過(guò)柱子與點(diǎn)板.doc

過(guò)柱子與點(diǎn)板在實(shí)驗(yàn)室的一個(gè)多月學(xué)習(xí)的最多的就是過(guò)柱子跟點(diǎn)板了，過(guò)柱子與點(diǎn)板其實(shí)原理是差不多的，都是根據(jù)極性的不同從而達(dá)到判別的效果。過(guò)柱子 常說(shuō)的過(guò)柱子應(yīng)該叫柱層析分離，也叫柱色譜。我們常用的是以硅膠或氧化鋁作固定相的吸附柱。1、 選柱子 從理論上講應(yīng)該是粗長(zhǎng)的好。柱子長(zhǎng)了，相應(yīng)的塔板數(shù)就高。柱子粗了，上樣后樣品的原點(diǎn)就?。ǚ从吃谥由暇褪菢悠穼颖容^薄），這樣相對(duì)的減小了分離的難度。而我們現(xiàn)在見(jiàn)到的柱子徑高比一般在 1:5-10。2、 拌硅膠 在產(chǎn)品溶液中加入一定量的硅膠，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋蒸至干3、 裝柱子裝柱子的方法有兩種一種是干法裝柱，另一種是濕法裝柱。濕法裝柱是先把硅膠用適當(dāng)?shù)娜軇┌鑴蚝?，再填入柱子中，然后再加壓用淋洗劑走柱子，本法最大的?yōu)點(diǎn)是一般柱子裝的比較結(jié)實(shí)，沒(méi)有氣泡。 干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠，然后再輕輕敲打柱子兩側(cè)，至硅膠界面不再下降為止，然后再填入硅膠至合適高度，最后再用油泵直接抽，這樣就會(huì)使得柱子裝的很結(jié)實(shí)。而我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室一般都是用干法裝柱，首先稱量30-70 倍于上樣量;如果極難分,也可以用 100 倍量的硅膠（書(shū)中寫(xiě)硅膠量是樣品量的 30-40 倍,具體的選擇要具體分析）.如果所需組分和雜質(zhì)分的比較開(kāi)(是指在所需組分 Rf 在 0.2-0.4,雜質(zhì)相差 0.1 以上) , 就可以少用硅膠。將硅膠倒入柱子當(dāng)中，拍打柱子的外壁使硅膠壓緊，接著加入拌好的硅膠，同樣拍打外壁壓緊，其上再加入一些無(wú)水硫酸鈉（有吸水的作用），再在其上加上一些棉花，防止倒入吸附劑時(shí)將柱子沖空。4、 選擇吸附劑 一般根據(jù)藥品點(diǎn)板時(shí)選用的溶劑極性的1倍的吸附劑。極性小的用乙酸乙酯:石油醚系統(tǒng);極性較大的用甲醇:二氯甲烷系統(tǒng);極性大的用甲醇:水:正丁醇:醋酸系統(tǒng).要使所需點(diǎn)在 Rf 值在 0.2-0.3 左右的比較好.常用溶劑的極性順序:石油醚環(huán)己烷/己烷苯乙醚氯仿乙酸乙酯 正丁醇丙酮乙醇甲醇水.5、 壓實(shí) 裝柱完后,加入更多的石油醚,用雙聯(lián)球或氣泵加壓,直至流速恒定. 柱床約被壓縮至 9/10 體積.無(wú)論走常壓柱或加壓柱,都應(yīng)進(jìn)行這一步,可使分 離度提高很多,且可以避免過(guò)柱時(shí)由于柱床萎縮產(chǎn)生開(kāi)裂. 6、 收集及檢測(cè)用硅膠作固定相過(guò)柱子的原理是一個(gè)吸附與解吸的平衡。所以如果樣品與硅膠的吸附比較強(qiáng)的話，就不容易流出。這樣就會(huì)發(fā)生，后面的點(diǎn)先出，而前面的點(diǎn)后出。這時(shí)可以采用氧化鋁作固定相。另外，收集的試管大小要以樣品量而定，特別是小量樣品，如果用大試管，可能一根就收到了三個(gè)樣品。如果都用小試管那工作量又太大。在收集的過(guò)程中要注意對(duì)收集來(lái)的溶液進(jìn)行及時(shí)的檢測(cè)，檢測(cè)的方法就是TCL薄層色譜，一般點(diǎn)3個(gè)點(diǎn)，兩個(gè)收集的溶液的點(diǎn)（不能點(diǎn)的太濃影響觀察的效果），這兩個(gè)點(diǎn)其中一個(gè)與原料點(diǎn)的兩個(gè)點(diǎn)中的一個(gè)點(diǎn)重合（這樣更有利于對(duì)照）。