml； L = 0.0004%； 求： S = ？ 解： S = CV / L = 110-62.0/410-6 = 0.5( g ),例3磷酸可待因中嗎啡的檢查： 已知：V = 5.0ml；C = 0.02 mg/ml； S = 0.1g；求： L = ？ 解： L = CV / S = 5.00.02/0.11000 100% = 0.1% 注意 單位一致 稀釋倍數(shù) 表示方法（%，mmp）,第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法,一、氯化物的檢查 1原理：是利用氯化物在硝酸性溶液中與硝酸銀試液作用， 生成氯化銀的白色渾濁液，與一定量標準氯化鈉溶 液在相同條件下生成的氯化銀混濁液比較，以判斷 供試品中氯化物是否超過限量。 Cl- + Ag+ AgCl,2條件： Cl- 0.05mg0.08mg/50ml, 即相當于標準 氯化鈉溶液5ml8ml。 酸度 稀硝酸10ml/50ml。 溫度 3040,Cl-1的濃度：50-80ug/50 ml 在硝酸酸性條件下 在暗處放置5 min,注 意,3干擾的排除 （1）供試品液混濁： 可用含硝酸的蒸餾水洗凈氯紙中氯 化物后過濾來消除混濁對氯化物檢查的 干擾。,（2）供試品有色： 采用內(nèi)消色法，按藥典附錄規(guī)定的方法處理,供試品,+ AgNO3,放置10min,澄清溶液,+標準NaCl,+水,對照溶液,供試品,+ AgNO3,+水,供試品溶液,（3）藥物與AgNO3反應,例：,1、碘化物中氯離子的檢查,2、巴比妥類藥物中氯離子的檢查,二、硫酸鹽檢查法 1原理,SO42- + Ba2+ BaSO4,稀HCl,白色沉淀,2條件： SO42- 0.1mg0.5mg/50ml, 即相當于標準硫酸鉀溶液15ml 酸 度 稀鹽酸2ml/50ml 3干擾的排除 供試品有色：可采用內(nèi)消色法,（一）硫氰酸鹽法 1原理 Fe3+ + 6SCN- Fe(SCN)6-3- 紅色 2條件：Fe3+ 0.01mg0.05mg/50ml, 即相當于標準鐵溶液15ml 酸 度 稀鹽酸4ml/50ml,HCl,三、鐵鹽檢查法,當有Fe2+存在時，加氧化劑過硫酸銨氧化Fe2+ 成Fe3+ 當供試液管與對照溶液管色調(diào)不一致，或所 呈硫氰酸鐵的顏色較淺不便比較時，可分別 移入分液漏斗中，加正丁醇或異戊醇提取， 分別取提取液比色。,3干擾的排除,2Fe3+ + 2HSCH2COOH 2Fe2+ + SCH2COOH + 2H+ SCH2COOH Fe2+ + 2HSCH2COOH Fe(SCH2COOH)2 + H+ Fe(SCH2COOH)2 Fe(SCH2COOH)2 2- + 2H2O,2OH-,(二）巰基醋酸法 1. 原理 巰基醋酸還原Fe3+為Fe2+，在氨 堿性試液中與Fe 2 +作用生成紅色 配位離子,氨溶液提供堿性條件 巰基醋酸使高鐵離子還原 枸櫞酸的作用是與鐵離子形成配位離子， 防止產(chǎn)生氫氧化鐵沉淀,2. 說明,四、重金屬檢查法,重金屬是指在實驗條件下能有硫代乙酰胺或硫化鈉作用而顯色的金屬雜質(zhì)，如銀、鉛、汞、銅、鎘、錫、銻、鉍等,定義：,檢查時以鉛作為代表,藥典收載了四種重金屬的檢查法,第二法 熾灼破壞后硫代乙酰胺法 第三法 硫化鈉法； 第四法 微孔濾膜法,第一法 硫代乙酰胺法,1原理 CH3CSNH2 + H2O CH3CONH2 + H2S 合格 H2S + Pb2+ PbS + 2H+ 2條件： Pb2+ 10g20g/27ml,相當于標準鉛溶液12ml。 酸 度 pH 3.03.5. 合格 ,pH3.5,3干擾的排除,(1) 供試品有色：可采用外消色法消除干擾。 (2) 供試品有微量Fe3+:在弱酸性溶液中氧化硫化氫析 出硫，產(chǎn)生混濁影響比色，可 加Vc或鹽酸羥胺使Fe3+氧化成 Fe2+離子再檢查。,五、砷鹽檢查法,（一）古蔡法Gutzeit) (BP也采用此法） 1. 原理 As3+ + 3Zn + 3H+ 3Zn+ +AsH3 AsO33- + 3Zn + 9H+ 3Zn+ + 3H2O + AsH3 AsO43- + 4Zn + 11H+ 4Zn+ + 4H2O + AsH3 AsH3 + 3HgBr2 3HBr + As(HgBr)3 (棕色) 2As(HgBr)3 + AsH3 3 AsH(HgBr)2 (黃色) As(HgBr)3 + AsH3 3HBr + As2Hg3 (棕黑色),2. 裝置與試劑作用 (1) 驗砷儀 砷化氫發(fā)生瓶;中空磨口塞;導氣管 (2) 試劑的作用 合格 KI-SnCl2的作用： 交替還原作用；首先將AsO43-還原成AsO33-， 生成的碘再被還原成碘離子。,AsO43- + 2I- +2H+ AsO33- + I2 + H2O AsO43- + Sn2+ + 2H+ AsO33- + Sn4+ H2O I2 + Sn2+ 2I- + Sn4+ 4I- + Zn2+ ZnI42-, Zn粒與氯化亞錫作用，在其面上形成Zn-Sn齊，起 去極化作用。 Pb(AC)2棉的作用是消除供試品可能含有的少量的硫 化物。 S2- + 2H+ H2S H2S + HgBr2 2HBr + HgS （汞斑） H2S + Pb(AC)2 PbS + 2HAC,3. 干擾的排除 （1）供試品為S2-,SO32-, S2O32-等: 因在酸中生成H2S,SO2,與 HgBr作用生成HgS或Hg，干擾砷斑檢查。用硝酸氧化成硫 酸鹽可消除。 （2）供試品為Fe3+ 能消耗KI，SnCl2 應測定條件，先可加足 量KI。,（3）含銻藥物 銻鹽被還原為SbH3與HgBr2試紙作用，產(chǎn)生灰色銻斑，干擾砷斑的檢查，可改用Betterdorff法（白田道夫法）,（二）Ag-DDC法(二乙基二硫代氨基甲酸銀，USP采用此法) 1.原理：是利用砷化氫與Ag-DDC吡啶溶液作用，使Ag-DDC中的 銀還原為紅色膠態(tài)銀，以Ag-DDC溶液為空白，于510nm 的波長處，測定吸收度，供試品溶液的吸收度不得大 于標準砷溶液的吸收度。 2.試劑的作用：同古蔡法。,六、溶液顏色檢查法,溶液顏色檢查法是控制藥物中有色雜質(zhì)量的方法。中國藥典 （2000年版）收載有三種方法： K2Cr2O7 黃、綠 1. 標準比色液進行比較的方法 標準比色液 CoCl2 橙黃,橙紅 2. 分光光度法 CuSO4 棕紅 3. 色差計法 通過測定供試品與標準比色液或水之間的色差值,七、易炭化物檢查法,是檢查藥物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有機雜質(zhì)。這類雜質(zhì)多數(shù)結構未知，常采用與標準比色液比色的方法進行檢查。(標準比色液為CoCl2, K2Cr2O7, CuSO4),是檢查藥物中的微量不溶性雜質(zhì)。常采用與濁 度標 準液比濁的方法進行檢查。濁 度標準液制備原理： (CH2)6N4 + 6H2O 6HCHO + 4NH3 HCHO + H2N-NH2 H2C=N-NH2 + H2O 甲醛腙白色混濁 不同級號濁度標準液,八、溶液澄清度檢查法,九、熾灼殘渣檢查法(residue on ignition),BP稱硫酸灰分（sulphated ash) 是檢查有機藥物中混入的各種無機雜質(zhì)。常采用 重量方法進行檢查。 殘渣及坩堝重 坩堝重 殘渣% = 100% 供試品重,十、干燥失重檢查法,主要檢查藥物中的水分及其他揮發(fā)性的物質(zhì)。常采用重量方法進行檢查。