腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制課件VIP

1、腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制1 腸癌腸癌B7-H1B7-H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制2 研研 究究 背背 景景 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制3 腫瘤微環(huán)境腫瘤微環(huán)境 A.還原論者認(rèn)為腫瘤是由一群?jiǎn)渭兊哪[瘤細(xì)胞聚集而成的 B.腫瘤是由腫瘤細(xì)胞和腫瘤基質(zhì)構(gòu)成的，腫瘤基質(zhì)主要包括成纖維細(xì)胞、各種免疫細(xì)胞和新生血管 上皮細(xì)胞等細(xì)胞類型。 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制4 Tc1 Th1 M1 M2 Th17/Tc17 Th2/Tc2 Treg/Anergic Myeloid -Derived Suppressor Ce

2、lls (MDSC) Tc1 Th1 M1 M2 Th17/Tc17 Th2/Tc2 Treg/AnergicTreg/Anergic Myeloid -Derived Suppressor Cells (MDSC) 腫瘤浸潤(rùn)免疫細(xì)胞幾乎囊括了宿主免疫系統(tǒng)的所有成分：T 淋巴細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，樹突狀細(xì)胞， 肥大細(xì)胞等，形成一個(gè)腫瘤局部微環(huán)境下的免疫系統(tǒng)。其中的淋巴細(xì)胞成分被定義為腫瘤浸潤(rùn)性淋巴細(xì)胞 （Tumor infiltrating lymphocytes，TIL）, 巨噬細(xì)胞被定義為腫瘤相關(guān)性巨噬細(xì)胞（Tumor associated macrophagel，TAM）。 腫瘤微

3、環(huán)境和免疫細(xì)胞腫瘤微環(huán)境和免疫細(xì)胞 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制5 協(xié)同刺激分子和協(xié)同刺激信號(hào)協(xié)同刺激分子和協(xié)同刺激信號(hào) v雙信號(hào)雙信號(hào) vB7/CD28B7/CD28超家族超家族 TNF/TNFRTNF/TNFR超家族超家族 v協(xié)同刺激分子及其受體介協(xié)同刺激分子及其受體介 導(dǎo)的信號(hào)途徑在導(dǎo)的信號(hào)途徑在T T細(xì)胞的活化細(xì)胞的活化 和行使功能過程中發(fā)揮重要和行使功能過程中發(fā)揮重要 作用，正成為對(duì)臨床疾病進(jìn)作用，正成為對(duì)臨床疾病進(jìn) 行免疫干預(yù)最有希望的手段行免疫干預(yù)最有希望的手段 之一。之一。 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制6 v人人B7-H1B7-H1基因定位于基因定位于9p249

4、p24。 屬于免疫球蛋白超家族。其屬于免疫球蛋白超家族。其 開放閱讀框編碼開放閱讀框編碼290290個(gè)氨基酸個(gè)氨基酸 由胞外由胞外IgVIgV、IgCIgC結(jié)構(gòu)域、疏結(jié)構(gòu)域、疏 水性跨膜結(jié)構(gòu)域、及胞內(nèi)區(qū)水性跨膜結(jié)構(gòu)域、及胞內(nèi)區(qū) 組成。胞外段與組成。胞外段與B7-1B7-1、B7-2B7-2 具有較高的同源性，分別達(dá)具有較高的同源性，分別達(dá) 到到2020、1515。 vB7-H1B7-H1蛋白廣泛表達(dá)于蛋白廣泛表達(dá)于APCsAPCs， 活化活化T T、B B細(xì)胞，巨噬細(xì)胞及細(xì)胞，巨噬細(xì)胞及 一些非淋巴樣組織。一些非淋巴樣組織。 vB7-H1B7-H1通過與通過與T T細(xì)胞上的受體細(xì)胞上的受體 P

5、D-1PD-1結(jié)合，負(fù)性調(diào)控免疫應(yīng)結(jié)合，負(fù)性調(diào)控免疫應(yīng) 答。答。 B7-H1B7-H1分子分子 概況概況 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制7 B7-H1B7-H1分子分子 概況概況 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制8 研究?jī)?nèi)容研究?jī)?nèi)容 1 1、分析人結(jié)直腸癌中、分析人結(jié)直腸癌中B7-H1B7-H1分子表達(dá)及分子表達(dá)及T T細(xì)胞的浸潤(rùn)情況細(xì)胞的浸潤(rùn)情況 2 2、探討、探討B(tài)7-H1B7-H1信號(hào)對(duì)腫瘤浸潤(rùn)信號(hào)對(duì)腫瘤浸潤(rùn)T T細(xì)胞的作用機(jī)制細(xì)胞的作用機(jī)制 結(jié)直腸癌的發(fā)展過程結(jié)直腸癌的發(fā)展過程 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制9 第一部分第一部分 人結(jié)直腸癌中人結(jié)直腸癌中B7-H1分子的

