血液分析儀及其臨床應(yīng)用2.ppt

血液分析儀及其臨床應(yīng)用,血液分析儀（hematology analyzer, HA）：臨床血液一般檢查最常用儀器。 50年代，美國庫爾特（W.H.Coulter）發(fā)明電子血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀并申請專利。,血液分析儀優(yōu)勢： 檢測項(xiàng)目多 速度快 精度高 易操作,一、檢測原理 檢測功能： 細(xì)胞計(jì)數(shù)功能 細(xì)胞分類功能 檢測原理分為2類： （一）電阻抗法 1.電阻抗原理(principle of electrical impedance)，又稱庫爾特原理（Coulter principle）,Couler計(jì)數(shù)原理,孔電流 真空 內(nèi)電極 外電極 - + 血細(xì)胞 懸液 標(biāo)本杯,2.計(jì)數(shù)部件結(jié)構(gòu)組成 等滲電解質(zhì)溶液 細(xì)胞懸液 小孔管（傳感器transducer）寶石孔（直徑 100m，厚度約75m） 脈沖數(shù)量和大小反映細(xì)胞： 數(shù)量 體積大小,3.白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)原理 儀器將體積為35450fL的血細(xì)胞，分為256個通道（channel）。 每個通道：1.64fl 根據(jù)細(xì)胞大小，分別置于不同的通道中，顯示血細(xì)胞體積分布直方圖（Histogram）。,經(jīng)溶血素處理脫水后，血細(xì)胞體積大小發(fā)生了變化！ 第一群（3590fl）小細(xì)胞區(qū)：淋巴細(xì)胞（體積最小）：一般在3590fl。 第二群（90160fl）是單個核細(xì)胞區(qū)，（中間細(xì)胞）： 單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、原始、幼稚細(xì)胞、異常細(xì)胞等 第三群（160fl以上）大細(xì)胞區(qū)：嗜中性粒細(xì)胞（體積最大）：一般在135-350fl,三分群血液分析儀正常白細(xì)胞分類模式圖（直方圖） 35 90 160 300 400 450(fl),%,儀器組成： 信號發(fā)生器 放大器 閾值調(diào)節(jié) 甄別器 整形器 計(jì)數(shù)系統(tǒng),2.電阻抗法紅細(xì)胞檢測原理 （1）紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血細(xì)胞比容測定 與白細(xì)胞計(jì)數(shù)相似。(%),100 200 300 400 (fl),(2)血紅蛋白測定：血紅蛋白與溶血劑中的特定試劑結(jié)合形成一種血紅蛋白衍生物，在530550nm下進(jìn)行比色。 ICSH推薦用氰化高鐵法（540nm比色）。 非氰化溶血劑，如SDS-Hb。 (3)紅細(xì)胞其他參數(shù)檢測,3.電阻抗法血小板檢測原理 血小板計(jì)數(shù)（platelet, PLT）： 隨紅細(xì)胞在一個系統(tǒng)中進(jìn)行檢測。 直方圖在228fl（不同儀器不一）。 血小板平均體積（mean platelet volume, MPV）。,10 20 30(fl),%,（二）光散射法血液分析儀檢測原理 組合應(yīng)用 電學(xué) 光學(xué) 細(xì)胞化學(xué)等,細(xì)胞流電學(xué)和光學(xué)檢測圖（AcT 5diff）,光散射法白細(xì)胞檢測原理類別 （1）激光與細(xì)胞化學(xué)法 1）過氧化物酶檢測通道： 嗜酸性粒細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞過氧化物酶活性比單核細(xì)胞強(qiáng) 淋巴細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞無過氧化物酶活性。 散射圖定位：X軸為吸光率（酶反應(yīng)強(qiáng)度）、Y軸為光散射（細(xì)胞大?。╋@示檢測結(jié)果。 2）嗜堿性粒細(xì)胞/分葉核檢測通道。,（2）容量、電導(dǎo)、光散射（volume，conductivity， scatter, VCS）法： 血細(xì)胞未經(jīng)任何處理，保持與體內(nèi)完全相同狀態(tài)下進(jìn)行。 