化學(xué)專業(yè)畢業(yè)論文.doc

-學(xué)院本科生畢業(yè)論文 題 目 連翹及桑葚中蘆丁含量的測(cè)定 專 業(yè) 應(yīng) 用 化 學(xué) 院 部 化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院 學(xué) 號(hào) 、 、 、 姓 名 、 、 、 指 導(dǎo) 教 師 、 、 教授 答 辯 時(shí) 間 、 、 、 論文工作時(shí)間：2011 年 12 月 至 2012 年 5 月 論文題目來(lái)源：論文題目來(lái)源：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目編號(hào)：編號(hào)： 四川省自然科學(xué)研究項(xiàng)目四川省自然科學(xué)研究項(xiàng)目編號(hào)：編號(hào)： 校級(jí)自然科學(xué)研究項(xiàng)目校級(jí)自然科學(xué)研究項(xiàng)目編號(hào)：編號(hào)： 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 連翹及桑葚中蘆丁含量的測(cè)定連翹及桑葚中蘆丁含量的測(cè)定學(xué) 生 -指導(dǎo)教師 -摘 要：利用反相高效液相色譜法測(cè)定連翹及桑葚中蘆丁成分的含量。采用 SHIMDZU VP-ODS(4.6 mm150 mm、5.0 m)色譜柱，甲醇-0.08%：硫酸溶液(6:4)為流動(dòng)相，流量為 1.0 mLmol-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為 360nm。結(jié)果：蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液在 0.464-2.32 g 范圍內(nèi)的線性回歸方程為 Y=21200X +13697(r=0.9995)，平均回收率為 99.4%，RSD= 0.8 % ( n=5)。結(jié)論：此方法可用于檢測(cè)連翹及桑葚中蘆丁的含量，為連翹及桑葚的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)。實(shí)驗(yàn)表明該方法簡(jiǎn)便、快捷、適用性好。關(guān)鍵詞：HPLC；連翹；桑葚；蘆?。缓繙y(cè)定 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 Determination of rutin in forsythia suspense (thunb.) and mulberryUndergraduate -Supervisor - Abstract：The paper is to introduce the experiment of determining the contents of rutin in Forsythia suspense (Thunb.) and mulberry with RP-HPLC. Taking SHIMDZU VP-ODS conlumn (4.6 mm150 mm, 5.0 m), a mixture of methanol -0.08% phosphoric acid in the ratio of 6 to 4 by volume with a flow-rate of 1.0 mLmol-1 and the detection wavelength was set up at 360 nm. Results: the linearity of rutin was obtained over the ranges 0.464-2.32 g. The linear equation was Y =21200X +13697 (r=0.9995), the average recoveryrate was 99.4%, RSD = 0.8% (n=5). The method can be used for the determination of rutin in Forsythia suspense and mulberry, which provides a scientific basis for quality assessment to Forsythia suspense and mulberry. This method is reliable accurate and suitable for the determination of rutin. Keywords：HPLC; Forsythia suspense; Mulberry; Rutin; Determination 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 目目 錄錄 前言 .11 連翹、桑葚、蘆丁及高效液相色譜法的介紹 .11.1 連翹的簡(jiǎn)介.11.2 桑葚的簡(jiǎn)介.11.3 蘆丁的簡(jiǎn)介.11.4 高效液相色譜的介紹.22 實(shí)驗(yàn)部分 .32.1 儀器與試劑.32.2 儀器工作條件.42.3 樣品制備.42.