藥物分析與生物藥物分析

1、藥物分析與生物藥物分析藥物分析與生物藥物分析 主講老師: 肖玉秀2004年2月9日-7月3日v兩門課合起來安排學時，分別考試。授課兩門課合起來安排學時，分別考試。授課17-18周，周，5學時學時/周周v講授內容講授內容: 遵循教學大綱，以課本內容為主，盡量全面講解。v授課方式授課方式： 講授-自學相結合v成績評定成績評定： 平時20% (作業(yè)及paper)，期末80%v實驗課安排實驗課安排: 兩門課同時開兩門課同時開緒緒 論論一藥物分析的性質一藥物分析的性質 藥物分析是以藥品質量控制為研究目的一門學科。主要運用化學、物理學或生物學等學科的方法和技術研究各種藥物及其制劑（合成藥物、天然藥物、生物

2、藥物及其制劑，中藥制劑）的質量控制方法。1綜合性綜合性 常規(guī)化學分析； 儀器分析； 計算藥物分析； x-射線衍射，熱分析； dna、蛋白質、基因分析， 免疫分析，細胞分析，體內藥物分析。2指導性指導性 眼睛學科，先峰學科 我國中藥制劑目前存在的問題：缺乏明確的質量控制標準，不能很好地打入國際市場。二藥物分析的主要任務二藥物分析的主要任務1常規(guī)藥品檢驗 藥物分析的主體、核心。 分析對象主要是各藥廠生產的常規(guī)制劑（已用于臨床）及原料藥、醫(yī)院制劑 。2為新藥研究服務 如新藥質量標準的制定 藥物動力學研究 新原料藥的合成，天然產物的研究：結構鑒定，藥物與雜質的分離3研究藥物分析新方法、新技術分析手段的

3、發(fā)展分析手段的發(fā)展：化學分析 紙色譜、tlc gc（填充柱、毛細管柱）hplc ce、cec 各種聯(lián)用技術分析狀態(tài)的發(fā)展：分析狀態(tài)的發(fā)展：靜態(tài)分析 實時動態(tài)分析分析對象的發(fā)展分析對象的發(fā)展：血漿 多細胞 單細胞、單分子手性藥物分析的發(fā)展手性藥物分析的發(fā)展：外消旋體 左、右旋體分別分析研究目的：以新方法、新技術本身為主要目的 -基礎理論研究 以分析對象為主要目的-應用研究4與藥物分析有關的其它工作三藥品質量標準三藥品質量標準是國家對藥品質量規(guī)格及檢驗方法所作的技術規(guī)定，是藥品生產、供應、使用、檢驗和管理部門共同遵循的法定依據。包括：國家藥品標準：藥典、中國生物制品規(guī)程等部頒標準：如中國醫(yī)院制劑規(guī)

4、范地方標準四藥典四藥典pharmacopoeia是記載藥品標準的法典。凡是藥典收錄的藥品，其質量不符合規(guī)定標準的均不得出廠，不得銷不得出廠，不得銷售，不得使用售，不得使用。（一）中國藥典（一）中國藥典1沿革沿革：已出版：1953，1963，1977，1985，1990，1995，2000年版2基本結構和主要內容基本結構和主要內容chp由凡例、正文、附錄和索引四部分組成。（1） 凡例凡例 1）標準規(guī)定）標準規(guī)定：對有關規(guī)定、要求和含義等所作的說明。如避光是指用不透光的容器包裝；陰涼處系指不超過20 oc等 2）檢驗方法和限度）檢驗方法和限度 chp收載的原料藥及制劑均應按規(guī)定方法進行檢驗；或將其

5、他方法與規(guī)定方法對照。 限度不是真實含量。若未規(guī)定上限，系指不超過101.0%。 3）標準品和對照品）標準品和對照品指用于鑒別、檢查和含量測定的標準物質。不包括色譜用的內標。標準品：是指用于生物檢定、抗生素或生化藥品中含量或效價測定的標準物質，按效價單位或g計。對照品：除另有規(guī)定外，均按干燥品或無水物計算后使用。 4）計量）計量：法定計量單位5）精確度）精確度精密稱定精密稱定：準確至所取重量的千分之一。稱定稱定：準確至所取重量的百分之一。取用量約若干取用量約若干：指該量不得超過規(guī)定量的10%。精密量取精密量取：指量取體積的準確度應符合該體積移液管的精密度要求。稱取、量取稱取、量取：其精確度可根

