洋蔥根尖染色體觀察.doc

洋蔥根尖染色體有絲分裂觀察與多倍體誘導 一、實驗目的1、掌握洋蔥培養(yǎng)的方法，掌握利用秋水仙素誘導植物多倍體的方法。2、掌握洋蔥根尖制片的方法，復習染色、壓片的基本操作。3、通過對于有絲分裂相的觀察，統(tǒng)計洋蔥染色體數(shù)目，加深對于細胞有絲分裂過程的理解。4、對比進行多倍體誘導前后的洋蔥根尖，理解四倍體與二倍體的區(qū)別。二、實驗原理（一）有絲分裂 完整的有絲分裂相包括G1期（合成前期）、S期（合成期）、G2期（合成后期）和M期（分裂期），其中G1期、S期和G2期合稱間期，細胞完成DNA的復制以及有絲分裂的準備，而M期又可以分為前期、中期、后期和末期，為了形態(tài)觀察的方便，本實驗采用后一種分法。 觀察有絲分裂，重點在于觀察染色體的形態(tài)。在細胞分裂前期，細胞核解體，染色質凝聚顯現(xiàn)出染色體的形態(tài)；在前中期，染色體散亂地分布于細胞的中部；在中期，紡錘體形成，染色體受到微管的牽引，著絲粒成行排列于赤道板上；在后期，染色體受到動粒微管的牽引，向細胞兩級運動；在末期，染色體重新解螺旋，細胞核重新形成。（二）洋蔥的根尖 洋蔥根尖的整體結構如右圖，其中只有分生區(qū)的初生分生組織由于細胞始終處于持久而強烈的有絲分裂之中而作為我們的觀察對象，其余部分在制片時都應當盡量剔除來保證觀察效果。（三）多倍體的誘導 多倍體的誘導使用秋水仙素，秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合，從而使有絲分裂中期紡錘體不能正常形成，但是姐妹染色單體照常想成，只是沒有被拉向兩級，于是染色體數(shù)目加倍。（四）各步驟的作用 1.固定液可以迅速殺死細胞，保持細胞形態(tài)在有絲分裂相。 2.解離可以破壞細胞的胞間層（果膠），使細胞之間的聯(lián)系變松散，有利于壓片和染色。 3.漂洗可以洗去過量的鹽酸，防止解離過度破壞細胞結構或影響染色效果（鹽酸是酸性，而醋酸洋紅是堿性染料）。三、實驗材料新鮮、健康的洋蔥鱗莖一個；0.02%秋水仙素、1M HCl、醋酸洋紅染液、卡諾氏固定液實驗器材：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、試管、燒杯、小塑料管、濾紙、刀片、解剖針等四、實驗步驟（一）材料的培養(yǎng)1.選擇新鮮、健康、根原基發(fā)育較為完整的洋蔥鱗莖，用刀片適當削去根部的木栓組織，置于清水中培養(yǎng)（水的高度要求與洋蔥底部正好接觸），每天換一次水，保證水的清潔2.待根尖長度達到1.5-2.0cm時，若要觀察二倍體，則直接于正午12:00左右剪下根尖投入固定液中，之后換0.02%秋水仙素，繼續(xù)培養(yǎng)約24h3.秋水仙素培養(yǎng)完成，根尖部位脹大后，與正午12:00左右剪下洋蔥根尖，投入固定液中固定2-72h（二）裝片的制作與觀察4.從固定液中取出洋蔥根尖，清水沖洗干凈，取一支試管，加入適量1M HCl，投入根尖，在60恒溫水浴下解離510min，此時根尖整體應呈半透明狀，僅分生區(qū)部分為白色。5.解離完成后，轉移根尖至盛有清水的小燒杯中，漂洗23次。6.將根尖置于載玻片上，只留分生組織，去除其余部分，滴加醋酸洋紅染液染色10min，同時用刀片將根尖盡量切碎。7.蓋上蓋玻片（若切得足夠碎此時蓋玻片應能輕松蓋上），用濾紙吸去多余的染液，在有濾紙覆蓋的情況下，用大拇指按壓進行壓片，也可以用解剖針柄輕輕敲打相應部位進行輔助。8.將裝片置于顯微鏡下進行觀察，比較二倍體與四倍體細胞的不同，尋找合適的有絲分裂相，統(tǒng)計染色體數(shù)目。五、實驗記錄1.多倍體2.二倍體六、注意事項（1）培養(yǎng)洋蔥根尖時，水不可放多，待根尖長出后，使根尖分生區(qū)接觸到水面即可；水至少一天一換，若有渾濁，立即更換。（2）剪下洋蔥根尖時注意時間，正午時分最合適，因為此時洋蔥根尖分生區(qū)有絲分裂最為活躍，此時固定，可以觀察到最多的分裂相。（3）解離時間要控制好，時間太短，效果不夠；時間太長，解離過度破壞細胞。（4）漂洗不能少，染色時間要足夠，否