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備 .42.3.2 供品溶液的制備 .42.4 高效液相色譜法測(cè)量.52.4.1 流動(dòng)相的準(zhǔn)備 .52.4.2 島津 LC20AT 高效液相色譜系統(tǒng)的操作.53 結(jié)果與討論 .63.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇.63.2 流動(dòng)相的優(yōu)化.63.3 提取時(shí)間及次數(shù)的選擇.73.4 工作曲線.83.4.1 對(duì)照品的測(cè)定 .83.4.2 線性回歸方程 .83.5 精密度試驗(yàn).93.6 穩(wěn)定性試驗(yàn).93.7 加標(biāo)回收率試驗(yàn).10 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 3.8 樣品分析.11結(jié)論 .13參考文獻(xiàn) .14致 謝 .16 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 1前言1 連翹、桑葚、蘆丁及高效液相色譜法的介紹1.1 連翹的簡(jiǎn)介連翹，又稱黃花條、連殼、甘草、青翹等，是中國(guó)臨床常用 傳統(tǒng)中藥之一，為木犀科連翹屬植物連翹的果實(shí)，主要分布于我國(guó)的山西、河南、陜西、山東、四川及云南等地。價(jià)值用途：(1) 藥用植物。莖、葉、果實(shí)、根均可入藥。中藥味苦，性微寒。有清熱解毒，散結(jié)消腫之效；用于治療溫?zé)?、丹毒、斑疹、癰瘍腫毒，瘰疬，小便淋閉、清心火。果實(shí)含連翹酚、甾醇化合物、皂甙(無(wú)溶血性)及黃酮醇甙類、馬苔樹(shù)脂醇甙等?，F(xiàn)代藥理研究認(rèn)為，連翹抗菌、抗炎、解熱、鎮(zhèn)吐、利尿強(qiáng)心、抗肝損、鎮(zhèn)痛、抑制cAMP磷酸二酯酶、抗內(nèi)毒素等作用1。連翹中化學(xué)成分主要為木質(zhì)素類、黃酮類、苯乙醇苷類、C6-C2天然醇類等2,3。(2) 膳食營(yíng)養(yǎng)。連翹種子可提取食用油脂。(3) 美顏?zhàn)o(hù)膚。連翹的花及未熟的果實(shí)，采集后用水煮20分鐘，每天在早上或睡前用此水洗臉，有良好的殺菌、殺螨、養(yǎng)顏?zhàn)o(hù)膚作用。長(zhǎng)期堅(jiān)持使用，可消除面部的黃褐班、蝴蝶斑，減少痤瘡和皺紋。1.2 桑葚的簡(jiǎn)介桑葚，又稱桑果、桑棗，為?？坡淙~喬木桑樹(shù)的成熟果實(shí)。桑葚果實(shí)中含有豐富的葡萄糖、蔗糖、果糖、胡蘿卜素、維生素、蘋(píng)果酸、琥珀酸、酒石酸及鈣、磷、鐵銅、鋅等礦物質(zhì)元素。價(jià)值用途：(1) 藥理作用。中醫(yī)認(rèn)為桑葚味甘酸、性微寒，入心、肝、腎經(jīng)，為滋補(bǔ)強(qiáng)壯養(yǎng)心益智佳果，具有補(bǔ)血滋陰生津、止渴、潤(rùn)腸燥等功效4-7。(2) 營(yíng)養(yǎng)功效?？稍鰪?qiáng)免疫器官的重量；能增強(qiáng)非特異免疫功能；對(duì)體液免疫有增加作用；對(duì)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫功能有顯著的促進(jìn)作用；對(duì)細(xì)胞突變具有預(yù)防作用；具有抗乙型肝炎病毒的作用和抗AIDS的作用。 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 21.3 蘆丁的簡(jiǎn)介蘆丁(Rutin)又名蕓香苷、紫槲皮苷，為淺黃色針狀晶體(水)，熔點(diǎn)176，結(jié)構(gòu)為3,4-四羥基-3-蕓香糖黃酮，是一種來(lái)源很廣的黃酮類化合物。主要存在于豆科植物槐的花蕾、果實(shí)，蕓香科植物蕓香全草，金絲桃科植物紅旱蓮全草及蓼科植物蕎麥的籽苗中。作用與用途：現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)證明蘆丁有抗氧化8 、抑制HepG2細(xì)胞的生長(zhǎng)9 、降低單純性肥胖大鼠的血糖 10 、抗血小板活化因子與受體結(jié)合11等作用。臨床用于防治腦溢血、高血壓、視網(wǎng)膜出血和急性出血性腎。其具有抗炎作用、維生素P樣作用、抗病毒作用、抑制醛糖還原酶作用等。由于蘆丁屬于維生素類藥，有降低毛細(xì)血管通透性和脆性的作用，保持及恢復(fù)毛細(xì)血管的正常彈性。蘆丁的化學(xué)結(jié)構(gòu)式(如圖1-1)。