「光合細菌的培養(yǎng)及應用方法」.doc

光合細菌的培養(yǎng)及應用方法光合細菌(簡稱PSB)是地球上最早出現(xiàn)具有原始光能合成體系的原核生物，是一大類在厭氧條件下進行不放氧光合作用的細菌的總稱，廣泛存在于地球生物圈的各處。光合細菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的應用主要有以下五個方面：作為養(yǎng)殖水質凈化劑；作為飼料添加劑；用于魚 、蝦、貝幼體的培育；作為動物性生物餌料的餌料；防治魚病。一、培養(yǎng)工具的消毒方法1加熱消毒法：利用高溫殺死微生物的方法。（1）直接灼燒：此法可直接把微生物燒死，滅菌徹底，但只適用于小型金屬或玻璃工具的消毒。（2）煮沸消毒：一般煮沸510分鐘，適用于小型容器、工具的消毒。（3）烘干箱消毒：亦稱為恒溫干燥箱消毒法。 2化學藥品消毒法：適用在批量培養(yǎng)中，大型容器、工具、玻璃鋼水槽和水泥池中。（1）酒精：濃度為70的酒精常用于中、小型容器的消毒。用紗布蘸酒精在容器、工具的表面涂抹，10分鐘后，用消毒水沖洗兩次即可。（2）高錳酸鉀：按300ppm配成高錳酸鉀溶液，把洗刷潔凈的容器、工具放在溶液中浸泡5分鐘，取出，再用消毒水沖洗2次3次即可。二、光合細菌的培養(yǎng)條件1、 營養(yǎng)條件光合細菌細胞體構成元素主要有：碳、氫、氧、氮、磷、鉀、鈉、鎂、鈣、硫和一些微量元素等，它們也是所有生物細胞構成的主要物質。一般情況下，比重：水占80-90、無機鹽1-1.5、蛋白質7-10、脂肪1-2、糖類和其它有機物1-1.5。其中干細胞含碳45-55、氫5-10、氧20-30、氮5-13、磷3-5、其它礦物元素3-5。光合細菌的細胞膜具有半透性，能選擇性地讓營養(yǎng)成分按一定需要進細胞內，在酶的作用下合成自己的細胞組分并促進分裂新的個體。營養(yǎng)元素的全面合理的搭配,是培養(yǎng)高產(chǎn)光合細菌的關鍵。根據(jù)這一要求,鄭州生物材料公司選用多種光合細菌生長必需的原料，科學配方，經(jīng)特殊加工而成的光合細菌發(fā)生劑（培養(yǎng)基），基本符合光合細菌生長繁殖所需的營養(yǎng)要求，無毒無副作用，使用安全，固狀結晶體便于包裝和運輸，而且有2年的保質期。光合細菌培養(yǎng)基是光合細菌生長繁殖所需各種營養(yǎng)元素的復合體。每種原料都能得以充分利用，最大限度地生產(chǎn)高濃度的菌液，因此，單位效價的光合細菌菌液生產(chǎn)成本低、質量好，這無論是對于用戶、經(jīng)銷商還是廠家都有很大的益處，對在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的推廣和普及將產(chǎn)生深遠的影響。2.環(huán)境條件有了營養(yǎng)全面的光合細菌培養(yǎng)基，只是滿足了其生長的內在條件，并不能培養(yǎng)出光合細菌菌液。還需有適宜光合細菌生長的環(huán)境條件，才能培養(yǎng)出優(yōu)質的菌液。環(huán)境條件具體有以下幾個方面：（1）.培養(yǎng)介質：含菌量低的清潔淡水、海水或加粗食鹽的淡水。從經(jīng)濟、實用的角度考慮，地下水含菌量低，為最佳水源；清潔的地表水也可使用；含氯量較高的自來水應敞口放置兩三天或調pH值至偏堿后使用；蒸餾水及純凈水固然很好，但成本太高，可用于提純菌種。（2）.酸堿度（pH）值：7.5-8.5最佳（適應范圍6-10）。（3）.水硬度：pH值中性時10度以下。即調節(jié)pH值至8.0左右時，培養(yǎng)介質中的乳白色沉淀物不宜過多。