6、表達(dá)及分子的表達(dá)及 T細(xì)胞的浸潤(rùn)情況細(xì)胞的浸潤(rùn)情況 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制10 實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法 腸癌標(biāo)本的腸癌標(biāo)本的 收集及資料收集及資料 統(tǒng)計(jì)（收集統(tǒng)計(jì)（收集 結(jié)直腸癌標(biāo)結(jié)直腸癌標(biāo) 本本112例）例） 免疫組化檢免疫組化檢 測(cè)測(cè)B7-H1B7-H1的的 表達(dá)、表達(dá)、CD3+ CD3+ T T細(xì)胞及細(xì)胞及 CD8+TCD8+T細(xì)胞的細(xì)胞的 浸潤(rùn)情況浸潤(rùn)情況 結(jié)合患者臨結(jié)合患者臨 床病理參數(shù)床病理參數(shù) 進(jìn)行相關(guān)性進(jìn)行相關(guān)性 分析和生存分析和生存 分析分析 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制11 標(biāo)本來(lái)源標(biāo)本來(lái)源 標(biāo)本取自2003年1月至2003年12月在蘇州大學(xué)附屬第四 醫(yī)院接

7、受結(jié)腸直腸癌切除手術(shù)的112名患者的組織蠟塊，收 集患者的病理資料。所有病例經(jīng)HE染色讀片、病理診斷確 認(rèn)為結(jié)腸癌或直腸癌?；颊吣挲g29-85歲，中位年齡62歲， 所有患者術(shù)前均未接受放療或化療。同時(shí)選取10例癌旁正 常組織作為正常對(duì)照。采用已確認(rèn)B7-H1免疫組化染色陽(yáng)性 的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織作為陽(yáng)性對(duì)照組織，采用扁桃體 組織作為CD3抗體和CD8抗體免疫組化染色的陽(yáng)性對(duì)照組織。 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制12 CD BA A. 腸癌組織高度表達(dá)B7-H1; B. 腸癌組織低度表達(dá)B7-H1; C.正常組織不表達(dá)B7-H1; D.陰性對(duì)照 一、一、B7-H1B7-H1分子在結(jié)直腸

8、癌及正常組織中的表達(dá)分子在結(jié)直腸癌及正常組織中的表達(dá) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果 腸癌組織中B7-H1分子的表達(dá)水平顯著高于臨近 正常切端組織。（P0.001） 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制13 二、二、B7-H1B7-H1在腸癌的表達(dá)情況和腸癌患者臨床病理因素的相關(guān)性在腸癌的表達(dá)情況和腸癌患者臨床病理因素的相關(guān)性 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制14 B7-H1 020406080100 50 60 70 80 90 100 110 B7-H1低表達(dá) B7-H1高表達(dá) P=0.0257* 生存時(shí)間 （月 ） 總 體 生 存 率 （%） 三、三、B7-H1B7-H1的表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系的表

9、達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系 腸癌組織中B7-H1分子的表達(dá)水平與患者的臨床預(yù)后顯著相關(guān)，且B7-H1高表達(dá)的患者生存率 顯著低于低表達(dá)的患者。（P0.05） 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制15 四、四、CD3CD3+ +T T細(xì)胞、細(xì)胞、CD8CD8+ +T T細(xì)胞在腸癌組織的浸潤(rùn)與患者預(yù)后的關(guān)系細(xì)胞在腸癌組織的浸潤(rùn)與患者預(yù)后的關(guān)系 BA A. 腸癌組織中CD3+T細(xì)胞的浸潤(rùn) B. 腸癌組織中CD8+T細(xì)胞的浸潤(rùn) CD3+T細(xì)胞在腸癌組織浸潤(rùn)程度和腸癌患者的總體生存率密切相關(guān)，CD3+T細(xì)胞浸潤(rùn)高的患者其生 存率較CD3+T細(xì)胞浸潤(rùn)低的患者升高（P0.01）。 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)

10、制16 五、五、腸癌腸癌CD3CD3+ +T T、CD8CD8+ +T T細(xì)胞的浸潤(rùn)情況和患者臨床參數(shù)的相關(guān)性細(xì)胞的浸潤(rùn)情況和患者臨床參數(shù)的相關(guān)性 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制17 六、腸癌六、腸癌CD3CD3+ +T T、CD8CD8+ +T T細(xì)胞的浸潤(rùn)程度與細(xì)胞的浸潤(rùn)程度與B7-H1B7-H1分子表達(dá)水平的分子表達(dá)水平的 相關(guān)性相關(guān)性 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制18 第一部分小結(jié)第一部分小結(jié) 1、B7-H1分子在腸癌組織中的表達(dá)顯著高于正常組 織，并且與腫瘤部位和Dukes分期顯著相關(guān)； 2、生存分析顯示，腸癌患者的預(yù)后與B7-H1分子的 表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，與CD3+T