圖 1-1 蘆丁的結(jié)構(gòu)式圖1.4 高效液相色譜的介紹高效液相色譜(high performance liquid chromatography，HPLC)又稱“高壓液相色譜” 、 “高速液相色譜” 、 “高分離度液相色譜” 、 “近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 3具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。高效液相色譜法有“三高一廣一快”的特點(diǎn)： (1) 高壓：流動(dòng)相為液體，流經(jīng)色譜柱時(shí)，受到的阻力較大，為了能迅速通過(guò)色譜柱，必須對(duì)載液加高壓。 (2) 高效：分離效能高?？蛇x擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。 (3) 高靈敏度：紫外檢測(cè)器可達(dá) 0.01 ng，進(jìn)樣量在 L 數(shù)量級(jí)。 (4) 應(yīng)用范圍廣：百分之七十以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢(shì)。 (5) 分析速度快、載液流速快：較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個(gè)樣品在 1530min，有些樣品甚至在 5min 內(nèi)即可完成，一般小于 1 小時(shí)。此外高效液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點(diǎn)，但也有缺點(diǎn)，與氣相色譜相比各有所長(zhǎng)，相互補(bǔ)充。高效液相色譜的缺點(diǎn)是有“柱外效應(yīng)” 。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)。目前國(guó)內(nèi)對(duì)連翹及桑葚中蘆丁含量測(cè)定主要有比色法、紫外分光光度法和HPLC 及 GC 法等，但比色法的干擾因素較多，而紫外分光光度法準(zhǔn)確度不高，因此本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定連翹及桑葚中蘆丁的含量。2 實(shí)驗(yàn)部分2.1 儀器與試劑島津LC20AT高效液相色譜系統(tǒng)(LC6AD輸液泵，SPD-M20A二極管陣列檢測(cè)器，CLASSvp5.0色譜工站，CTO6A柱溫箱)；101-2A型數(shù)顯恒溫干燥箱；AY120電子天平(SHIMADZU)；SZ-93型自動(dòng)雙重純水蒸餾器； 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 4AUW220D 十萬(wàn)分之一天平(SHIMADZU，Japan)25 mL 比色管25 mL 容量瓶蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供)連翹(安徽省亳州市科輝藥業(yè)有限責(zé)任公司)桑葚(四川祥龍綠色有限公司)甲醇(色譜醇.，成都科龍化工試劑廠)磷酸(A.R.，成都科龍化工試劑廠)除甲醇外，其余試劑均為分析醇實(shí)驗(yàn)用水為二次重蒸水2.2 儀器工作條件SHIMDZU VP-ODS 反相色譜柱(150 mm 4.6 mm，5.0 m)；流動(dòng)相為V(甲醇-0.08%)：V(硫酸溶液)為(6:4)混合溶液，流量為 1.0 mLmol-1，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為 360 nm，進(jìn)樣量為 5 mL，柱溫為 35 。以蘆丁峰計(jì)理論塔板數(shù)大于3500。2.3 樣品制備2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備精密稱量經(jīng)五氧化二磷干燥的蘆丁對(duì)照品 58.0 mg，置 25 mL 容量瓶，用甲醇定容至刻度，搖勻，超聲，再精密吸取 1 mL 稀釋十倍，配制成濃度為232g mL- 1 的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。2.3.2 供品溶液的制備將待測(cè)樣品連翹于 75干燥至恒重，粉碎過(guò) 0.33 mm 篩，精密稱定約 1.0 g，置于 25 mL 錐形瓶中，加入甲醇 15 mL，避光超聲處理 40 min，上清液轉(zhuǎn)入25 mL 容量瓶。分別用 5 mL 甲醇重復(fù)提取 2 次，合并提取液，甲醇定容至 25 mL，搖勻，微孔針頭過(guò)濾器過(guò)濾，待測(cè)。將待測(cè)樣品桑葚于 75干燥至恒重，粉碎過(guò) 0.33 mm 篩，精密稱定約 2.0 g，置于 25 mL 錐形瓶中，加入甲醇 15 mL，避光超聲處理 40 min，上清液轉(zhuǎn)入 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 525 mL 容量瓶。分別用 5 mL 甲醇重復(fù)提取 2 次，合并提取液，甲醇定容至 25 mL，搖勻，微孔針頭過(guò)濾器過(guò)濾，待測(cè)。