病毒感染的檢查和防治課件.pptVIP

病毒學(xué)診斷 一 標(biāo)本的采集與送檢 基本原則與細(xì)菌的相似 但還要特別注意 對(duì)本身帶有雜菌或易受污染的標(biāo)本 分離培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用抗生素 低溫保存并盡快送檢 因病毒在室溫易失去活性 血清學(xué)診斷標(biāo)本應(yīng)采集發(fā)病初期和病后2 3w內(nèi)各一份血清 觀察其抗體的動(dòng)態(tài)變化 二 病毒的分離與鑒定 金標(biāo)準(zhǔn) 病毒的分離1 動(dòng)物接種2 雞胚培養(yǎng) 按病毒種類接種不同部位絨毛尿囊膜 天花病毒 痘苗病毒 HSV等尿囊腔 流感病毒 腮腺炎病毒等羊膜腔 流感病毒的初次培養(yǎng)卵黃囊 某些嗜神經(jīng)病毒3 細(xì)胞培養(yǎng) 病毒分離鑒定中最常用的方法 按其生長方式分為單層培養(yǎng)和懸浮細(xì)胞培養(yǎng)按來源 染色體特征及傳代次數(shù)等分為原代細(xì)胞 二倍體細(xì)胞和傳代細(xì)胞系 病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的指標(biāo) 1 細(xì)胞的變化細(xì)胞病變效應(yīng) cytopathiceffect CPE 有些病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖時(shí)可引起特有的細(xì)胞病變 細(xì)胞變圓 聚集 壞死 溶解或脫落等 鄰近的細(xì)胞相互融合形成巨細(xì)胞 融合細(xì)胞 如 麻疹病毒 巨細(xì)胞病毒 在培養(yǎng)細(xì)胞中形成胞質(zhì)或核內(nèi)包涵體 如狂犬病病毒 麻疹病毒2 紅細(xì)胞吸附 hemadsorption HAd 具有血凝素的病毒 流感病毒等 使受染細(xì)胞膜含有病毒血凝素抗原成分 能與紅細(xì)胞結(jié)合出現(xiàn)紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象 以檢測是否有病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖 3 干擾現(xiàn)象 interference 某些病毒感染細(xì)胞時(shí)不出現(xiàn)CPE Had等變化 但能干擾在其后感染的另一病毒的增殖 從而阻抑后者所特有的CPE 4 細(xì)胞代謝的改變培養(yǎng)液的PH改變 病毒的數(shù)量與感染性測定常用的方法 蝕斑測定法和50 組織細(xì)胞感染量 ID50或TCID50 空斑形成單位 PFU 可測定病毒數(shù)量 空斑 P1aque 是病毒在單層細(xì)胞中增殖并擴(kuò)散而形成的不易著色的病灶區(qū) 一般是由一個(gè)感染性病毒體大量復(fù)制形成 類似細(xì)菌的菌落 稱為空斑形成單位 病毒懸液中感染性病毒量以每毫升中的空斑形成單位數(shù)來表示 50 組織細(xì)胞感染量 TCID50 是病毒毒力測定的方法 應(yīng)用不同稀釋度的病毒懸液接種動(dòng)物 雞胚或細(xì)胞培養(yǎng) 引起50 發(fā)生病變或死亡的最小病毒量 可以估計(jì)病毒感染的強(qiáng)弱程度及含量 新分離病毒的鑒定 病毒核酸類型的測定DNA病毒和RNA病毒理化形狀的測定包括病毒顆粒大小及結(jié)構(gòu) 衣殼對(duì)稱類型 有無包膜等形態(tài)學(xué)觀察通過電鏡和免疫電鏡檢查血清學(xué)鑒定病毒型別的最后鑒定須靠血清學(xué)方法基因測序和生化對(duì)比 三 病毒感染的血清學(xué)診斷 中和試驗(yàn) neutralizingtest 病毒在活體內(nèi)或細(xì)胞培養(yǎng)中被特異性抗體中和而失去感染性的一種試驗(yàn) 可用來檢查患者血清中抗體的消長情況 也可用來鑒定未知病毒或研究病毒的抗原結(jié)構(gòu) 適用于人群免疫情況的調(diào)查 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) comolementfixationtest CFtest 用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原來檢測病人血清中相應(yīng)的補(bǔ)體抗體 血凝抑制試驗(yàn) hemagglutinatiainhibitiontest HItest 相應(yīng)的抗體與病毒結(jié)合后 阻抑了病毒表面的HA與紅細(xì)胞的結(jié)合 常用于粘病毒及乙型腦炎病毒感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查 也可鑒定病毒的型與亞型 凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)主要用于診斷HBV與乙型腦炎病毒等感染 四 病毒感染的快速診斷 形態(tài)學(xué)檢查1 電鏡和免疫電鏡檢查2 普通光學(xué)顯微鏡檢查 病毒蛋白抗原檢查1 免疫熒光法 IF 2 固相放射免疫測定 SPRIA 3 酶免疫測定 EIA 特異性IgM抗體的檢測 檢測病毒核酸1 核酸雜交技術(shù)斑點(diǎn)雜交 