（4）.溫度：25-34最佳（適應范圍15-40）。（5）.光照強度:3000LX-4000LX最佳。即每25千克菌液需用60瓦左右的電燈泡進行光照，當然，太陽光最好且無需成本。（6）.透氣性：密閉、敞口皆可培養(yǎng)，密閉效果更好。（7）.容器：透明或白色容器；大規(guī)模培養(yǎng)可用土池、水泥池等，菌液深度30厘米以下為佳。三、接種培養(yǎng)基配制好后，應立即進行接種。光合細菌生產(chǎn)性培養(yǎng)的接種量比較高， 一般為2050，即菌種母液量和新配培養(yǎng)量之比為1：4（20）1：1（50），且不 應低于20，尤其微氣培養(yǎng)接種總量應高些，否則，光合細菌在培養(yǎng)液中很難占絕對優(yōu)勢。四、光合細菌的生產(chǎn)工藝1、培養(yǎng)液的配制將光合細菌培養(yǎng)基取一小包（0.5公斤），放入一個干凈的容器中，加入100公斤水，攪拌均勻，直到培養(yǎng)基溶化為止。注意事項：水源一定要選擇好，含菌量較低的清潔淡水、海水或加粗食鹽的淡水。從經(jīng)濟、實用的角度考慮，地下水（井水）含菌量低，為最佳水源，另外，若當?shù)刈詠硭容^低，也可用，效果很好；清潔的地表水也可使用；含氯量較高的自來水應敞口放置兩三天或調pH值至偏堿后使用。容器：少量生產(chǎn)可用透明度較高的白色或透明塑料桶、玻璃容器。大量生產(chǎn)可用水泥池、水泥船，也可臨時開挖土池，墊上雙層塑料膜防漏防渾濁，培養(yǎng)液的深度為30厘米最佳。 2、培養(yǎng)方式有以下二種： （1）做小規(guī)模培養(yǎng) 容器為：1.25升的飲料瓶，即小規(guī)模生產(chǎn)方法，由于飲料瓶的量小，瓶子透明度好，又密封，所以培養(yǎng)環(huán)境好，需要的接種量也少， 比較簡單。 設備為：光照箱，用一個大的紙箱，放1個40瓦的白熾燈懸掛在箱子的頂部？（注意防火），紙箱內壁四周，擺裝好了培養(yǎng)液并接了種的飲料瓶，這樣，既達到了保溫到2540度的效果，又達到了光照的效果。較大的箱子要用60瓦的白熾燈，一般一個箱子，可 放這種飲料瓶8個以上，即一次可生產(chǎn)約10公斤/箱。 燈泡與瓶子的距離不超過20厘米。夏天，可撤去紙箱，以防溫度過高，并在紙箱四周鉆孔以散熱。 操作規(guī)程如下： 配料：培養(yǎng)液和液體菌種4：1 培養(yǎng)：在箱子內，打開白熾燈，照幾天即可，一般可達到溫度在35度，控制在30-40度之內，第一次培養(yǎng)可能需要5天以上，每天早晚搖晃兩次，一般只需要2天即可長成深紅色。 成熟標準：以培養(yǎng)液長成深紅色為準，這時一般成品的光合細菌濃度可達到30-50億/毫升。（2）大規(guī)模培養(yǎng)：利用太陽能大規(guī)模培養(yǎng)（以培養(yǎng)2噸菌液為例）：選擇陽光充足的地方，開挖一土池（長5米、寬1.8米、深0.4米），墊上塑料薄膜，然后再鋪上桶狀塑料薄膜，并將其一端密封，從另一端加入1.8噸配制好的培養(yǎng)液，和0.2噸的菌種，一共2噸，排盡薄膜中空氣后，再將該端密封。保持適當?shù)臏囟龋烊绻麥囟冗^低，搭建透明塑料薄膜棚增溫。5天后，菌液培養(yǎng)成熟。五、培養(yǎng)管理光合細菌的培養(yǎng)日常管理包括測試、觀察和分析處理等三個方面。1.測試（1）攪拌：光合細菌培養(yǎng)過程中必須攪拌或充氣，其作用 是幫助沉淀的光合細菌上浮獲得光照，保持菌細胞的良好生長，每天至少搖動3次，定時進行。（2）調節(jié)光照度：培養(yǎng)光合細菌需要連續(xù)進行照明，白天可利用太陽光源培養(yǎng)，晚間則需人工光源照明，或完全利用人工光源培養(yǎng)。