2.4 高效液相色譜法測(cè)量2.4.1 流動(dòng)相的準(zhǔn)備(1) 根據(jù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的流動(dòng)相，配制流動(dòng)相溶液，并根據(jù)需要選擇不同的濾膜(0.45 m)進(jìn)行過(guò)濾。(2) 將抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣處理 20 min。2.4.2 島津 LC20AT 高效液相色譜系統(tǒng)的操作(1) 打開(kāi) HPLC 工作站，連接流動(dòng)相管道和檢測(cè)系統(tǒng)。(2) 進(jìn)入 HPLC 控制界面的主菜單，點(diǎn)擊 manual，進(jìn)入手動(dòng)菜單。(3) 若系統(tǒng)有一段時(shí)間未用，或換了新流動(dòng)相，需先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵直 接在泵的出水口用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，需在 manual 菜單下，點(diǎn)擊purge 再點(diǎn)擊 start，沖洗速度不要超過(guò) 10 mlmin-1。(4) 調(diào)節(jié)流量，初次使用新流動(dòng)相，可先試一下壓力，流速越大壓力越大，通常不要超過(guò) 2000。點(diǎn)擊 injure，選擇合適的流速，點(diǎn)擊 on，開(kāi)始走基線，當(dāng)基線平穩(wěn)，開(kāi)始進(jìn)樣準(zhǔn)備。(5) 設(shè)計(jì)測(cè)試方法： (a)點(diǎn)擊 file，選擇 select users and methods，即可選取各種現(xiàn)有的測(cè)試方法。(b)若需建立新的方法，點(diǎn)擊 new method，設(shè)置新的測(cè)試方法，保存文件。(c)根據(jù)需要選擇配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測(cè)器等。確定后，點(diǎn)擊protocol。(d)一個(gè)完整的測(cè)試方法包括：進(jìn)樣前的穩(wěn)流，一般 2-5 min；基線歸零；進(jìn)樣閥的 loading-inject 轉(zhuǎn)換；測(cè)試時(shí)間，隨樣品的不同而不同。 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 6(e)測(cè)試完畢，導(dǎo)出數(shù)據(jù)，存盤(pán)。(6) 關(guān)機(jī)操作(a)全部測(cè)定完畢后，按規(guī)定用適當(dāng)溶劑(一般用甲醇)沖洗泵，進(jìn)樣器、柱及檢測(cè)器。(b)關(guān)閉電源，使用登記。3 結(jié)果與討論3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇蘆丁對(duì)照品與供試品在本實(shí)驗(yàn)溶劑體系下，用二極管陣列檢測(cè)技術(shù)12,13對(duì)組分峰進(jìn)行全波段紫外光譜掃描。(圖3-1)。Spectrum at time 4.07 min.nm200400600800mAU0100200mAU01002004.07 min圖 3-1 蘆丁對(duì)照品紫外光譜圖蘆丁與樣品相同保留值處組分峰紫外光譜具有良好一致性。蘆丁最大吸收波長(zhǎng)分別為 205 nm、258 nm、360 nm。在 205 nm 處供試品中的其它不明物組分有一定吸收，將對(duì)測(cè)定產(chǎn)生干擾，導(dǎo)致測(cè)定誤差，在 258 nm、360 nm 處雖無(wú)其它組分干擾吸收，但在 360 nm 處的吸收更強(qiáng)。而 360 nm 波長(zhǎng)處待測(cè)組分與其他雜質(zhì)峰能夠基線分離，檢測(cè)靈敏度高，故本實(shí)驗(yàn)確定最佳檢測(cè)波長(zhǎng)為 360 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 7nm。3.2 流動(dòng)相的優(yōu)化由于黃酮類化合物常帶有酚羥基，在水中會(huì)部分解離，而未解離的羥基與固定相作用較強(qiáng)，從而導(dǎo)致拖尾，所以黃酮類的反相 HPLC 中需要加入酸調(diào)節(jié)pH 以抑制解離，克服拖尾現(xiàn)象，這與離子抑制色譜技術(shù)的原理是一致的14，基于文獻(xiàn)15采用的流動(dòng)相體系，本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行多次對(duì)比、優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，同時(shí)考慮降低實(shí)驗(yàn)成本，結(jié)果表明 V(甲醇-0.08% )V(磷酸溶液)為(6:4)混合溶液相對(duì)于其他流動(dòng)相有良好的分離效果，目標(biāo)與其他組分均之間到達(dá)基線分離(R1.5)，且保留值適宜，滿足分析方法要求。