6、據數值的有效數位來確定。如稱取0.1g，指稱取重量可在0.06-0.14g范圍內；2g-1.5-2.5g；2.0g-1.95-2.05g; 2.00g-1.995g-2.005g恒重恒重：小于0.3mg按干燥品（或無水物，或無溶劑）計算按干燥品（或無水物，或無溶劑）計算：除另有規(guī)定外，應取未經干燥（或未去水或未去溶劑）的供試品進行試驗，測得干燥失重后，再在計算時從取用量中扣除空白試驗空白試驗：不加供試品或以等量溶劑替代供試液，同法操作所得結果。試驗溫度試驗溫度：如不說明，系指室溫，通常以252 為準。 6）包裝、標簽）包裝、標簽（2）正文）正文 收載不同藥品、制劑的質量標準。 藥品名稱包括：中

7、文名（中國藥品通用名稱），漢語拼音名稱和英文名稱。 *中藥材不使用英文名稱，而采用拉丁名稱。（3）附錄）附錄 主要內容：制劑通則，生物制品通則，通用檢測方法，生物檢定法，試藥與試液，溶液配制，原子量表等（4）索引：）索引：中（按漢語拼音順序排列）、英文（二）常用外國藥典（二）常用外國藥典美國藥典美國藥典usp 與美國國家處方集nf (national formulation) 合并出版；從2002年起，usp-nf將原來的每5年一版改為每年出一版，最新版為usp 26-nf 21 。 同時還發(fā)行了亞洲版。英國藥典英國藥典bp也有英國國家處方集配套出版。日本藥局方日本藥局方jp歐洲藥典歐洲藥典p

8、h. eur. 有英文和法文兩種文本。五藥品檢驗工作的基本程序五藥品檢驗工作的基本程序1取樣取樣從大量樣品中取出少量樣品，應考慮取樣的科學性、真實性和代表性。取樣基本原則：均勻、合理。2藥物的鑒別藥物的鑒別：判斷藥品的真?zhèn)胃鶕幬锏幕瘜W結構和理化性質進行某些化學反應，根據反應現象判斷；或測定理化常數或光譜特征，來判斷。其它包括藥品的外觀、顏色、氣味等的鑒別。應結合多個鑒別試驗結果進行判斷，而不能以單個鑒別試應結合多個鑒別試驗結果進行判斷，而不能以單個鑒別試驗判斷驗判斷，否則會誤判。3藥物的檢查藥物的檢查 主要指純度檢查：是限度檢查4藥物的含量測定藥物的含量測定測定主要有效成分的含量。 * 第3

9、和第4項可用來判斷藥品質量的優(yōu)劣。5檢驗報告的書寫檢驗報告的書寫完整、清楚地記錄原始資料，并寫出檢驗報告（給出結論）。六全面控制藥品質量的科學管理六全面控制藥品質量的科學管理良好藥品實驗研究規(guī)范良好藥品實驗研究規(guī)范（good laboratory practice, glp）即藥品非臨床研究質量管理規(guī)范?？茖W、可靠的研究方法才能得出有效、可靠的實驗數據，故需對新藥研究條件作嚴格規(guī)定。良好藥品臨床試驗規(guī)范良好藥品臨床試驗規(guī)范（good clinical practice, gcp）gcp可保護受試者的安全和權利，有助于保證提供有價值的臨床研究資料。良好藥品生產規(guī)范良好藥品生產規(guī)范（good ma

10、nufacture practice, gmp）即藥品生產質量管理規(guī)范良好藥品供應規(guī)范良好藥品供應規(guī)范（good supply practice, gsp） 保證藥品在運輸、貯存和銷售過程中的質量some j or http:/ 電子資源 elsvier sdosjournal of pharmaceutical and biomedical analysisjournal of chromatography ajournal of chromatography banalytical chimica actatalantatrends in analytical chemistryjourn

11、al of electroanalytical chemistryanalytical chemistryjournal of medicinal chemistrymolecular pharmaceuticsbiomacromoleculesbiochemistry analysthttp:/ electrophoresisjournal of pharmaceutical sciencejournal of separation sciencechiralityjournal of microcolumn separa

12、tionjournal of mass spectrosmetryluminescencebiomedical chromatographybiopharmaceutics and drug dispositiondrug development researchelectroanalysisjournal of bioluminescence and chemiluminescencesingle molecules藥學學報中國藥學雜志藥物分析雜志藥學通報國外醫(yī)學-藥學分冊藥學進展化學學報分析化學高等學?；瘜W學報色譜化學進展各主要大學學報第一章藥物的鑒別試驗第一章藥物的鑒別試驗（identi

13、fication test）第一節(jié)概第一節(jié)概 述述chp和其它各國藥典所收載的藥物項下的鑒別試驗方法，僅適用于貯臧在有標簽容器中的藥物，用以證實是否為所標示的藥物。這些方法不能用于鑒別未知物。一鑒別項目一鑒別項目（一）性狀：（一）性狀：包括外觀、色澤、臭、味、溶解度及一些物理常數。（二）一般鑒別試驗（二）一般鑒別試驗（general identification test, git）git僅適用于確認單一的化學藥物，對多種化學藥物的混合物或有干擾物質存在時，除另有規(guī)定外，不適用。git只能證實藥物的類別，將藥物與其它類別的藥物區(qū)分開，不能證實是哪一種藥物。（三）專屬鑒別試驗（三）專屬鑒別試驗（