人工光源一般使用碘鎢燈或白熾燈泡。一般培養(yǎng)光照強度控制在2000lx5000lx之間。（3）調節(jié)溫度：在光合細菌的培養(yǎng)過程中，一般在2339均能正常生長繁殖，但如果溫度過低，可以把培養(yǎng)容器放在箱子里，利用白熾燈炮散發(fā)的熱提高箱內溫度，并根據(jù)需要調整箱子的密封程度達到調節(jié)溫度的目的。（4）酸堿度的測定和調整為了延長光合細菌的指數(shù)生長期，提高培養(yǎng)基的利用率和單位水體的產(chǎn)量，測定和調整pH值是一項重要措施。一般采用加酸的辦法降低菌液的酸堿度，醋酸、乳酸均可使用，而最常用的是醋酸。在日常的管理工作中，必須每天測定菌液的pH值，當pH值上升超出最適范圍，即加酸調整。（5）測定光密度（O.D.）值光密度值和細胞干重之間是近似線性關系，這種相關關系常用來測定培養(yǎng)物的濃度。首先根據(jù)測定的數(shù)據(jù)畫出相關的標準曲線圖，然后測定菌液的光密度值，即可根據(jù)標準曲線大致估算出菌細胞的濃度。光密度值常用分光光度計測定。在日常管理工作中，通過測定菌液的光密度，可以了解光合細菌的生長繁殖情況。2.生長情況的觀察和檢查在培養(yǎng)過程中，可以通過觀察菌液的顏色及其變化來了解光合細菌生長繁殖的大致情況。菌液的顏色是否正常，接種后顏色是否由淺迅速變深，均反映光合細菌生長是否正常以及繁殖速度的快慢。此外，通過測定菌液的光密度值及其變化情況，能更準確地了解菌體的生長繁殖情況。接種后，光密度值迅速加大，表示生長正常、繁殖迅速。如果光密度值不增加以及菌液顏色不正常、出現(xiàn)菌體附壁等現(xiàn)象，說明培養(yǎng)效果不良。必要時還可以通過顯微鏡檢查，了解細菌生長情況。3.問題的分析和處理：通過日常管理、檢測、觀察和檢查，了解光合細菌的生長情況，就可以結合當時環(huán)境條件的變化進行分析，找出影響光合細菌正常生長的原因，采取相應的對策。影響光合細菌生長的原因很多，從內因看菌種本身是否優(yōu)良，即接種的母種的質量是否優(yōu)良；從外因看，不外乎是光照、溫度、營養(yǎng)、敵害、厭氣程度等方面。六、光合細菌的培養(yǎng)液顏色解析 平時，在我們培養(yǎng)光合細菌的生產(chǎn)實踐中，經(jīng)常會遇到培養(yǎng)液出現(xiàn)不同的顏色，自然界的光合細菌分別屬于紅螺菌科、著色菌科、綠桿菌科、和綠色絲狀菌科等四個科目，一共23屬，80余種菌侏。目前水產(chǎn)養(yǎng)殖上用得最為廣泛的種類是紅螺菌科，特別是紅色假單孢菌屬中的種類。這類光合細菌在凈化水質、防治疾病和促進水產(chǎn)動物生長方面有著較明顯的效果。1、光合細菌培養(yǎng)液的顏色。 光合細菌的光合色素包括細菌葉綠素和胡蘿卜素，菌體因各種色素含量的不同而呈現(xiàn)出不同的顏色。一般紅螺菌科和著色菌科的菌呈現(xiàn)出紅色、粉紅色、橙色、紫色或茶褐色；綠桿菌科和綠色絲狀菌科的菌呈現(xiàn)出綠色。但由于培養(yǎng)條件的不同，其顏色在此基礎上仍會有變化：如球形紅色假單孢菌和莢膜紅色假單孢菌的厭氧液體培養(yǎng)液呈茶褐色，而在半好氧（微厭氧）狀態(tài)下培養(yǎng)液呈紅色。這是因為由于氧的存在，對光合細菌色素的合成有十分明顯的抑制作用。