3.3 提取時(shí)間及次數(shù)的選擇根據(jù)對(duì)樣品及濾渣中目標(biāo)成分的檢測(cè)，得出提取次數(shù)與目標(biāo)成分提取百分率關(guān)系如圖 3-2 所示。0.880.90.920.940.960.980123456提取次數(shù)提取百分率圖 3-2 樣品提取次數(shù)與目標(biāo)提取百分率關(guān)系在盡量完全的提取目標(biāo)成分的前提下，綜合考慮降低實(shí)驗(yàn)成本及縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間、提高效率，供品溶液由樣品通過(guò)3次提取配制而成。經(jīng)查閱文獻(xiàn)16-18，在提取中應(yīng)用超聲波振蕩技術(shù)是一種快速、高效而且不破壞組分的好方法19-21 。具體操作為：將樣品分別用純甲醇超聲提取20,30,40,50,60 min，各重復(fù)提取3 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 8次，超聲提取按本實(shí)驗(yàn)條件測(cè)定蘆丁含量。結(jié)果表明：純甲醇超聲處理40 min以后隨超聲提取時(shí)間的增加，蘆丁含量無(wú)明顯變化，因此選擇超聲提取40 min，重復(fù)提取3次為試驗(yàn)條件。HPLC測(cè)定樣品提取目標(biāo)組分后的殘?jiān)?，無(wú)待測(cè)組分的特征峰出現(xiàn)，說(shuō)明已完全提取樣品中的蘆丁。3.4 工作曲線3.4.1 對(duì)照品的測(cè)定精密吸取 232.0 gmL- 1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.0 mL 作為待測(cè)對(duì)照品。取對(duì)照品溶液檢測(cè)。得出對(duì)照品色譜圖(如圖 3-3)。 圖 3-3 蘆丁對(duì)照品色譜圖3.4.2 線性回歸方程分別精密吸取 2.0 L、4.0 L、6.0 L、8.0 L、10.0 L 的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定峰面積，以峰面積均值 Y(v.s)對(duì)照品進(jìn)樣體積 X(L)進(jìn)行線性回歸，得到蘆丁線性回歸方程為：Y=21200X +13697，其 r=0.9995，蘆丁在 0.464-2.32 g范圍內(nèi)與峰面積成良好線性關(guān)系。線性回歸圖如(圖 3-4)。 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 9050000100000150000200000250000024681012uL峰面積 圖 3-4 蘆丁線性回歸曲線3.5 精密度試驗(yàn)在 2.2 節(jié)色譜條件下，精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液 5 L，連續(xù)進(jìn)樣 5 次，測(cè)得標(biāo)準(zhǔn)樣品峰面積為：118576，119387，119670，120183，117573，RSD=0.8%(n=5)。3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)(1) 選取樣品連翹溶液作穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。分別在 0，2，4，6，8，12 h 進(jìn)樣10 L，測(cè)定峰面積。(如表 3-1)。表 3-1 連翹中蘆丁穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果連翹中蘆丁 峰面積0h786712h785894h767646h786268h7872012h78683計(jì)算其峰面積的 RSD 值為 0.1%，說(shuō)明樣品在 12 h 內(nèi)很穩(wěn)定。 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 10(2) 選取樣品桑葚溶液作穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。分別在 0，2，4，6，8，12 h 進(jìn)樣10 L，測(cè)定峰面積。(如表 3-2)。表 3-2 桑葚中蘆丁穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果桑葚中蘆丁 峰面積0h705322h706974h707186h704878h7065912h70324計(jì)算其峰面積 RSD 值為 0.2%，說(shuō)明樣品在 12 h 內(nèi)很穩(wěn)定。