常用的方法有四種： （一）常壓恒溫干燥法 （二）干燥劑干燥法 （三） 減壓干燥法,熱重分析法 （四） 熱分析法（thermo analysis) 差示熱分析 差示掃描量熱法 1.熱重分析法（thermogravimetric analysis, TGA) 在程序升溫下，測量物質(zhì)的質(zhì)量與溫度的關系，研究物質(zhì)在 加熱同時失重的情況下，所發(fā)生的質(zhì)的變化，常用于藥物穩(wěn)定 性的研究；貴重和易氧化藥物的干燥失重測定。(長春堿),2.差示熱分析（differentialtherml analysis , DTA) 是在程序升溫下，測量被測物質(zhì)和參比物之間的溫差與溫 度關系的一種技術。參比物是一種惰性物質(zhì)，在加熱過程中 不發(fā)生相變和化學變化。因此溫差(T)只與被測物質(zhì)的量質(zhì) 變化有關。T=0 被測物未發(fā)生吸熱或放熱反應;T= - 為 吸熱峰;T = + 為放熱峰.,測藥的溶點 DTA在藥物分析中應用 尖峰為物理變化 藥物定性分析 寬峰為化學變化 估測藥物的純度,3.差示掃描量熱法(differential scanning calorimetry, DSC) 是在程序升溫下，測量維持樣品和參比物的溫度相同，系統(tǒng) 所需供給樣品隨溫差變化的能量的一種技術。DSC與DTA的不同之 處是記錄方式不同，是記錄系統(tǒng)供給的能量，吸熱供給能量；放 熱減少供給的能量。在藥物分析中應用與DTA相同。DSC-TG常聯(lián)合 用。,十一、有機溶劑殘留量測定法,主要檢查藥物在生產(chǎn)過程中引入的有害的有機溶劑(如苯、氯 仿、二氯甲烷、吡啶、甲苯、環(huán)氧乙烷、二氧六環(huán)等）。常采用 氣相色譜法方法進行檢查。常用的方法有二種： 直接進樣法和 頂空進樣法（試用于揮發(fā)性大的樣品測定）。 色譜系統(tǒng)性試驗的要求： (1) N1000;(2) 用內(nèi)標法測定時，要求R1.5; (3)外標法測 定時，待測物的峰面積的RSD10%。,殘留有機溶劑測定的方法和限量,返 回,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)的檢查方法,一、利用藥物和雜質(zhì)在物理性質(zhì)上的差異 （一）臭味及揮發(fā)性質(zhì)的差異 例如：黃凡士林中異性有機物檢查：本品2.0g,直火加熱無 辛味。濃過氧化氫中不揮發(fā)性雜質(zhì)檢查：10ml水浴蒸 干殘渣15mg （二）顏色差異 例如：磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的檢查：取本品2.0g， 加NaOH試液10ml，加水25ml，與黃色3號比色液比， 不得更深。,（三）溶解行為的差異 例如：吡哌酸中堿中不溶物吡哌酸甲酯（I）和（II）檢查 （四）旋光性質(zhì)的差異 例如：硫酸阿托品中莨菪堿的檢查：本品溶液(50mg/ml)- 0.4,（五）對光吸收性質(zhì)的差異 1. 紫外分光光度法： 例如: 地蒽酚中二羥基蒽醌的檢查,再如：苯丙醇中苯丙酮的檢查：可利用供試液的吸收度 比來控制雜質(zhì);純品苯丙醇A247nm/A258nm= 0.59; 99.5% 時A247nm/A258nm= 0.79; 因此規(guī)定供試品A247nm/A258nm 0.79; 即所含苯丙酮 0.5%.,2. 原子吸收分光光度法： 是通過測定藥物中所含待測元素原子蒸氣，吸收發(fā)自 光源的該元素特定波長的程度，以求出藥物中待測元素的 含量。 限量檢查時：對照品液 = 供試品 + 限量- a 供試品液 = - b 符合規(guī)定時 b (a-b); b (a-b)不合格。