臨床真菌學(xué)檢驗(yàn)基本技術(shù)ppt課件

.,臨床真菌學(xué)檢驗(yàn)基本技術(shù),河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科,郭兵申,郭兵申,.,臨床真菌基礎(chǔ)總論,一、真菌的基本介紹二、真菌分類及存在形式三、真菌的一般檢查一般鏡檢常規(guī)染色培養(yǎng)及鑒定方式四、真菌的致病性五、真菌的防治原則,.,真菌(fungus)屬真核細(xì)胞型微生物，有真正的核，單細(xì)胞或多細(xì)胞異養(yǎng)微生物，不含葉綠素，大都能形成硬的多糖細(xì)胞壁，細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)較細(xì)菌簡(jiǎn)單，細(xì)胞壁含幾丁質(zhì)和纖維素。估計(jì)有100-150萬(wàn)種，分布廣泛，從30000米高空地表海洋都有真菌的生長(zhǎng)。大多數(shù)真菌對(duì)人類是有益的，只有少數(shù)對(duì)人類有害。,一、真菌的基本介紹,.,二、真菌分類及存在形式,A、真菌分類從米奇里（P.A.Micheli，1729）開(kāi)始，至今已有近280年的歷史，這期間經(jīng)過(guò)世界上無(wú)數(shù)真菌科學(xué)工作者的努力，使真菌分類的工作有了極大地發(fā)展。B、但是由于真菌分類存在著無(wú)數(shù)困難，現(xiàn)有的真菌分類系統(tǒng)還有待進(jìn)一步發(fā)展與完善（尚未有一個(gè)大家供認(rèn)的系統(tǒng)）。,（1）、真菌的分類,.,.,與醫(yī)學(xué)有關(guān)的真菌有四個(gè)亞門接合亞門：毛霉、根霉等子囊霉亞門：酵母菌屬、小孢子霉屬等擔(dān)子霉亞門：新生隱球菌、靈芝、食用菌等半知霉亞門：假絲酵母菌屬、球孢子菌屬等最新的真菌分類接合菌門子囊菌門擔(dān)子菌門壺菌門,.,根據(jù)菌落形態(tài)分類：酵母菌酵母樣菌霉菌雙相真菌,.,二、真菌分類及存在形式,（2）、真菌的存在形式,菌絲和孢子,A、真菌的菌絲先端為生長(zhǎng)點(diǎn)，通過(guò)頂端延長(zhǎng)而生長(zhǎng)。菌絲生長(zhǎng)生出分枝，使其與營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)接觸面積增大，提高吸收力。菌絲內(nèi)原生質(zhì)從衰老部分流向幼嫩部分，使菌絲不斷伸長(zhǎng)，這就是生長(zhǎng)。B、在一定條件下由生長(zhǎng)轉(zhuǎn)入發(fā)育階段即產(chǎn)生繁殖體，生長(zhǎng)與發(fā)育受環(huán)境控制，多數(shù)真菌在貧養(yǎng)和低溫條件下轉(zhuǎn)入有性階段，少數(shù)菌在高溫下轉(zhuǎn)入有性階段。還有些真菌在其不同的發(fā)育階段，必須在不同的寄主植物上渡過(guò)，即轉(zhuǎn)主寄主（現(xiàn)象）。C、只要是專門生殖的細(xì)胞，正常情況下不需要兩兩結(jié)合就可以單個(gè)細(xì)胞發(fā)育成一個(gè)個(gè)體，這就是孢子。,.,菌絲的形態(tài)：,螺旋狀、球拍狀、結(jié)節(jié)狀、鹿角狀、梳狀等，菌絲形態(tài)有助于鑒別真菌。,孢子的形態(tài)：,有性孢子：同一個(gè)菌體或不同菌體上兩個(gè)細(xì)胞融合成經(jīng)減數(shù)分裂形成。無(wú)性孢子：細(xì)胞分化或出芽形成。形態(tài)有分生孢子、葉狀孢子和孢子囊孢子。,.,菌絲和孢子,.,.,A、氫氧化鉀法,將標(biāo)本置于在玻片上，加一滴10%KOH浮載液，蓋上蓋玻片放置510分鐘后或直接在火焰上快速通過(guò)23次微加熱，輕壓蓋玻片驅(qū)逐氣泡并將標(biāo)本壓薄后置于顯微鏡下檢查。先在低倍鏡下觀察有無(wú)菌絲和孢子，然后用高倍鏡觀察孢子和菌絲的形態(tài)特征、大小和排列等。對(duì)于角質(zhì)標(biāo)本，必要時(shí)可在10%KOH溶液中，加入終濃度為40%二甲亞砜，促進(jìn)其溶解。此法適用于皮屑、甲屑、毛發(fā)、痂皮、痰、組織、耵聹、糞便等標(biāo)本的直接涂片檢查。,.,B、膠帶粘貼法,用透明膠帶直接貼于取材部位，數(shù)分鐘后揭下，充分展平后，直接置貼于加有一滴浮液的載玻片上此液可以是10%20%的KOH，也可以采用乳酸酚棉藍(lán)染液（易于觀察）。該法常用于花斑癬患處的直接檢查。,.,乳酸酚棉藍(lán)染色傳統(tǒng)染色法，酵母菌細(xì)胞、菌絲體和產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)等皆可被染成亮藍(lán)色；背景為暗淡的藍(lán)色。過(guò)碘酸-雪夫染色（P.A.S）在尋找真菌孢子、鑒別真菌、觀看真菌結(jié)構(gòu)、等方面有意義其他染色法六胺銀法、愛(ài)先藍(lán)（alcianblue）法、革蘭氏染色法、以及特殊染色法,.,乳酸酚棉藍(lán)染色,.,革蘭染色法在鑒別細(xì)菌、選擇抗菌藥物、研究細(xì)菌致病性等方面有意義（真菌的簡(jiǎn)單染色也可以）所有的真菌、放線菌均為革蘭染色陽(yáng)性，呈紫黑色。適用于酵母菌、孢子絲菌、組織胞漿菌、諾卡菌及放線菌等培養(yǎng)物的形態(tài)檢查。,石膏樣小孢子菌,.,.,A、培養(yǎng)特性,B、抵抗力,.,D、培養(yǎng)基種類,E、菌落形態(tài),.,F、鑒定方式,.,A、真菌的侵犯部位不同，其致病性也不相同,淺部真菌侵犯表皮角質(zhì)層、毛發(fā)和甲板深部真菌侵犯真皮及以下組織、粘膜和內(nèi)臟。,B、真菌的致病性表現(xiàn),1.淺部真菌感染（外源性真菌）:手足癬、體癬、股癬、甲癬2.條件致病性真菌感染（內(nèi)源性真菌/機(jī)會(huì)致病性真菌）如：白假絲酵母菌（白色念珠菌）引起的鵝口瘡3.深部真菌感染:新生（型）隱球菌：侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)引起慢性腦膜炎4.真菌毒素的致病作用:急性中毒：毒蕈中毒，慢性真菌中毒：黃曲霉素、青霉素（霉變食物）5.真菌超敏反應(yīng)性疾病:敏感患者吸入真菌孢子，引起型超敏反應(yīng)醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。如：尋痲疹、哮喘、變應(yīng)性鼻炎等。,四、真菌的致病性,.,五、真菌的防治原則,衛(wèi)生、干燥、消毒（福爾馬林）避