3.7 加標(biāo)回收率試驗(yàn)(1) 以連翹作為加標(biāo)回收率試驗(yàn)，準(zhǔn)確稱取已知蘆丁含量為 0.31%連翹樣品6 份，各約 0.5 g，1 份作為測(cè)定本底值樣品用，另 5 份分別添加 2.0 mL 濃度為232 gmL- 1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用純甲醇按 2.3.2 節(jié)制備供試品溶液。測(cè)定加標(biāo)樣品中各組分含量。(見(jiàn)表 3-3) 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 11表 3-3 連翹中蘆丁回收率試驗(yàn)結(jié)果本底值(g)加標(biāo)量(g)測(cè)定值(g)回收率(%)X(%)RSD(%)155.09157311.199.4154.94157309.998.7154.66157310.299.1155.96157313,3100.2155.59157312.199.799.4 0.5(2) 以桑葚作為加標(biāo)回收率試驗(yàn)，準(zhǔn)確稱取已知蘆丁含量為 0.13%桑葚樣品6 份，各約 0.5 g，1 份作為測(cè)定本底值樣品用，另 5 份分別添加 2.0 mL 濃度為232 gmL- 1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用純甲醇按 2.3.2 節(jié)制備供試品溶液。測(cè)定加標(biāo)樣品中各組分含量。(見(jiàn)表 3-4)表 3-4 桑葚中蘆丁回收率試驗(yàn)結(jié)果本底值(g)加標(biāo)量(g)測(cè)定值(g)回收率(%)X(%)RSD(%)64.9566.0131.0100.065.1866.0130.999.665.1266.0130.398.864.8566.0130.299.064.6666.0130.199.199.30.4通過(guò)兩個(gè)表中加標(biāo)回收率的數(shù)據(jù)顯示，可認(rèn)為該方法可以用于測(cè)得連翹及桑葚中蘆丁的含量。3.8 樣品分析 精密吸取 2.3.2 制備的連翹及桑葚樣品溶液 5 L 注入高效液相色譜儀，其色譜圖如圖 3-5，圖 3-6。 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 12Minutes012345678910mAU050100150200250300mAU050100150200250300Detector A-360 nm2012.02.2820120302-桑 桑 -2001Retention TimeArea圖 3-5 樣品連翹Minutes024681012mAU010203040mAU010203040Detector A-360 nm2012.02.2820120302-桑 桑 -2001Retention TimeArea圖 3-6 樣品桑葚平行測(cè)定 5 次，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算樣品中蘆丁的含量。實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果如表3-5， 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 13表 3-5 烘干含水樣品中目標(biāo)成分含量（mgg-1）名稱 生產(chǎn)單位蘆丁測(cè)定含量連翹安徽省亳州市科輝藥業(yè)有限責(zé)任公司3.1桑葚四川祥龍綠色有限公司1.3結(jié)論高效液相色譜法是目前普遍應(yīng)用的、較準(zhǔn)確的測(cè)定連翹及桑葚中蘆丁的方法，通過(guò)定性定量分析了連翹及桑葚中蘆丁的含量分別為 0.31%、0.13%，連翹中蘆丁含量略高于桑葚中蘆丁的含量。該實(shí)驗(yàn)對(duì)蘆丁的提取方案選擇、條件優(yōu)化等流程提供了一定的理論基礎(chǔ)。為人們提取蘆丁選擇原料提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為連翹及桑葚的質(zhì)量評(píng)價(jià)以及研究連翹、桑葚的藥用價(jià)值提供參考。 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 14參考文獻(xiàn)1 劉明對(duì)連翹藥理作用的研究現(xiàn)狀J.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2007，23 (16)：2438-2439.2 李慶，馮文尚連翹的化學(xué)成分研究進(jìn)展J.河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，20 (2)：78-80.3 馮文尚，李開(kāi)凱，鄭新康連翹的化學(xué)成分研究J.中國(guó)藥學(xué)雜志，2009，44 (7)：490-492.4 南亞桑葚保健果醋工藝研究J.