實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案.doc

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案題目：水飛薊油脂質(zhì)體制備及包封率測(cè)定選題依據(jù)：水飛薊（Silybum marianum Gaertn）又名為水飛雉、奶薊、老鼠筋、乳薊子等，為一年或兩年生菊科草本植物1，可分為紫花水飛薊及其變種百花水飛薊，是一種優(yōu)良的藥用植物和油料植物，被載入2010版中國藥典。其果實(shí)用于治療肝損傷超過2000年2，含有大量脂肪，含油率在20%30%左右，油味香、色澤好，和大豆油有同等營養(yǎng)價(jià)值，可以食用3，被稱為“袋鼠油”。果實(shí)種子榨油后油渣提取的黃酮類化合物水飛薊素及水飛薊賓，是其果實(shí)中主要化學(xué)成分。不僅具有抗肝損傷，還具有提高免疫調(diào)節(jié)、降血脂、預(yù)防高血壓等作用，不同劑型的保肝藥在臨床上已經(jīng)使用4。研究現(xiàn)實(shí)意義和前景：水飛薊素及其中成分水飛薊賓具有明顯的保肝護(hù)肝作用，國內(nèi)外學(xué)者對(duì)水飛薊的研究活躍，目前國內(nèi)外對(duì)水飛薊資源的利用仍然以提取水飛薊素、水飛薊賓為主，對(duì)果仁中油提取利用為輔5。但是水飛薊油除了含有水飛薊素和水飛薊賓，還含有大量亞油酸、氨基酸、蛋白質(zhì)、維生素E等，但不僅僅作為營養(yǎng)價(jià)值很高的食用油和調(diào)和油使用。近幾年在醫(yī)藥研究發(fā)現(xiàn)可以用于治療多種疾病，包括病毒性肝炎和肝硬化6、降低血脂、防止高血壓、冠心病等。所以有必要對(duì)水飛薊油進(jìn)行開發(fā)利用，在食品和藥品中開拓廣泛市場。由于水飛薊油難溶于水，口服生物利用度低。因此將水飛薊油以脂質(zhì)體為載體增加水溶性同時(shí)，借助脂質(zhì)體的靶向性和緩釋性，提高生物利用度。制備脂質(zhì)體的方法有被動(dòng)載藥法中薄膜分散法7,8、逆相蒸發(fā)法、二次乳化法、冷凍干燥法9等，主動(dòng)載藥法中醋酸鈣梯度法10、PH梯度法11、硫酸銨梯度法等12。鑒于薄膜分散（thin-film dispersion method）方法簡便，操作簡單，條件溫和，同時(shí)適用于油類成分，目前有多種油性藥物采用薄膜分散法制備脂質(zhì)體13,14,15 。本實(shí)驗(yàn)制備水飛薊油脂質(zhì)體，在包封率和粒徑達(dá)到要求條件下，期望能改善水飛薊油溶解度，提高生物利用度。使得水飛薊油在醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用上前景寬闊。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：目的：以薄膜分散法制備水飛薊油脂質(zhì)體，以包封率作為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)化水飛薊油脂質(zhì)體的最佳處方和最優(yōu)工藝。實(shí)驗(yàn)步驟簡述：1、制備水飛薊油溶液以紫外分光光度計(jì)進(jìn)行紫外吸收波長掃描，確定最大吸收波長，配制不同溶度水飛薊油溶度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2、以薄膜分散法制備脂質(zhì)體，高速離心，去除的游離水飛薊油留下待用。3、脂質(zhì)體經(jīng)破乳再除去卵磷脂后，在最大吸收波長處測(cè)吸光度值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算m包，并計(jì)算包封率%。4、用配制不同溶度水飛薊油溶液的溶劑將游離水飛薊油提取，測(cè)定吸光度計(jì)算m游，并計(jì)算回收率%。5、對(duì)薄膜分散制備工藝中對(duì)包封率影響因素進(jìn)行單因素考察（設(shè)定制備中影響因素和水平），并正交實(shí)驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，得到最佳制備工藝。實(shí)驗(yàn)?zāi)晗?、?jīng)費(fèi)、可行性考察：1）年限：約三個(gè)月2）經(jīng)費(fèi)：在所需儀器允許條件下，經(jīng)費(fèi)在計(jì)劃范圍內(nèi)。3）可行性：實(shí)驗(yàn)條件允許，方法普遍使用，預(yù)實(shí)驗(yàn)可行。實(shí)驗(yàn)中關(guān)鍵步驟和實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)、期望指標(biāo)：1）實(shí)驗(yàn)中關(guān)鍵步驟：1、 薄膜分散法制備脂質(zhì)體過程中，將有機(jī)溶劑完全蒸干。2、 考慮到水飛薊油穩(wěn)定性，真空干燥時(shí)間和溫度調(diào)節(jié)適宜。3、 脂質(zhì)體破乳通過加破乳劑超聲，使破乳充分得到包封率準(zhǔn)確。