14、specific identification, sit)在git的基礎上進行，可證實藥物屬于某類藥物的哪一種。sit根據每種藥物化學結構的差異及其所引起的物理化學特性的差異，采用靈敏、選擇性強的定性反應進行。二鑒別試驗條件二鑒別試驗條件1溶液的濃度：溶液的濃度：主要指被鑒別藥物的濃度，但其他試劑的濃度也應注意控制，特別是以化學反應產生的化學現象為依據進行鑒別的情況。 藥物 + 試劑 產物 （顏色、沉淀等）2溶液的溫度溶液的溫度 影響化學反應的快慢。一般溫度每升高10，可使反應速度增加2-4倍。3溶液的酸堿度溶液的酸堿度溶液的酸堿度應能使各反應物有足夠的濃度處于反應活化狀態(tài)，并使反應生成物處于

15、穩(wěn)定、易于觀測的狀態(tài)。4干擾成分干擾成分 采用專屬性更高的鑒別反應或將干擾成分分離除去，以消除干擾。試驗時間試驗時間對有機化合物的化學反應影響較大。因為有機反應能否進行，取決于舊共價鍵斷裂和新共價鍵形成的難易，而這些共價鍵的更替需要一定時間。三鑒別試驗的靈敏度三鑒別試驗的靈敏度sensitivity反應靈敏度反應靈敏度最低檢出量最低檢出量（minimum detectable quantity, mmin） ：應用某一反應，在一定反應條件下，能觀測出反應結果所需的供試品的最小量。最低檢出濃度最低檢出濃度（minimum detectable concentration, cmin）：應用某一反

16、應，在一定反應條件下，能觀測出反應結果所需的供試品的最小濃度。*檢測限檢測限（limit of detection, lod）zeptomole: 10-21 zmol；attomole: 10-18 amolfemtomole: 10-15 fmol；picomole: 10-12 pmolnanomole: 10-9 nmol2. 空白試驗空白試驗blank test消除試劑和器皿可能帶來的影響。在與供試品鑒別試驗完全相同的條件下，除不加供試品外（或以等量溶劑替代供試液），其他試劑同樣加入進行的試驗。3提高反應靈敏度的方法提高反應靈敏度的方法1）消除干擾：如熒光法需濾出天然光和激發(fā)光的干擾

17、。2）改進觀測方法：如將目視觀測溶液的顏色改為可見分光光度法。3）加入與水互不相溶的有機溶劑：濃集有色生成物（脂溶性）于有機溶劑中顏色加深，易觀察。第二節(jié)第二節(jié) 藥物的一般鑒別試驗藥物的一般鑒別試驗一鑒別方法一鑒別方法（一）化學鑒別法（一）化學鑒別法1干法干法：無溶劑參與反應 焰色試驗：鑒別鹽的類型 氣體產生法：在適當溫度條件下，加熱使供試品分解，生成有特殊氣味的氣體。濕法濕法：鑒別反應在適當溶劑中進行，發(fā)生易于觀測的化學變化，如顏色、沉淀、氣體、熒光等。 ）呈色反應鑒別法）呈色反應鑒別法： 常用反應有： 三氯化鐵呈色反應：適用于含ar-oh或可產生ar-oh的藥物。異羥肟酸鐵反應：多適用于芳

18、酸及其酯類、酰胺類。印三酮呈色反應：多適用于含脂肪胺基的藥物。重氮化-偶合顯色反應：適用于含ar-nh2 或能產生ar-nh2的藥物。氧化還原顯色反應）沉淀生成反應鑒別法）沉淀生成反應鑒別法與重金屬離子的沉淀反應：重金屬指比重大于5的金屬，如cu，ni，pb，zn，sn，w等。與硫氰化鉻銨（雷氏鹽）的沉淀反應：主要適用于生物堿及其鹽、具有芳香環(huán)的有機堿及其鹽。 3）熒光反應鑒別法）熒光反應鑒別法熒光熒光：是分子吸收了較短波長的光（激發(fā)光，通常為可見和uv光），在很短時間內發(fā)射出的較長波長的光。除去激發(fā)光源后，熒光立即熄滅。常用熒光發(fā)射形式常用熒光發(fā)射形式：藥物本身在uv或可見光下發(fā)射熒光-自發(fā)熒光。藥物溶液 + 硫酸呈酸性后，發(fā)射；藥物 + br2反應后，發(fā)射；藥物 + 間苯二酚反應后，發(fā)射- 衍生后發(fā)熒光。）氣體生成反應鑒別法）氣體生成反應鑒別法 氨氣（胺