下表為水養(yǎng)殖中常用的紅色假單孢菌屬的幾個種在不同培養(yǎng)條件下的呈色反應：表一、紅螺菌科紅假單孢菌屬中的幾個種在厭氧條件與半好氧條件下液體培養(yǎng)物的顏色比較菌種名稱厭氧液體培養(yǎng)物的顏色半好氧液體培養(yǎng)物的顏色R. gelatinosa青桃色至深黃褐色無色至淺黃褐色R. capsulata淺黃褐色至深褐色深紅至紫紅色（若空中振蕩幾小時成紅色）R. sphaeroides初為淡綠褐色，后為暗褐色獨特的紅色（在空氣中振蕩幾小時，厭氧下的褐色也轉變?yōu)榧t色）R. palustris初為淡粉紅色，后成紅至褐紅色，老的為暗紅褐色無色至粉紅色R. viridis最初為黃綠色，以后綠色至橄欖綠色無色至淡黃綠色。2、生產(chǎn)實踐中光合細菌培養(yǎng)液顏色變化的分析：很多客戶一般在培養(yǎng)的開始期，如頭幾天會出現(xiàn)黃褐色，或淺黃色，如果堅持培養(yǎng)下去，而不是就此倒掉，最終仍可以培養(yǎng)出外觀質量較好的紅色菌液來。從上表也可以看出，往往是最后才變成紅色。很多客戶往往出現(xiàn)，同樣的操作，同一批產(chǎn)品，為什么有的培養(yǎng)容器中會產(chǎn)生綠色的溶液顏色。這時，您可能要檢查一下，是否容器密封得太死，最好是有一點氧氣進入會更好。從上表也可以看出，在半好氧的條件下，往往可以得到比較鮮艷的紅色產(chǎn)品。所以培養(yǎng)時，最好能進入一次空氣，或在容器中留一部分空氣，一來可以保持半好氧狀態(tài)，二來也便于搖晃均勻。如果最終培養(yǎng)成為了綠色的液體，這時，培養(yǎng)液中的營養(yǎng)也已消耗殆盡了，只是不能作為商品出售，可以自用（也是光合細菌）。另外，溫度高，光照強的條件下，容易得到綠色菌，這是因為此時的條件容易造成水體缺氧，從而引起綠色菌的生長優(yōu)勢?？傊玫筋伾r艷的紅色菌，就必須注意以下幾個條件，1、注意要保持半好氧培養(yǎng)的條。2、溫度光照不要太強。3、出現(xiàn)一點綠色也不要灰心，要及時采取措施，如增加供氧，遮蔭降溫等，并堅持培養(yǎng)下去。4、平時注意用燈泡和紙箱的培養(yǎng)方式，不間斷地培養(yǎng)一些菌種，因為必竟這種培養(yǎng)的方式得到的培養(yǎng)液的質量好，菌體穩(wěn)定。七、光合細菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應用技術 1、凈化水質 由于高密度水產(chǎn)養(yǎng)殖的水體中含有大量的魚類糞便和殘餌，以及魚藥的殘留物，它們腐敗后產(chǎn)生的氨態(tài)氮、硫化氫和一些有害物質，直接污染水體和底泥。輕度污染可造成魚類生活不適，餌料系數(shù)增高，生長緩慢，積累到一定程度后，可使水體底部缺氧的情況下，PSB能有效地將氨態(tài)氮、硫化氫等有害物質吸收，組成菌體本身，從而提高水體中溶氧含量，調節(jié)pH。水體的富營養(yǎng)化亦可滋生大量的病原微生物，使魚類感染發(fā)病。施用PSB后，還能抑制其它病原菌的生長，從而達到凈化水質，使魚類健康生長的目的。 2、維護水體微生態(tài)平衡 水產(chǎn)養(yǎng)殖場的水體中存在著各種各樣的微生物，有些是有益的，有些是有害的；也有些是處于中間狀態(tài)的叫“條件致病微生物”，即正常情況下，這類微生物不致病，遇水質污染，魚類免疫功能下降時，它們便大量繁殖危害魚類。 通常人們采用消毒殺菌劑來控制，但隨著施用次數(shù)的增加，病原微生物的耐藥性也相應地增強，為了達到預防和治療的效果，每次施用的劑量不得不逐漸加大，這不僅增加了用藥成本，而且還污染了水體，造成水產(chǎn)品質量下降，甚至不能食用。 如何控制病原微生物的生長繁殖，又不使其不產(chǎn)生抗藥性，不污染水體呢？