細(xì)菌標(biāo)本片的制備及染色方法ppt課件

.,技能訓(xùn)練5細(xì)菌標(biāo)本片的制備及染色方法,.,能利用不同的材料進(jìn)行細(xì)菌標(biāo)本片的制備掌握常規(guī)的染色方法，并認(rèn)識(shí)細(xì)菌的不同染色特性,實(shí)訓(xùn)目標(biāo),.,酒精燈、接種環(huán)、載玻片、吸水紙、生理鹽水、美藍(lán)染色液、革蘭氏染色液、瑞氏染色液、染色缸、染色架、洗瓶、顯微鏡、香柏油、乙醇乙醚、擦鏡紙、細(xì)菌培養(yǎng)物（大腸桿菌、葡萄球菌等）、細(xì)菌病料、無(wú)菌鑷子和剪刀、特種鉛筆等,儀器材料,.,方法步驟,（一）細(xì)菌標(biāo)本片的制作（二）常用的細(xì)菌染色方法（三）常用染色液的配制,.,（一）細(xì)菌標(biāo)本片的制作,1涂片標(biāo)本的制作（1）涂片（2）干燥涂片（3）固定涂片2血液推片和組織抹片的制作（1）血液推片的制作（2）組織抹片的制作,.,.,1涂片標(biāo)本的制作,（1）涂片取清潔載玻片一塊，用吸管吸取生理鹽水1滴置于玻片中央，再將接種環(huán)在火焰上滅菌，待冷后從固體培養(yǎng)基上挑取少許菌落，置于玻片上的生理鹽水中混均勻，并在玻片上涂成直徑約為1cm的涂面，要求薄而均勻。,.,（2）干燥涂片在室溫下自然干燥，必要時(shí)將涂面向上，置火焰上來(lái)回微烤使其干燥。,.,（3）固定涂片干燥后，將涂面向上，在火焰上快速來(lái)回通過(guò)23次，其溫度以手背接觸玻片底面感覺(jué)微燙手為宜。,.,2血液推片和組織抹片的制作,（1）血液推片的制作取一張邊緣整齊的載玻片，用其一端蘸取少許血液，在另一張干凈無(wú)油脂的載玻片上，以45角度均勻地推成一薄血涂片，以紅細(xì)胞不重疊為宜。,.,（2）組織抹片的制作待檢尸體經(jīng)無(wú)菌手術(shù)切開胸腹腔后，用經(jīng)火焰滅菌的鑷子夾起組織，用滅菌剪刀剪下小塊組織，將組織切面在載玻片上等距離輕壓幾下，使其留有組織切面的壓跡。,.,（二）常用的細(xì)菌染色方法,1美藍(lán)染色法2革蘭氏染色法3瑞氏染色法,.,1美藍(lán)染色法,在已固定好的抹片上，滴加適量美藍(lán)染色液覆蓋涂面，染色23min，水洗，吸水紙輕壓吸干或晾干和鏡檢，結(jié)果菌體呈藍(lán)色。,.,2革蘭氏染色法,（1）在固定好的抹片上，滴加草酸銨結(jié)晶紫染色液，作用13min，水洗。（2）加革蘭氏碘液，作用12min，水洗。（3）加95酒精脫色約30s至1min，水洗。（4）加稀釋石炭酸復(fù)紅，復(fù)染30s左右，水洗，吸干后鏡檢。結(jié)果：革蘭氏陽(yáng)性菌呈藍(lán)紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。,.,3瑞氏染色法,細(xì)菌抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于涂片上以固定標(biāo)本，13min后，再滴加與染色液等量的磷酸緩沖液或中性蒸餾水于玻片上，輕輕搖晃使與染色液混和均勻，5min左右水洗，干后鏡檢，結(jié)果菌體呈藍(lán)色，組織細(xì)胞等物呈其他顏色。,.,（三）常用染色液的配制,1堿性美藍(lán)染色液2革蘭氏染色液3瑞氏染色液,.,1堿性美藍(lán)染色液,甲液：美藍(lán)0.3g、95%酒精30mL；乙液：0.01%苛性鉀溶液100mL先配甲液，將美藍(lán)放入研缽中，徐徐加入酒精研磨均勻后，把甲、乙兩液混合，過(guò)夜后用濾紙過(guò)濾即成。新鮮配制的美藍(lán)液染色不好，陳舊的染色好。,.,2革蘭氏染色液,（1）草酸銨結(jié)晶紫溶液甲液：結(jié)晶紫2g、95%酒精20ml；乙液：草酸銨0.8g、蒸餾水80ml將結(jié)晶紫放入研缽中，加酒精研磨均勻制成甲液，然后將完全溶解的乙液與甲液混合即成。（2）盧戈氏碘液碘1g、碘化鉀2g、蒸餾水300ml。將碘化鉀放入研缽中，加入少量蒸餾水，使其溶解，再放入已磨散的碘片，徐徐加水，同時(shí)充分磨勻，待碘片完全溶解后，把余下的蒸餾水倒入，再裝入瓶中。（3）石炭酸復(fù)紅稀釋液取堿性復(fù)紅酒精飽和溶液（堿性復(fù)紅10g溶于95%酒精100ml中）1ml和5%石炭酸水溶液9ml混合，即為石炭酸復(fù)紅原液。再取原液10ml和90ml蒸餾水混合，即成石炭復(fù)紅稀釋液。,.,3瑞氏染色液,取瑞氏染料0.1g，純中性甘油1ml，在研缽中混合研磨，再加入甲醇60ml，使其溶