4、薄膜分散法制備的脂質(zhì)體是多室脂質(zhì)體（multilamellar vesicles），在薄膜擠出和超聲中需掌握時(shí)間等因素得到粒徑均勻單層脂質(zhì)體。2）評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：以包封率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，根據(jù)2010版藥典規(guī)定脂質(zhì)體包封率不低于80%。3）期望指標(biāo)：包封率在80%，粒徑能控制在nm級(jí)別且粒徑均勻。參考文獻(xiàn)：1 Hadolin M, Skerget M, Knez Z, Bauman D (2001) High pressure extraction of vitamin E-rich oil from Silybum marianum. Food Chem 74:355364.2 Flora, K., Hahn, M., Rosen, H., Benner, K., 1998. Milk thistle (Silybum marianum) for the therapy of liver disease. Am. J. Gastroenterol. 93, 139143.3 錢學(xué)射,張衛(wèi)明,顧龔平,等.值得開發(fā)與利用的水飛薊油J.中國野生植物資源4 孫東,胡經(jīng)琦,王字明.水飛薊藥理作用及其在肝病中的臨床應(yīng)用J.中國全科醫(yī)學(xué),2007,10(2):1891-1893.5 劉婷,王艷龍.水飛薊油提取及應(yīng)用研究進(jìn)展J.安徽農(nóng)學(xué)通,2012，18(17):57-596 Silybum marianumL. seed oil: A novel feedstock for biodiesel productionJ.Arabian Journal of Chemistry,2012.7 Spyridon Mourtas,Styliani Fotopoulou,Stela Duraj,etal.Liposomal drugs dispersed in hydrogels: Effect of liposome, drug and gel properties on drug release kineticsJ.Colloids and Surfaces B: Biointerfaces,2007,55(2):212-221.8 Nina Dragicevic-Curic,Sven Winter,Mirjana Stupar,etal.Temoporfin-loaded liposomal gels: Viscoelastic properties and in vitro skin penetrationJ.International Journal of Pharmaceutics,2009,373,77-84.9 Natassa Pippa,Stergios Pispas,Costas Demetzos,The fractal hologram and elucidation of the structure of liposomal carriers in aqueous and biological mediaJ.International Journal of Pharmaceutics, 2012, 430:657310 Kohei Hironaka,Yuta Inokuchi,Takuya Fujisawa,etal.Edaravone-loaded liposomes for retinal protection against oxidative stress-induced retinal damageJ. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 2011,79:11912511 Amey Bandekar,Shrirang Karve,Min-Yuan Chang,etal.Antitumor efficacy following the intracellular and interstitial release of liposomal doxorubicinJ.Biomaterials,2012,33(17):4345-435212 崔福德. 藥劑學(xué)M.北京:中國醫(yī)藥科學(xué)出版社,2011.13 楊莉斌, 剛宏林,胡榮.鴉膽子油脂質(zhì)體的理化性質(zhì)及穩(wěn)定性考察J.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2010,44(1) :66-73.14 Salima Varona,Angel Martin, andMaria Jose Cocero.LiposomalIncorporation of Lavandin EssentialOilby a Thin-Film Hydration Method and by Particles from Gas-Saturated SolutionsJ.Industrial & Engineering Chemistry Research,2011, 50, 20882097.15