答案是現(xiàn)成的，用光合細菌預防魚病，完全可克服消毒殺菌劑的缺點，它不僅可降解或清除水體中包括魚藥在內的有害化學物質，占絕對優(yōu)勢的光合細菌還可與病原微生物爭奪營養(yǎng)、空間，使其無法進行大量生長繁殖，同時還不存在病原微生物耐藥性問題，從而不易形成致病的環(huán)境條件，魚類也就不易發(fā)病。 魚類的病害防治原則是：防重于治。只有在日常的漁業(yè)生產(chǎn)中，維持水體中微生態(tài)系統(tǒng)平衡，使有益微生物始終占絕對優(yōu)勢，盡量不給病原微生物有大量生長繁殖的機會，才是健康養(yǎng)殖的出路之一，如果平時不能有效地預防，到了出現(xiàn)癥狀再去治療，包括魚藥成本在內的重大生產(chǎn)損失將是不可避免的。 3、培養(yǎng)蜉蝣動物作餌料 PSB的菌體細胞營養(yǎng)很豐富，這正好是蜉蝣動物的優(yōu)質餌料，實踐證明，水體中的PSB越多，蜉蝣動物生長也就越旺盛，以蜉蝣動物為食的魚類增產(chǎn)效果也就越明顯 4、作為飼料添加劑 PSB的菌體細胞營養(yǎng)豐富，并含有大量的生理活性物質，可直接拌入飼料中投喂，除增加營養(yǎng)，降低飼料系數(shù)外，還可起到刺激動物免疫系統(tǒng)，增強消化和抗病能力，促進生長的作用。 5、間接增氧作用 PSB生長繁殖時，不需要氧氣，也不釋放氧氣，它是通過吸收水體中的耗氧因子，而產(chǎn)生了間接地增加氧氣的作用。八、光合細菌在養(yǎng)殖和種植上的用法用量 （一）PSB在水產(chǎn)及畜禽養(yǎng)殖中的應用劑量及注意事項。 PSB對各種水產(chǎn)養(yǎng)殖動物都有益，尤其是育苗階段的效果特別地明顯，具有成活率高于對照2060%，用于成魚育肥，增產(chǎn)20%左右，餌料系數(shù)下降20%左右，個體增重15%，且無任何副作用。 育苗用量：每平方米用100克。間隔10天用一次。 魚育肥：首次用7公斤一畝，以后用45公斤/畝，間隔15天用一次。 魚苗或病魚藥?。河霉夂霞毦♂?0倍，把魚苗或病魚放入游15分鐘即可。 藥浴后，可使藥浴魚蝦成活率提高90%，如患粘細菌病、爛鰓病、打印病后成活60-100%，患水霉病、赤鰭病、擦傷病后成活近100%且無任何藥浴副作用。 飼料中用量：魚苗5%，成魚3%，禽畜3%-5%，現(xiàn)拌現(xiàn)喂，喂水添加3%。現(xiàn)拌現(xiàn)喂。 施用方法：適當用水稀釋后全池灑勻，若先用生石灰后2小時，再用PSB則效果更好。 注意事項：不可與消毒殺菌劑同時使用，水體消毒須1周后方可使用。晴天水溫在20度以上時使用效果較好。液體PSB拌入料中后應于當天用完。酸性水體易使魚生病，且不利于PSB生長，應常用生石灰調節(jié)水體pH值。 （二）在種植業(yè)上的應用：水稻、小麥：每次畝用5千克葉面噴施。水稻秧苗期、孕穗期各用一次；小麥冬肥、拔節(jié)期各用一次。油菜：基肥畝用15千克澆根。竄苔前畝用15千克葉面噴施。瓜果類蔬菜：每次畝用10千克，幼苗期稀釋澆根一次，現(xiàn)蕾期噴一次。葉菜類蔬菜：每次畝用20千克，生長期澆根或葉面噴施，7天用一次?；ɑ埽阂戚d后每畝40千克澆根，生長期每畝20千克噴施，15天一次。茶樹：播種基肥畝用80千克。冬肥畝用40千克澆根。萌發(fā)期前畝用20千克澆根，葉片生長期畝用15千克噴施，每15天一次。果樹：冬肥畝用40千克澆根。新葉長成后畝用20千克葉面噴施。（三）使用方法（1）將光合細菌菌液稀釋20-30倍全池均勻潑灑。（2）將菌液用沸石粉吸附或拌和細土后撒入池中。（3）將菌液拌和飼料后投喂。（4）將菌液稀釋10倍后，浸泡魚種。（5）拌種、澆根、葉面噴施。