,3。紅外分光光度法： 主要用于藥物中無效或低效晶型檢查 如：甲苯咪唑中 A晶型檢查,A 晶型 C 晶型 在640cm-1 有強吸收 吸收很弱 在662cm-1 吸收很弱 有強吸收 662cm-1 640cm-1 662cm-1 640cm-1 供試品+10%A晶型 D2 D1 供試品 D2 D1 10% R = D1/D2 R = D1/D2,4.熒光分析法 3,4-二去氫利血平 利血平中氧化產(chǎn)物檢查：利血平(無熒光) (I)(黃綠色熒光) 3,4,5,6-四去氫利血平 (II)(藍色熒光),(六)吸附或分配性的差異 1.薄層色譜法(TLC),(1)雜質(zhì)對照品法 例如:鹽酸左旋咪唑中檢查 硅膠G 2,3-二氫-6-苯基咪唑2,1-b噻唑鹽 苯:甲醇:冰HAC 樣品 對招品,(2)高低濃度對比品法 例如:鹽酸異丙嗪中有關物質(zhì)的檢查 硅膠G 有多個雜質(zhì)而且結構不清 樣品10mg/ml;對照品(1)0.15mg/ml 己烷:丙酮:乙胺 (2)0.05mg/ml 樣品液 對(1) (2) 供試液雜質(zhì)斑點不多于3個;雜質(zhì)斑點與對照(2)的主斑點比 較,不得更深;如有一點超過,應不深于對照液(2)的主斑點.,2.紙層析法(PC) 常用于極性大的藥物的分離、分析，如地高辛中的有關雜質(zhì)的檢查。,3.高效液相色譜法(HPLC) （1）峰面積歸一化法：L% = Ai /(Ai + A主）100% 例如：利巴韋林中有關雜質(zhì)的檢查： 對照品液(5g/ml)進樣10l,調(diào)靈敏度，使主峰達滿 量程的20%25% 樣品液(0.4mg/ml)進樣10l, 雜質(zhì)Ai(Ai+A主） 的1.0%,（2）不加校正因子主成分對照法 對照品液為供試品的稀釋液進樣測得A主 供試品液進樣測得Ai 其Ai A主即為合格. 例如:甲硝唑中2-甲基-5-硝基咪唑: 對照品液(0.01mg/ml)進樣20l,調(diào)靈敏度，使主峰達10%30% 樣品液(0.14mg/ml)進樣20l,雜質(zhì)AiA主的1.0%.,（3）內(nèi)標法加校正因子測定供試品中雜質(zhì)的含量 對照品+內(nèi)標 進樣求校正因子（f)=(As/Cs)/(AR/CR) 供試品+內(nèi)標 進樣求AX.AS,則雜質(zhì)濃度CX = f AX/(AS/CS),4.氣相色譜法(GC) 主要用于藥物中揮發(fā)性的雜質(zhì)檢查，其檢查方 法與HPLC法相同。,二、利用藥物和雜質(zhì)在化學性上的差異,（一）酸堿性的差異 1.規(guī)定消耗滴定液體積 例如己酸羥孕酮中正己酐、對甲苯磺酸檢查：(NaOH 0.02mol/L) 取本品0.20g + 中性乙醇 + 溴麝香草酚藍 微藍色0.50ml 2.pH法 例如乙琥胺中2-甲基-2-乙基丁二酸檢查：0.01g/ml pH3.04.5. 3.指示劑法 例如苯巴比妥中苯基丙二酰脲檢查：其水溶液不得使甲基橙顯紅 色。,（二）氧化還原性的差異 例如：NaCl中I-和Br-檢查EOCl/2Cl- =+1.3595V EOBr/2Br- =+1.065V EOI/2I- =+0.5345V ,因此+NaNO2+H2SO4+淀粉顯藍色,再例如：鹽酸嗎啡中阿樸嗎啡的檢查：后者可被碘氧化生成水溶性 綠色化 合物。因此ChP規(guī)定：本品50mg +4mlH2O+1dI2 + 5ml乙醚 乙醚層不得顯紅色；水層不得顯綠色。,（三）雜質(zhì)與一定試劑反應產(chǎn)生沉淀 例一、間苯二酚中鄰苯二酚檢查：后者+Pb(Ac)2 白色 ChP規(guī)定：本品0.5g+10mlH2O+2d稀醋酸+0.5ml Pb(Ac)2 不得發(fā)生混濁，即為合格。 例二