梅毒TPPASOP.doc

梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）1.原理梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）是用超聲裂解梅毒螺旋體抗原致敏明膠粒子，致敏粒子與待檢血清（漿）中的梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可見的顆粒凝集。2. 方法2.1儀器耗材：1) TPPA檢測試劑盒2) 移液器3) 保濕盒2.2檢測流程：1) 試劑準(zhǔn)備：試驗(yàn)前30分鐘將待檢標(biāo)本和試劑從冰箱中取出，恢復(fù)至室溫。2) 加稀釋液：每份樣本作4孔，用移液器將血清稀釋液滴入微量反應(yīng)板第1孔（100l），從第2孔-第4孔各滴25l。3) 樣本稀釋：用移液器取待檢血清25l置第1孔中，然后以2n 的方式從第1孔稀釋至第4孔。4) 加對(duì)照液：用移液器在第3孔滴入25l未致敏粒子；在第4孔滴入25l致敏粒子。5) 混合：以不會(huì)導(dǎo)致微量反應(yīng)板內(nèi)容物濺出的強(qiáng)度混合30秒鐘。6) 反應(yīng)：加蓋置濕盒內(nèi)，于室溫（15-30）下水平靜置。2小時(shí)后觀察并記錄結(jié)果。附：重吸收試驗(yàn)對(duì)于未致敏粒子和致敏粒子均顯示以上凝集的樣品，要按照下列程序在完成吸收操作的基礎(chǔ)上進(jìn)行再試驗(yàn)。1) 取用定量的溶解液調(diào)制好的未致敏粒子0.95ml至小試管中。2) 加入樣品50l混合，于室溫（15-30）下放置20分鐘以上。3) 離心分離（2000rpm、5分鐘），然后分別吸取上清液【吸收完畢的稀釋樣品（1：20）】50l至反應(yīng)板第3孔中，特別注意不要混入粒子。4) 從第4孔以后，要預(yù)先各滴入25l血清稀釋液，從第3孔至最后一孔用移液器以2n 的方式進(jìn)行稀釋。5) 之后的步驟同上。3.結(jié)果3.1結(jié)果判讀首先觀察未致敏粒子反應(yīng)孔是否出現(xiàn)凝集（第3孔），判斷試驗(yàn)有效性后，再根據(jù)致敏粒子與標(biāo)本反應(yīng)孔（第4孔）與致敏粒子是否產(chǎn)生1+ 2+凝集反應(yīng)凝集反應(yīng)，判斷結(jié)果。如未致敏粒子反應(yīng)孔出現(xiàn)凝集（第3孔）為無效試驗(yàn)，需要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重吸收試驗(yàn)后再進(jìn)行檢測。+ ：產(chǎn)生均一的凝集，凝集粒子在底部，呈膜狀延展；+ ：粒子環(huán)明顯變大，其外周邊緣不均勻且雜亂的凝集在周圍； ：粒子形成小環(huán)狀，呈現(xiàn)出外周邊緣均勻且平滑的圓形；- ：粒子呈紐扣狀聚集，呈現(xiàn)出外周邊緣均勻且平滑的圓形。3.2結(jié)果報(bào)告陽性：未致敏粒子反應(yīng)孔（第3孔）不出現(xiàn)凝集，致敏粒子反應(yīng)孔（第4孔）出現(xiàn)1+2+凝集反應(yīng)，報(bào)告陽性。陰性：未致敏粒子反應(yīng)孔（第3孔）和致敏粒子反應(yīng)孔（第4孔）均未出現(xiàn)凝集反應(yīng)，報(bào)告陰性。弱陽性：未致敏粒子反應(yīng)孔（第3孔）不出現(xiàn)凝集，致敏粒子反應(yīng)孔（第4孔）出現(xiàn)凝集反應(yīng)，報(bào)告弱陽性。4.臨床意義1) 梅毒螺旋體一旦感染人體后約2-4周即可檢測到抗梅毒螺旋體抗體，此抗體特異性高可達(dá)98%以上，所以檢測到梅毒螺旋體抗體陽性可確證為現(xiàn)在或既往有過梅毒螺旋體感染。2) 患者感染梅毒螺旋體后產(chǎn)生的抗梅毒螺旋體抗體一般能保持終生，梅毒患者即使經(jīng)過正規(guī)療程的抗梅毒治療后，梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)仍可陽性，故梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)不能作為療效觀察的指標(biāo)。3) 梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)亦不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，試驗(yàn)陽性結(jié)果應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)，以判斷是否為梅毒現(xiàn)癥感染。5.注意事項(xiàng)1) 若未致敏粒子孔出現(xiàn)凝集反應(yīng)，血標(biāo)本需要進(jìn)行吸收后再重復(fù)試驗(yàn)，或改用其他方法復(fù)檢。2) 試驗(yàn)加入致敏粒子、未致敏粒子后，應(yīng)以不會(huì)導(dǎo)致微量反應(yīng)板內(nèi)容物濺出的強(qiáng)度混合。3) 紅細(xì)胞及其他血液的有形成分會(huì)影響結(jié)果，所以血液標(biāo)本應(yīng)通過離心分離血清。4) 致敏粒子以及未致敏粒子在使用之前均應(yīng)混合均勻后再使用。5) 微量