（四）.注意事項（1）不可與消毒殺菌劑混合使用，水體消毒須1周后方可使用。（2）使用前，將菌液光照10小時以上，使用效果更好。（3）晴天水溫20以上時使用效果較好。（4）拌入的飼料應于當天投喂完畢。（5）應靈活掌握用量和使用的連續(xù)性，因為光合細菌在水體中只有形成優(yōu)勢群落后，才能發(fā)揮最大的作用。宜春專利中心提供光合細菌發(fā)生劑。 （6）水體呈堿性時施用效果最好。酸性水體易使魚類生病，應常用生石灰或燒堿調節(jié)pH值至中性或偏堿程度。（7）光合細菌菌液不能用金屬器皿貯存。（8）培育魚苗時，在苗種入池前7天全池潑灑，以利于浮游生物生長。（9）植物萌發(fā)期，施用效果最好。九、光合細菌液體成品的保存方法 成品應放在低溫環(huán)境下，15度以下最好，夏季應放在涼爽的地方，并要保持一定的光照度，每天不低于2小時，這是因為PSB在剛剛結束培養(yǎng)時，正處于生長旺盛期，形成了很強的“生長慣性”，如果此時突然沒有了光照或光照很弱，經(jīng)510天后會出現(xiàn)光合作用失衡而導致大量死亡，使菌液發(fā)黑，并有惡臭，剛開始發(fā)黑時若施以適當光照，即可緩和。所以剛培養(yǎng)好的成品應盡量降溫，逐步降光照，以減少生長慣性，到了生長慣性很弱或沒有慣性時，PSB就進入了穩(wěn)定期，此時在陰涼避光處可保存6個月。 總之，保存期的長短主要取決于溫度、光度。通常您在正常的連續(xù)的生產(chǎn)及使用過程中，對PSB的的保存及留種無須做特別的處理，如：夏天在太陽下培養(yǎng)的產(chǎn)品就放于陽光下，可保2個月，可不斷地再培養(yǎng)，擴大，反復等。秋天，培養(yǎng)的最后一批產(chǎn)品可保1年之久。十、光合細菌的活菌計數(shù)和純種分離技術采用瓊脂固體培養(yǎng)基涂抹培養(yǎng)計數(shù)分離法。條件：無菌室、過濾空氣鼓風工作臺、平皿、接種針、固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、密封玻璃試管、高壓滅菌鍋、加熱器、培養(yǎng)箱等。步驟：（在無菌室內操作）1.將適量瓊脂固體培養(yǎng)基高壓蒸煮(120)20分鐘后，倒入若干個平皿冷卻到45以下，制成固體培養(yǎng)基待用。2.取待測光合細菌菌液，分別用蒸餾水以10萬倍、50萬倍、100萬倍、500萬倍、5000萬倍、10000萬倍 稀釋。3.分別從每個稀釋倍液中取1毫升的樣本各10個，均勻涂布于貼好相應標簽的平皿內固體瓊脂培養(yǎng)基平面上。4.將平皿放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)12-50個小時，如菌落未長成，再繼續(xù)培養(yǎng)，直到有明顯的菌落長成為止。5.各種菌的菌落顏色、形狀各不相同，根據(jù)光合細菌菌落特征，找出光合細菌菌落，并計數(shù)。取同稀釋倍液10個樣本菌落的平均數(shù)，乘以它的稀釋倍數(shù)，即可大約得出待測菌液每毫升含光合細菌的活菌數(shù)。取各稀釋倍液算出的每毫升含光合細菌活菌的平均數(shù)，即可較為準確地檢測出該待測菌液的濃度。實際操作并不如此簡單，因為菌落有雜菌和光合菌交錯在一起的，也有兩個以上光合細菌菌落合在一起的，很難分辨計數(shù)。6.用接種針將光合細菌菌落挑出，用適量蒸餾水稀釋后，再涂布于固體培養(yǎng)基平面上，進行培養(yǎng)，待光合細菌在培養(yǎng)基上再次長成菌落后，在鼓風工作臺內用接種針挑出，接入盛有經(jīng)高壓蒸煮滅活過液體培養(yǎng)基的試管內，進行密封厭氧培養(yǎng)，培養(yǎng)好的光合細菌就是純菌種。