流式細胞術(shù)的基本原理

1、流式細胞術(shù)的基本原理 流式細胞術(shù)（流式細胞術(shù)（flow cytometer，fcm）：）： 利用流式細胞儀對處于快速直線流動狀態(tài)中的單列細胞或生物顆粒進行逐個、多參數(shù)、快速的定性、定量分析或分選的技術(shù)。流式細胞儀流式細胞儀：是集現(xiàn)代物理電子技術(shù)、激光技術(shù)、光電測量技術(shù)、計算機技術(shù)以及細胞熒光化學技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)于一體的先進科學技術(shù)設備流式細胞儀分為四部分：1）流動室與液流系統(tǒng)2）光源與光學系統(tǒng)3）信號收集、轉(zhuǎn)換與分析系統(tǒng)4）細胞分選系統(tǒng)1）流動室與液流系統(tǒng)2）光源與光學系統(tǒng)激光（單色性、單向性）前向散射（fsc）側(cè)向散射（ssc）激發(fā)波長發(fā)射波長3）信號收集、轉(zhuǎn)換與分析系統(tǒng) 激發(fā)波長經(jīng)過濾

2、光片分離不同波長的光信號分別到達不同的光電倍增管(pmt)，pmt將光信號轉(zhuǎn)換成電信號，電信號輸入到放大器放大。 放大器分兩類：線性放大和對數(shù)放大。 細胞dna含量、rna含量、總蛋白質(zhì)含量等的測量一般選用線性放大測量。 細胞膜表面抗原等的檢測，由于表面抗原的分布有時要相差幾十倍，甚至幾萬倍，故取對數(shù)放大。光譜重疊與熒光補償 實際中激發(fā)波長是正態(tài)或偏態(tài)曲線，熒光素之間的波譜常有重疊，故流式細胞儀加入了電子補償系統(tǒng)，去除因光譜重疊而進入其他熒光探測器的熒光信號，即熒光補償。流式細胞術(shù)的對照設置陰性對照：調(diào)節(jié)熒光探測器合適的放大倍 數(shù)，將儀器歸零，確定樣本的基礎(chǔ)熒光域值陽性對照：檢測抗體是否有問題或確定實驗方法的穩(wěn)定性、準確性空白對照：不標記，自發(fā)熒光ps：補償對照：多色分析樣本時為熒光光譜 重疊進行的的補償調(diào)節(jié)4）細胞分選系統(tǒng) 根據(jù)某參數(shù)決定細胞液滴是否被分選，然后由充電電路對其充電，帶電液滴通過靜電場發(fā)生偏轉(zhuǎn)而分離488 nm laser+-charged platessingle cells sortedinto test tubesfals sensorfluorescence detector流式細胞術(shù)流程應用 細胞膜：流動性、膜電位、膜通透性 細胞內(nèi)離子濃度：h+、na+、k+和ca2+ 細胞周期：全周期分析、s期分析、m期分析 細胞表面蛋白質(zhì)分析：免疫細胞分型