Tris-HCl及其他幾種緩沖液配方.doc

Tris是什么？有什么作用？Tris-HCl，Tris-EDTA如何配制？Tris：三羥甲基氨基甲烷三羥甲基氨基甲烷（Tris(hydroxymethyl)aminomethane，一般簡(jiǎn)稱(chēng)為T(mén)ris）是一種有機(jī)化合物，其分子式為(HOCH2)3CNH2。Tris被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的緩沖液的制備。例如，在生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的TAE和TBE緩沖液（用于核酸的溶解）都需要用到Tris。由于它含有氨基因此可以與醛發(fā)生縮合反應(yīng) Tris為弱堿，在室溫（25下，它的pKa為8.1；根據(jù)緩沖理論，Tris緩沖液的有效緩沖范圍在pH7.0到9.2之間。Tris堿的水溶液pH在10.5左右，一般加入鹽酸以調(diào)節(jié)pH值至所需值，即可獲得該pH值的緩沖液。但同時(shí)應(yīng)注意溫度對(duì)于Tris的pKa的影響。 由于Tris緩沖液為弱堿性溶液，DNA在這樣的溶液中會(huì)被去質(zhì)子化，從而提高其溶解性。人們常常在Tris鹽酸緩沖液中加入EDTA制成“TE緩沖液”，TE緩沖液被用于DNA的穩(wěn)定和儲(chǔ)存。如果將調(diào)節(jié)pH值的酸溶液換成乙酸，則獲得“TAE緩沖液”（Tris/Acetate/EDTA），而換成硼酸則獲得“TBE緩沖液”（Tris/Borate/EDTA）。這兩種緩沖液通常用于核酸電泳實(shí)驗(yàn)中。用途：有機(jī)合成中間體。在電泳緩沖液中同甘氨酸構(gòu)成緩沖體系，穩(wěn)定電泳過(guò)程中的PH值。在凝膠中也起到穩(wěn)定PH的作用，只不過(guò)是Tris-HCl緩沖體系。 Tris緩沖液不僅被廣泛用作核酸和蛋白質(zhì)的溶劑，還有許多重要用途。Tris被用于不同pH條件下的蛋白質(zhì)晶體生長(zhǎng)。Tris緩沖液的低離子強(qiáng)度特點(diǎn)可用于線(xiàn)蟲(chóng)（C. elegans核纖層蛋白lamin）的中間纖維的形成。Tris也是蛋白質(zhì)電泳緩沖液的主要成分之一。此外，Tris還是制備表面活性劑、硫化促進(jìn)劑和一些藥物的中間物。Tris也被用作滴定標(biāo)準(zhǔn)物。1 M Tris-HCl (pH7.4，7.6，8.0)組份濃度1 M Tris-HCl配制量 1L配制方法：1.稱(chēng)量121.1 g Tris置于l L燒杯中。2.加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.按下表加入濃HCl量調(diào)節(jié)所需要的pH值。pH值 濃HCl7.4 約70 ml7.6 約60 ml8.0 約42ml4.將溶液定容至1 L。5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門(mén)ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。1.5 M Tris-HCl (pH8.8) 組份濃度1.5 MTris-HCl配制量 1 L配制方法1.稱(chēng)量181.7 g Tris置于1 L燒杯中。2.加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.用濃HCl調(diào)節(jié)pH值至8.8。4.將溶液定容至1 L。5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門(mén)ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。TE即Tris-EDTA buffer（10mM Tris，1mM EDTA，pH7.4 pH7.6 pH8.0）。常用分子生物學(xué)試劑，用于DNA的溶解等。配制1 0TE Buffer (pH7.4, 7.6，8.0) 組份濃度：100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA配制量： 1 L配制方法： 1. 量取下列溶液，置于l L燒杯中。1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4，7.6，8.0) 100 ml