純菌種的分離是專業(yè)性很強的一門技術，只有專業(yè)人員，且經(jīng)驗豐富的，才能識別各種菌落，從中分離出有用的菌株。十一、光合細菌品質的鑒別 目前，市面上光合細菌產(chǎn)品良莠不齊，有些不法廠家為達到贏利目的，采用色素加水調配成所謂的光合細菌，或用培養(yǎng)得不好的劣質光合細菌加色素調配。這些假、劣產(chǎn)品從外貌看幾乎可以亂真，但是由于質量低劣，完全達不到有關指標的標準，使用后甚至會殘害養(yǎng)殖對象，嚴重地侵犯了用戶的利益。如何分辨光合細菌產(chǎn)品的真與假、劣，成為許多用戶頭疼的事情。科學培養(yǎng)出來的光合細菌產(chǎn)品的紅色是光合細菌菌體的顏色，為非水溶性的，而用色素調配出來的假劣產(chǎn)品的紅色為水溶性色素的顏色。根據(jù)這兩者的不同，我們設計了一套鑒別真與假、劣產(chǎn)品的方法，經(jīng)反復試驗證明該方法科學、準確、易操作、易觀察?，F(xiàn)將此方法介紹給廣大用戶，希望能對用戶辨別真與假、劣光合菌產(chǎn)品有所幫助。具體方法如下：1、鑒別綠色色素溶液的配制：稱取食用果綠色素0.1克，溶于100毫升自來水中，配成深綠色的鑒別色素溶液?；蛉∩倭渴秤霉G色素，溶于適量自來水中，配成深綠色的溶液。2、取樣品：取待測的樣品10-20毫升裝于干凈、透明的玻璃管中。3、滴2滴鑒別綠色素溶液于裝有待測樣品的玻璃管中。4、觀察顏色的反應。若樣品為真正培養(yǎng)的光合細菌產(chǎn)品，綠色素溶液則會與紅色光合細菌分層，上層綠色為綠色素溶液，下層紅色為光合細菌液，搖動之后稍微放置，分層仍是存在，滴加的鑒別綠色素溶液越多，綠色層所占的比例越多，最后，整玻璃管都為綠色。若是用色素調配出來的假光合細菌產(chǎn)品，可見滴加的鑒別綠色素溶液會溶于紅色產(chǎn)品中，綠色溶液與紅色溶液不會分層，輕輕搖動后，兩者顏色會混勻，樣品的紅色加深，紅中帶有點紫，滴加的綠色色素溶液越多，顏色就會逐漸加深為紫黑色。有些廠家在培養(yǎng)得不好的劣質光合細菌產(chǎn)品中加色素調色。如果鑒別這一類加有色素的劣質光合細菌產(chǎn)品，同樣也可用上述的方法。產(chǎn)品中因色素加量不同，加入鑒別綠色色素溶液后，會有不同的顏色反應。若其產(chǎn)品中紅色素添加量較少，滴加鑒別綠色色素溶液后，會有分層，上層為淺綠，綠中帶有些紫。隨著產(chǎn)品內紅色素加量的增加，滴加綠色素溶液后還會有分層，但上層較下層深紫紅，產(chǎn)品內調配的紅色素量進一步加大，上層顏色為深紫，輕搖后，整管顏色為紫黑色。十二、沼澤紅假單胞菌（光合細菌）水劑產(chǎn)品質量暫行標準 1998-8-4農(nóng)牧函199830號 沼澤紅假單胞菌（光合細菌）水劑產(chǎn)品質量暫行標準 1主題內容與適用范圍 本標準規(guī)定了沼澤紅假單胞菌（光合細菌）水劑產(chǎn)品的質量指標、試驗方法、檢驗規(guī)則、標志包裝、運輸、儲存的要求。 本標準適用于沼澤紅假單胞菌類（光合細菌）水劑的生產(chǎn)。2引用標準 下列標準所包含的條文，通過在本標準中引用而構成為本標準的條文。在標準出版時，所示版本均為有效，所有標準都會被修訂，使用標準的各方應探討、使用下列標準最新版本的可能性。 GB 1307991飼料衛(wèi)生標準 GB 1309191飼料中沙門氏菌的檢驗方法 GB 838187 飼料中黃曲霉素B1的測定方法 GB 1307991飼料中總砷的測定方法 GB 1308091 飼料中鉛的測定方法 GB 1064893飼料標簽3技術要求31微生物指標311菌落形態(tài) 本品稀釋后在瓊脂培養(yǎng)皿上培養(yǎng)，菌落形態(tài)為草帽形或園形，表面光滑，少隆起，邊緣整齊，棕紅色。