VCS法檢測原理 細(xì)胞體積技術(shù)（測量細(xì)胞大?。?電導(dǎo)性技術(shù)（測量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)） 光散射（scatter, S）技術(shù)（測量細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞核和細(xì)胞顆粒）。,體積 電導(dǎo) 光散射,VCS可顯示3種細(xì)胞散點(diǎn)圖 DF1（體積值和散射光值） DF2（體積值和電導(dǎo)值） DF3（體積值和電導(dǎo)值）：只顯示basophil,細(xì)胞流電學(xué)和光學(xué)散點(diǎn)圖（AcT 5diff）,VCS血液分析儀正常白細(xì)胞散點(diǎn)圖實(shí)例,（3）電阻抗與射頻法（能透入細(xì)胞內(nèi)，測量核的大小及顆粒的多少）： 嗜酸性粒細(xì)胞檢測系統(tǒng) 嗜堿性粒細(xì)胞檢測系統(tǒng) 5種白細(xì)胞分類檢測系統(tǒng)：直流電（direct current，DC）為橫坐標(biāo)，以射頻（radio frequency ，RF）為縱坐標(biāo)。 幼稚細(xì)胞檢測系統(tǒng)： 幼稚細(xì)胞膜脂質(zhì)較成熟細(xì)胞少。 加入硫化氨基酸，與幼稚細(xì)胞的結(jié)合量多于較成熟的細(xì)胞 幼稚細(xì)胞對溶血劑有抵抗作用，從而提供幼稚髓細(xì)胞信息（immature myeloid information，IMI）。,（4）多角度偏振光散射（multi-angle polarized scatter separation of white cell, MAPSS）法 0：前角光散射（13），可粗略測定細(xì)胞大小。 10：狹角光散射（711），可測定細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)相對特征。 90：垂直光散射（70110），測定細(xì)胞核分葉情況。 90：消偏振光散射（70110），區(qū)分嗜酸性粒細(xì)胞與其他細(xì)胞。,2.光散射法紅細(xì)胞檢測原理 低角度(23)：測量紅細(xì)胞體積 高角度(515)：測定紅細(xì)胞血紅蛋白濃度 得到MCV、MCH、MCHC測定值，計(jì)算出RDW、紅細(xì)胞血紅蛋白分布寬度（red blood cell hemoglobin distribution width，HDW）,3.光散射法血小板檢測原理 Mie理論（Mie theory of light scatter for homogeneous spheres）：當(dāng)球形化的血小板一個一個通過激光照射區(qū)時：,高角度（515）：檢測細(xì)胞折射指數(shù)（reactive index，RI）； 低角度（23）：測量細(xì)胞大小。 大血小板與各種碎片如果體積相似，但由于內(nèi)容物不同，RI相差較大，故能鑒別。,5.網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（reticulocyte，RET）原理 20世紀(jì)90年代起，有多種檢測原理相似網(wǎng)織紅細(xì)胞分析儀。 （1）血液分析儀檢測原理： 用新亞甲藍(lán)染色使紅細(xì)胞RNA著色或用熒光染料對RNA進(jìn)行染色。,檢測參數(shù)： 網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對值（RET#） 網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)（RET%） 網(wǎng)織紅細(xì)胞平均體積（MCVr） 網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（RMI） 網(wǎng)織紅細(xì)胞分布寬度（reticulocyte distribution width, RDWr）,新亞甲藍(lán)網(wǎng)織紅細(xì)胞染色,光散射法網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測散點(diǎn)圖,二、檢測參數(shù) （一）檢測參數(shù) 中高檔儀器檢測參數(shù)： 20項(xiàng)左右或超過40多項(xiàng),（二）檢測結(jié)果及表達(dá)形式 表 常見血液分析報(bào)告用語及英文縮寫詞,三、細(xì)胞直方圖 橫坐標(biāo)為血細(xì)胞體積大小 縱坐標(biāo)為不同體積細(xì)胞的相對頻率。 （一）白細(xì)胞直方圖 正常白細(xì)胞直方圖 出現(xiàn)異常直方圖時，常伴警報(bào)信號，如“H（high，高）”或“L（low，低）”。,（二）紅細(xì)胞直方圖 正常紅細(xì)胞分布：50200fl 峰左移 峰右移 雙峰 （三）血小板直方圖 正常血小板直方圖呈左偏態(tài)分布： 230fl分布，主要在215fl。,四、方法學(xué)評價 （一）儀器類型和特點(diǎn) 1.單純電阻抗法三分群血液分析儀特點(diǎn) （1）檢測參數(shù)：紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板 （2）白細(xì)胞分類 （3）直方圖 （4）報(bào)警(flag)功能：文字、圖標(biāo),2. 綜合光學(xué)電學(xué)技術(shù)血液分析儀特點(diǎn) （1）檢測參數(shù)： 紅細(xì)胞 白細(xì)胞 血小板 網(wǎng)織紅細(xì)胞 幼稚細(xì)胞,（2）白細(xì)胞分類 五分類，準(zhǔn)確性較三分群血液分析儀高。 （3）直方圖和散點(diǎn)圖： 紅細(xì)胞直方圖 白細(xì)胞直方圖 血小板直方圖 白細(xì)胞分類散點(diǎn)圖。 （4）報(bào)警功能：文字、圖標(biāo),3.自動化程度 操作過程：半自動、全自動 儲存信息： 質(zhì)量控制：質(zhì)量控制軟件、顯示質(zhì)控圖形 至今，血液分析儀還只能用作健康人血液篩檢之用，尚不能完全代替顯微鏡功能。,(二)儀器性能評價（ICSH） 1. 可比性 (comparability) 指血液分析儀測定結(jié)果，與常規(guī)方法所測結(jié)果相比較。顯微鏡法是血細(xì)胞檢驗(yàn)基礎(chǔ)。 P0.05有可比性。P0.05無可比性 結(jié)論：計(jì)數(shù)細(xì)胞越多、選用吸管、計(jì)數(shù)盤越多，計(jì)數(shù)結(jié)果接近真值。 實(shí)際工作中，鏡檢法很難達(dá)到此要求。,經(jīng)嚴(yán)格校正的血液分析儀： 計(jì)數(shù)細(xì)胞多 操作步驟標(biāo)準(zhǔn)化 精確性高（ CV可2%） 準(zhǔn)確性較高,2. 準(zhǔn)確性 (accuracy) 準(zhǔn)確性是指測定結(jié)果與真值一致性的程度。 3. 總重復(fù)性( overall precision ) 指同一份標(biāo)本多次測量的結(jié)果接近的程度。 重復(fù)測定1份抗凝靜脈血10次，計(jì)算CV值。,4.精密度 (precision) 批內(nèi)（within- batch）精密度：同一批樣本重復(fù)測定結(jié)果的評價。 批間(between-batch)精密度：對兩批或兩批以上樣本重復(fù)測定結(jié)果的評價。 攜帶污染率(carry over)： 連續(xù)測定1份高值樣本3次（i1、i2、i3）再測定1份低值樣本3次（j1、j2、j3） 攜帶污染率（%）（j1-j3）/（i3-J3）,精確度和準(zhǔn)確度,5. 線性范圍 指測定值與稀釋倍數(shù)是否呈比例關(guān)系。 線性關(guān)系范圍越寬越理想。 P 0.01, 非線性相關(guān)。 P 0.05，未偏離線性。,稀釋效果,MCH MCV MCHC RBC,（三）影響直方圖變化的因素 1.儀器因素 血細(xì)胞體積大小 儀器閾值 孔電壓 2.試劑因素 稀釋液：導(dǎo)電率、滲透壓、離子強(qiáng)度 溶血劑：種類、濃度、用量和溶血時間,3.操作人員技能： 高素質(zhì) 技術(shù)培訓(xùn) 上崗前要仔細(xì)閱讀隨機(jī)手冊 掌握ICSH推薦的儀器性能評價方法 全程質(zhì)量控制,4.循證醫(yī)學(xué)對血液分析儀應(yīng)用指導(dǎo) （1）循證醫(yī)學(xué)（evidence-based medicine, EBM）：謹(jǐn)慎、準(zhǔn)確、合理而明智地對每個患者作出臨床決策。 