DNA印跡技術(shù)2 核酸擴(kuò)增技術(shù) 聚合酶鏈反應(yīng) polymerasechainreation PCR 連接酶鏈反應(yīng) ligasechainreation LCR 反轉(zhuǎn)錄PCR RT PCR 3 基因芯片技術(shù) genechip 特異性預(yù)防與治療 特異性防治是應(yīng)用獲得性免疫的原理 給機(jī)體注射或服用病原微生物抗原 包括類毒素 或特異性抗體以達(dá)到預(yù)防和治療的目的 這種方法稱為人工免疫 artificalimmunization 人工免疫分為人工主動(dòng)免疫和人工被動(dòng)免疫 人工主動(dòng)免疫 artificalactiveimmunization 將疫苗及類毒素 抗原 接種于人體 使機(jī)體主動(dòng)產(chǎn)生獲得性免疫力 主要用于預(yù)防 人工被動(dòng)免疫 artificalpassiveimmunization 輸入含有特異性抗體的免疫血清 純化免疫球蛋白抗體或細(xì)胞因子等免疫制劑 使機(jī)體立即獲得特異性免疫力的過程 2020 1 13 10 可編輯 一 人工主動(dòng)免疫 疫苗1 死疫苗 killedvaccine 用物理或化學(xué)方法將其殺死病原微生物 但仍保持其抗原性的一種生物制劑 如霍亂 百日咳 傷寒 鉤端螺旋體疫苗等 2 活疫苗 livingvaccine 通過毒力變異或人工選擇發(fā)而獲得的減毒或無毒株 或從自然界篩選得到的毒力弱毒或無毒株經(jīng)培養(yǎng)后制成的疫苗亦稱減毒疫苗 attenuatedvaccine 如BCG 鼠疫 脊髓灰質(zhì)炎等減毒活疫苗 死疫苗和活疫苗各有優(yōu)缺點(diǎn) 見下表 3 新型活疫苗 活疫苗與死疫苗的比較 區(qū)別點(diǎn)活疫苗死疫苗制品特點(diǎn)減毒或無毒的疫苗死菌 仍保持免疫原性制備方法通過非正常培養(yǎng)減毒株通過物理化學(xué)方法使病原體失活接種次數(shù)1次2 3次接種量量小量大接種反應(yīng)可在體內(nèi)增殖 類似于在體內(nèi)不增殖 可出現(xiàn)發(fā)熱 全輕型感染或隱性感染身或局部腫痛等反應(yīng)免疫的類型體液免疫和細(xì)胞免疫體液免疫免疫效果較好 維持長 1 5年 較差 維持短 0 5 1年 毒力回升有可能不可能安全性對(duì)免疫缺陷者有危險(xiǎn)安全性好疫苗穩(wěn)定性相對(duì)不穩(wěn)定相對(duì)穩(wěn)定保存不宜保存 4 存活2w 宜保存 4 存活1年真空凍干可長期保存生產(chǎn)和成本生產(chǎn)較復(fù)雜 成本高生產(chǎn)簡單 成本低 4 基因工程疫苗利用基因工程方法獲得帶有病原體保護(hù)性抗原表位的目的基因 將其導(dǎo)入原核或真核表達(dá)系統(tǒng) 表達(dá)該種保護(hù)性抗原 提純后研制成疫苗 5 重組載體疫苗將編碼某一蛋白抗原的基因轉(zhuǎn)入減毒的病毒或細(xì)菌而制成的疫苗 6 合成疫苗根據(jù)病原體抗原的氨基酸序列合成的多肽作為疫苗 7 亞單位疫苗利用微生物的某種表面結(jié)構(gòu)成分 抗原 制成不含有核酸 能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗體的疫苗 稱為亞單位疫苗 8 DNA疫苗 9 轉(zhuǎn)基因植物疫苗將編碼某一病原體保護(hù)性抗原的基因轉(zhuǎn)入植物并在植物中表達(dá) 當(dāng)人們吃這些植物性食物的同時(shí) 完成一次預(yù)防接種 10 治療疫苗以治療為目的的一種新興疫苗 病毒感染的治療 抗病毒化學(xué)試劑1 核苷類藥物 無環(huán)鳥苷 阿昔洛韋 丙氧鳥苷 庚昔洛韋 阿糖腺苷 疊氮胸苷 雙脫氧肌苷 拉米呋定等 作用機(jī)制 抑制病毒基因復(fù)制模擬核苷成分摻入病毒基因組競爭病毒復(fù)制酶 抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄2 非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑nevirapine 第一個(gè)新合成的非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑 1996年獲準(zhǔn)用于治療HIV pyridone 3 蛋白酶抑制劑賽科納瓦 saquinavir 1995年批準(zhǔn)的第一個(gè)蛋白酶抑制劑英迪納瓦 indinavir 1996年批準(zhǔn)的新一代蛋白酶抑制劑 用于HIV4 其他抗病毒藥物金剛烷胺 amantadine 和甲基金剛烷胺 rimantadine 主要用于治療甲型流感 甲酸磷霉素 phosphonoformicacid PFA 可抑制多種皰疹病毒 干擾素和干擾素誘生劑的應(yīng)用 干擾素主要用于甲 乙 丙型肝炎 HSV 乳頭瘤病毒和鼻病毒等感染的治療 IFN誘生劑polyI C 甘草甜素 蕓芝多糖中草藥防治病毒感染黃芪 板藍(lán)根 大青葉等能抑制多種病毒基因治療 genetherapy 目前還處于研究階段 主要有如下幾種治療方法 反義寡核苷酸 antisenseoligonucleotide asON 根據(jù)病毒基因組已知序列 設(shè)計(jì)能與病毒基因的某段序列互補(bǔ)的寡核苷酸 稱為反義