312菌體形態(tài) 顯微鏡下觀察，本產(chǎn)品菌體形態(tài)為短桿狀或卵園形，寬0.5-0.9微米，長1.2-2.0微米，無芽孢，無莢膜，單極鞭毛，可運動。313革蘭氏染色陰性32感觀指標 本品為紅色懸浮液體，帶培養(yǎng)基發(fā)酵味，長時間靜置紅色懸浮菌體會逐漸下沉，振蕩后可恢復懸浮液狀，無臭味。33光合細菌含量 總菌數(shù) 不低于30億個ml 活菌數(shù) 不低于20億個ml34理化指標 酸度pH6.5-7.0 電導率68ms/cm35光譜指標 光吸收植A6601.5 A4902.5 A8051.7 A8601.936衛(wèi)生指標 沙門氏菌 無 黃曲霉素B1 Mg/Kg 0.02 總砷（AS） Mg/Kg 0.5 鉛 Mg/Kg 2.04試驗方法41試劑和溶液 除特別注明外，試驗中所用試劑為分析純試劑，水為蒸餾水或相應程度的水，溶液為水溶液。41光合細菌培養(yǎng)液5.5g磷酸二氫鈉，1.5gDL蘋果酸，2g乙酸鈉，2g氫氧化鈉，1g氯化銨，0.25g氯化鎂，0.05g氯化鈣溶于1升蒸餾水，再加入本產(chǎn)品生產(chǎn)中用的生長因子溶液和微量元素溶液各1ml，攪拌均勻，pH應于6.5至7.0之間。42常規(guī)實驗和儀器和設備421分光光度計：有10mm比色池，可在340900nm處測量吸光度。422 1600倍光學顯微鏡423電動離心機（4000轉分）424酸度計：精度0.01pH425電導儀：DDS11型（或同等精度其它型號）43取樣 需備20ml具塞磨口無色透明的三角瓶為樣品瓶，洗凈后置烘箱120干燥滅菌，用清潔并滅菌后的25ml移液管（或吸管）隨機在5桶產(chǎn)品中各取25ml左右置于樣品瓶中混和，將靡口塞蓋嚴，用膠布封住，貼上標簽注明廠名、產(chǎn)品名，批號。取樣日期、生產(chǎn)日期。按和以上相同方法取樣200ml置于一干燥滅菌潔凈的200ml白塑料瓶中，注明標簽（內容同上）密封后留存。44檢驗方法441微生物檢驗4411菌落形態(tài)檢驗：用含1.2瓊脂的光合菌用培養(yǎng)液，除菌處理后，在無菌環(huán)境中，充平皿板，厚約35mm。凝固后取光合菌液做平板劃線，將平皿厭氧培養(yǎng)光照35天，室溫30，35天后長出紅色菌落，觀察菌落形態(tài)。4412原菌液用培養(yǎng)液稀釋100倍，取一滴置載片上（蓋蓋片）在高倍鏡下（1640）觀察菌形態(tài)大小及運動狀態(tài)。4413培養(yǎng)中的菌液一滴做涂片，自然干燥，酒精燈火焰固定，經(jīng)初染（結晶紫），媒染（路氏碘液），脫色（95乙醇），復染（番紅染液）后，油鏡（16100）觀察，菌體呈紅色。442感觀檢驗 量取樣品500ml，置三角瓶中，用肉眼觀察顏色，用嗅覺檢察嗅味。長期靜置已有沉淀的產(chǎn)品應先振蕩或攪拌1020秒后再取樣。443含量測定4431總菌數(shù)測定：樣品充分振蕩后取0.5ml用水稀釋到200ml滅菌水中，攪勻后從中取數(shù)微升充板入血球計數(shù)板的計數(shù)池中（每大格0.1mm3，置600倍顯微鏡下觀察，同時用紅血球計數(shù)法記菌數(shù)，將25個小格的每格菌數(shù)平均值乘1億為每毫升總菌數(shù)。4432活菌數(shù)測定：將4431節(jié)中稀釋的菌液再稀釋100000倍，取1ml加到10ml培養(yǎng)液中，混合均勻后加入20g/1000