食品科技，2008，9 (3)：82-84.5 劉玲，葉博桑葚枸杞營(yíng)養(yǎng)酒發(fā)酵工藝研究J.食品工業(yè)，2008，9 (1)：51-53.6 汪建國(guó)，王琦桑椹保健食醋的開(kāi)發(fā)與研制J.中國(guó)釀造，2005，4 (12)：58-59.7 金杰，李志西，張峰等桑葚醋提取物抗氧化性的研究J.中國(guó)釀造，2005，3 (10)：20-22.8 Jiang P, Burczynsk i F, CampbellC, et al. Rutin and flavonoid contents in three buckwheat species Fagopyrum esculentum, F.tataricum, and F. homotropicum and their protective effects against lipid peroxidation J. Food Research International, 2007, 40 (3):356- 364.9 沈欽海，馬臻，陳國(guó)民等蘆丁對(duì) HepG2 細(xì)胞生長(zhǎng)的影響J.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，28 (18)：1885- 1887.10 鄭旭煦，邵承斌，江瀾等蘆丁對(duì)單純性肥胖大鼠血糖和脂代謝紊亂的調(diào)節(jié)作用J.西藥學(xué)雜志，2005，20 (2)：109 -111.11 金鳴，臧寶霞，吳偉等蘆丁拮抗血小板活化因子與受體結(jié)合的作用J.中草藥，2005，36 (3)：390-392.12 Razghi M,Rogalski A.Semiconductor ultraviolet detectorsJ.Appl Phys Lett.1996,79 (10): 7433.13 Stevens K S, Kinniburgh M. Photoconductive ultraviolet sensor using Mg-doped GaN Si() J.Appl Phys Lett,1995,66 (25):3518.14 鄔安珍，阮嘉蓬反相高效液相色譜分離黃酮類化合物的研究J.分析測(cè)試學(xué)報(bào)1993，21 (3)：368.15 曹樹(shù)明，李菊，胡煒彥等HPLC 法測(cè)定苦蕎茶中蘆丁的含量J.中國(guó)民族民間醫(yī)藥雜志，2007，86 (2)：173-175.16 馮文尚，李成思，董長(zhǎng)明河南省不同地區(qū)枳殼連翹的質(zhì)量評(píng)價(jià)J.藥品評(píng)價(jià)，2005，2 (3)：198-200. 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 1517 李元朗高效液相色譜法測(cè)定不同地方連翹的連翹苷J(rèn).中國(guó)醫(yī)學(xué)工程，2010，18 (2)： 46-48.18 孫建軍，葛洪，侯天等高效液相色譜法測(cè)定抗高血壓草本植物中蘆丁及槲皮素的含量J.中國(guó)現(xiàn)代中藥，2009，1 (1)：11-1519 楊立功，鄭曉珂，張艷麗等高效液相色譜法測(cè)定連翹中連翹苷、蘆丁和槲皮素的含量J.中國(guó)藥學(xué)雜志，2011，11 (22)：1756-1758.20 鄭玉果，姚新生高效液相色譜在黃酮類化合物分析中的應(yīng)用J.中草藥，1994，25 (10)：542-545.21 汪河濱，李炳奇，李學(xué)禹等甘草中黃酮的超聲提取及含量測(cè)定J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2004，15 (12) : 815-816. 師范學(xué)院 2012 屆本科畢業(yè)論文 16致 謝論文的完成，意味著我四年大學(xué)本科的生活即將結(jié)束，也意味著我將踏入社會(huì)開(kāi)始新的生活。四年光陰，在我還沒(méi)有來(lái)得及好好珍惜之前轉(zhuǎn)瞬即逝?；厥淄?，奮斗和辛勞成為絲絲的記憶，歡笑與淚水也都?jí)m埃落定。綿陽(yáng)師范學(xué)院以其優(yōu)良的學(xué)習(xí)風(fēng)氣、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目蒲蟹諊涛仪髮W(xué)， “-”的校訓(xùn)也是我畢生需要追隨的腳步。值此畢業(yè)論文完成之際，我敲下“致謝”兩個(gè)字，心中感慨無(wú)限。這一路走來(lái)，需要感謝的人也太多太多，在此謹(jǐn)向所有關(guān)心、愛(ài)護(hù)、幫助我的人們表示最誠(chéng)摯的感謝與最美好的祝愿。 首先，我要感謝我的指導(dǎo)老師-教授，他從研究設(shè)計(jì)、實(shí)施開(kāi)展到論文撰寫(xiě)過(guò)程中給予我悉心的指導(dǎo)和學(xué)習(xí)生活中的關(guān)懷與幫助。在這幾年的學(xué)習(xí)中，我不管遇到什么問(wèn)題，他