循證檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)（evidence - based laboratory medicine, EBLM）。 （2）為臨床提供真實(shí)可靠實(shí)驗(yàn)診斷證據(jù)。 （3）用循征檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)思維客觀評價檢驗(yàn)。,五、臨床應(yīng)用 （一）檢測參數(shù)臨床意義 1.紅細(xì)胞參數(shù) （1）MCV和RDW：可用于缺鐵性貧血的早期診斷和鑒別診斷。 （2）紅細(xì)胞血紅蛋白分布寬度,2.血小板參數(shù) （1）血小板計(jì)數(shù) （2）血小板平均體積（mean platelet volume, MPV）: 鑒別血小板減低的病因： MPV增高：外周血血小板破壞過多致血小板減低,MPV減低： 骨髓病變引起血小板減低。 評估骨髓造血功能恢復(fù)的情況： 局部炎癥：骨髓造血未受抑制，MPV正常。 敗血癥：骨髓造血功能抑制，MPV減低。 白血病緩解：MPV增高。 骨髓造血衰竭：MPV、PLT持續(xù)減低。 MPV越小，骨髓受抑制越嚴(yán)重。 骨髓功能恢復(fù)時，首先MPV上升，然后PLT逐漸上升。 MPV與血小板功能明顯相關(guān)：有出血傾向者M(jìn)PV顯著低于無出血傾向者。,（二）紅細(xì)胞直方圖在貧血中的應(yīng)用 1.小細(xì)胞性貧血 （1）RDW正常：輕型地中海貧血 （2）RDW輕度增高：缺鐵性貧血 （3）RDW明顯增高，兩個細(xì)胞峰，小細(xì)胞峰明顯左移：鐵粒幼細(xì)胞性貧血、缺鐵性貧血經(jīng)治療有效,2.大細(xì)胞性貧血 (1) RDW正常，細(xì)胞主峰明顯右移： 溶血性貧血 白血病前期 再生障礙性貧血 巨幼細(xì)胞性貧血 (2) RDW輕度增高，紅細(xì)胞峰明顯右移，基底增寬： 葉酸、維生素B12缺乏性巨幼細(xì)胞性貧血。 (3)RDW明顯增高，紅細(xì)胞峰明顯右移，出現(xiàn)兩個峰： 巨幼細(xì)胞貧血，葉酸、維生素B12治療初。,3.正細(xì)胞性貧血 （1）RDW正常： 慢性病 急性失血 骨髓纖維化 骨髓發(fā)育不良 (2) RDW輕度增高： 血紅蛋白異常 骨髓纖維化 （3） RDW明顯增高： 早期或混合性營養(yǎng)不良,（三）血小板直方圖臨床應(yīng)用 1. 紅細(xì)胞碎片 可干擾血小板直方圖 2. 血小板聚集 直方圖峰左側(cè)起點(diǎn)較高 MCV和RDW正常，可排除小紅細(xì)胞干擾 3. 小紅細(xì)胞干擾 峰右側(cè)離橫坐標(biāo)較高，呈脫尾狀。 4. 小血小板 峰左移，MPV偏小。 血涂片可見較多小血小板。 5. MPV 與PLT呈非線性負(fù)相關(guān)。,（四）白細(xì)胞直方圖臨床應(yīng)用 直方圖只能提示白細(xì)胞比例變化或可能出現(xiàn)異常細(xì)胞，故要求用顯微鏡復(fù)查血涂片。 1.中性粒細(xì)胞增高(淋巴細(xì)胞相對減低) 嗜中性粒細(xì)胞增多 淋巴細(xì)胞減低癥,（四）白細(xì)胞直方圖臨床應(yīng)用 直方圖只能提示白細(xì)胞比例變化或可能出現(xiàn)異常細(xì)胞，故要求用顯微鏡復(fù)查血涂片。 1.中性粒細(xì)胞增高(淋巴細(xì)胞相對減低) 嗜中性粒細(xì)胞增多 淋巴細(xì)胞減低癥 2.中性粒細(xì)胞減低（淋巴細(xì)胞比例增高） 嬰幼兒 再生障礙性貧血 嗜中性粒細(xì)胞缺乏癥 淋巴細(xì)胞增多癥 傳染性單核細(xì)胞增多癥 慢性淋巴細(xì)胞白血病,3.嗜酸性粒細(xì)胞或單核細(xì)胞 淋巴細(xì)胞與單核細(xì)胞之間區(qū)域異常。 可能存在：異型淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞，原始細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞，嗜堿性粒細(xì)胞等。 4.急性白血病 白血病細(xì)胞在某一區(qū)域出高大細(xì)胞峰，同時有報(bào)警。 5.慢性白血病 在單個核細(xì)胞區(qū)和嗜中性粒細(xì)胞