將點(diǎn)好的板放在合適的展開(kāi)劑中跑板，在點(diǎn)爬到2-8毫米時(shí)，將板放在熒光燈下觀察，直到原料點(diǎn)消失，說(shuō)明收集完成。7、 處理 將收集來(lái)的溶液蒸發(fā)濃縮，降溫結(jié)晶，抽濾，烘干，裝袋，檢測(cè)產(chǎn)品純度。點(diǎn)板 （TCL) 最近剛進(jìn)實(shí)驗(yàn)室，用TLC對(duì)反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)，但是關(guān)于展開(kāi)劑的資料不多，我們實(shí)驗(yàn)室大多就是兩個(gè)體系:石油醚/乙酸乙酯，二氯甲烷/甲醇，其他的就很少了。薄層色譜（TLC）是一種非常有用的跟蹤反應(yīng)的手段，還可以用于柱色譜分離中合適溶劑的選擇。薄層色譜常用的固定相有氧化鋁或硅膠，它們是極性很大（標(biāo)準(zhǔn)）或者是非極性的（反相）。流動(dòng)相則是一種極性待選的溶劑。在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)中，都將使用標(biāo)準(zhǔn)硅膠板。將溶液中的反應(yīng)混合物點(diǎn)在薄板上，然后利用毛細(xì)作用使溶劑（或混合溶劑）沿板向上移動(dòng)進(jìn)行展開(kāi)。根據(jù)混合物中組分的極性，不同化合物將會(huì)在薄板上移動(dòng)不同的距離。極性強(qiáng)的化合物會(huì)“粘”在極性的硅膠上，在薄板上移動(dòng)的距離比較短。而非極性的物質(zhì)將會(huì)在流動(dòng)的溶劑相中保留較長(zhǎng)的時(shí)間從而在板上移動(dòng)較大的距離。化合物移動(dòng)的距離大小用Rf值來(lái)表達(dá)。這是一個(gè)位于01之間的數(shù)值，它的定義為：化合物距離基線（最先點(diǎn)樣時(shí)已經(jīng)確定）的距離除以溶劑的前鋒距離基線的距離。一般步驟1、 割板 通常，買(mǎi)來(lái)的硅膠板都是方形的玻璃板，必需用鉆石頭玻璃刀按照模板的形狀進(jìn)行切割。在切割玻璃之前，用尺子和鉛筆在薄板的硅膠面上輕輕地標(biāo)出基線的位置（注意不要損壞硅膠面）。借助鋒利的玻璃切割刀和一把引導(dǎo)尺，你便可方便地進(jìn)行玻璃切割。當(dāng)整塊玻璃被切割后，你就可以進(jìn)一步將其分成若干獨(dú)立的小塊了。（一開(kāi)始比較生疏，割壞了好多板。）2、 點(diǎn)板 我們?cè)趯?shí)驗(yàn)時(shí)經(jīng)常是點(diǎn)三個(gè)點(diǎn)從左往右依次是原料點(diǎn)，原料點(diǎn)+產(chǎn)物點(diǎn)，產(chǎn)物點(diǎn)。（這么做是為了更好的判別反應(yīng)的進(jìn)程，判別反應(yīng)是否完成）3、 選擇合適展開(kāi)劑展開(kāi)劑的選擇通常是要試驗(yàn)好幾次，先是大致了解產(chǎn)物的極性，然后按照不同的比例進(jìn)行選擇合適的溶劑?；衔镌诒“迳弦苿?dòng)距離的多少取決于所選取的溶劑不同。強(qiáng)極性溶劑： 甲醇乙醇異丙醇 中等極性溶劑： 乙氰乙酸乙酯氯仿二氯甲烷乙醚甲苯 非極性溶劑： 環(huán)己烷，石油醚，己烷，戊烷 常用混合溶劑：石油醚/乙酸乙酯 1:1，2:1,3:1,5:1二氯甲烷/甲醇 1:1，3:1,5:1有的時(shí)候也直接選用乙酸乙酯，或者直接用甲醇一個(gè)好的溶劑體系應(yīng)該使混合物中所有的化合物都離開(kāi)基線，但并不使所有化合物都到達(dá)溶劑前端， Rf值最好在0.150.85之間。（擺放板時(shí)要注意板要擺正，不能歪在試劑瓶中，另外在試劑瓶中放一下片濾紙）4、 讀板一般情況下會(huì)出現(xiàn)一些點(diǎn)，那是由于各個(gè)物品在溶劑中的極性不同，它跑的位置也不相