11、細(xì)胞的浸潤(rùn)程度呈正相 關(guān)，而與CD8+T細(xì)胞的浸潤(rùn)程度無(wú)顯著相關(guān)性； 3、B7-H1分子的表達(dá)水平與CD3+T細(xì)胞的浸潤(rùn)程度呈 負(fù)相關(guān)； 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制19 第二部分第二部分 B7-H1B7-H1信號(hào)對(duì)腫瘤浸潤(rùn)信號(hào)對(duì)腫瘤浸潤(rùn)T T細(xì)胞及其細(xì)胞及其 亞群的影響亞群的影響 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制20 實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法 分析腫瘤患者分析腫瘤患者 外周血和組織外周血和組織 中的中的T T 細(xì)胞亞細(xì)胞亞 群群, ,及組織中及組織中 TregsTregs與與B7-H1B7-H1 的相關(guān)性的相關(guān)性 構(gòu)建構(gòu)建SW480/B7-SW480/B7- H1H1+/- +/-細(xì)胞，

12、并 細(xì)胞，并 與外周血與外周血CD4+TCD4+T 細(xì)胞共培養(yǎng)細(xì)胞共培養(yǎng) 檢測(cè)刺激前后檢測(cè)刺激前后 調(diào)節(jié)性調(diào)節(jié)性T T 細(xì)胞細(xì)胞 （TregsTregs）的）的 功能改變功能改變 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制21 一、腫瘤患者外周血和組織中的一、腫瘤患者外周血和組織中的T T細(xì)胞亞群細(xì)胞亞群 腫瘤患者外周血中T 細(xì)胞總數(shù)比例較健康人變化不大， 腫瘤組織中浸潤(rùn)的T細(xì)胞有所下降，但仍占浸潤(rùn)淋巴細(xì) 胞總數(shù)的67.1，表明T細(xì)胞依然是抗腫瘤免疫應(yīng)答的主要效應(yīng)細(xì)胞。而無(wú)論在腫瘤患者外周還是組織中， CD4+T/CD8+T 細(xì)胞比例均發(fā)生了倒置，同時(shí)CD4+CD25+Tregs 比例也都較正常人顯

13、著上升。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制22 二、腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中調(diào)節(jié)性二、腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中調(diào)節(jié)性T T細(xì)胞（細(xì)胞（TregsTregs）與腫瘤細(xì)胞）與腫瘤細(xì)胞 B7-H1B7-H1的關(guān)系的關(guān)系 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制23 三、三、SW480/B7-H1SW480/B7-H1和和SW480/MockSW480/Mock細(xì)胞上細(xì)胞上B7-H1B7-H1分子和分子和GFPGFP報(bào)告基因報(bào)告基因 的表達(dá)的表達(dá) ASW480/Mock細(xì)胞上GFP綠熒光蛋白的表達(dá) BSW480/Mock細(xì)胞上B7-H1蛋白的表達(dá) CSW480/B7-H1細(xì)胞上GFP綠熒光蛋白的

14、表達(dá) DSW480/B7-H1細(xì)胞上B7-H1蛋白的表達(dá) SW480/MOCKSW480/MOCK SW480/B7-H1SW480/B7-H1 GFPGFPB7-H1B7-H1 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制24 四、腫瘤四、腫瘤B7-H1B7-H1信號(hào)促進(jìn)信號(hào)促進(jìn)CD4+TregsCD4+Tregs的誘導(dǎo)產(chǎn)生的誘導(dǎo)產(chǎn)生 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制25 Day1 Day2 Day3 0 200 400 600 800 CD4+T+CD3 CD4+T+CD3+TGF- CD4+T+CD3+TGF- +SW480/Mock CD4+T+CD3+TGF- +SW480/B7-H1

15、*P0.01 *P0.001 *P0.01 TGF- (pg/ml) Day1 Day2 Day3 0 1000 2000 3000 4000 5000 CD4+T+CD3 CD4+T+CD3+TGF- CD4+T+CD3+TGF- +SW480/Mock CD4+T+CD3+TGF- +SW480/B7-H1 *P0.05 *P0.05 *P0.01 IL-10(pg/ml) 五、腫瘤五、腫瘤B7-H1B7-H1信號(hào)促進(jìn)信號(hào)促進(jìn)CD4CD4+ +T T細(xì)胞分泌細(xì)胞分泌TGF-TGF-和和IL-10IL-10 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制26 第二部分小結(jié)第二部分小結(jié) 1、腸癌患者的組織及外周血中的Tregs比例都較正 常人顯著上升； 2、成功構(gòu)建了腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株SW480/B7-H1+/- ； 3、在CD3單抗和TGF-的共同作用下，SW480/B7-H1 可誘導(dǎo)Treg的產(chǎn)生。 腸癌B7H1表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制27 全文總結(jié)全文總結(jié) 1、腸癌組織較正常組織顯著高表達(dá)B7-H1分子，且 與患者的腫瘤部位和Dukes分期顯著相關(guān)，提示 B7-H1在腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用。 2、腸癌組織中B7-H1的表達(dá)水平與CD3+T細(xì)胞的浸潤(rùn) 程度呈負(fù)相關(guān)，且兩者都與患者的預(yù)后顯著相關(guān)， 提示B7-H1分子可能通過下調(diào)腫瘤微