發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素

1、白細(xì)胞介素白細(xì)胞介素-2 白介素2是一個(gè)分子量為14500的糖蛋白，它刺激已被特異性抗原或致絲裂因數(shù)啟動(dòng)的T細(xì)胞增殖 【所屬】免疫增強(qiáng)劑/其他抗腫瘤藥及輔助治療藥 【別名】 白間素, 欣吉爾, T細(xì)胞生長(zhǎng)因子 ,白細(xì)胞介素-2等 【適應(yīng)癥】主要用于腎癌、黑色素瘤和非何杰金淋巴瘤有效（Rossenberg）。LAK細(xì)胞代表1個(gè)有單核巨噬細(xì)胞，B和T淋巴細(xì)胞特征的異原的細(xì)胞體。這些LAK細(xì)胞似乎對(duì)癌細(xì)胞有特異作用。此外，LAK細(xì)胞（不象T細(xì)胞）介導(dǎo)殺傷不受MHC的約束。應(yīng)用應(yīng)用 【藥理作用】 本品可促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖與分化，誘導(dǎo)具有細(xì)胞毒樣活力的殺傷細(xì)胞，誘導(dǎo)及增強(qiáng)殺傷性T細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞

2、的活力等。 【臨床應(yīng)用】 適用于慢性活動(dòng)性乙型肝炎病毒感染等；用于腎細(xì)胞癌、黑色素瘤的治療，用于癌性胸腹水的控制及其他晚期腫瘤；用于先天或后天免疫缺陷癥的治療，如艾滋病，可提高病人細(xì)胞免疫功能和抗感染能力；各種自身免疫病的治療，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征等；對(duì)某些疾病性、桿菌性疾病、胞內(nèi)寄生菌感染性疾病，如乙型肝炎、麻風(fēng)病、肺結(jié)核、白色念珠菌感染等具有一定的治療作用。 2 生產(chǎn)過(guò)程及工藝過(guò)程 (1)發(fā)酵 工程菌為大腸桿菌，溫度敏感型。 種子用LB培養(yǎng)基； 發(fā)酵用M9CA培養(yǎng)基，30度10小時(shí)，后提高溫度至42度，誘導(dǎo)3h。 傳統(tǒng)工藝雞瘟病毒，雞瘟病毒，PHA,PHA,培養(yǎng)液培

3、養(yǎng)液 啟動(dòng)誘生啟動(dòng)誘生 37 37人白細(xì)胞粉人白細(xì)胞粉 誘生白細(xì)誘生白細(xì)胞培養(yǎng)液胞培養(yǎng)液 滅活病毒，分離滅活病毒，分離,HCl,NaOH,HCl,NaOHpH = 22.5,pH = 7.27.4,離心離心上清液上清液35%硫酸銨硫酸銨4 ，24h，離心，離心上清液上清液85%硫酸銨硫酸銨4 ，24h，離心，離心沉淀沉淀10mmol/LPBS透析透析pH = 6.5，24h透析內(nèi)液透析內(nèi)液親和層析親和層析上上Sepharose柱柱pH = 6.5親和載體親和載體I洗滌洗滌0.4mol/LNaCl，PBSpH = 6.5親和載體親和載體吸收吸收1.0mol/LNaCl,PBS透析透析pH = 6.5IL-2組分組分凝膠層析凝膠層析上上Utrogel柱柱pH = 6.5凝膠載體凝膠載體0.2mol/Ltris-HCl含含0.1%PEG2%正丁醇，正丁醇，0.2mol/L甘氨酸甘氨酸pH = 7.6IL-2酶法生產(chǎn)酶法生產(chǎn) 1 工藝流程圖IL-2工程菌工程菌斜面斜面搖瓶搖瓶發(fā)酵發(fā)酵制備包涵體制備包涵體洗滌與裂解洗滌與裂解凝膠過(guò)濾與凝膠過(guò)濾與復(fù)性復(fù)性檢定與包裝檢定與包裝 (2) 分離純化 包涵體制備 離心收集，菌體懸于EDTA溶液中，用超聲波破碎細(xì)胞，后8000r/min離心，收集沉淀(包涵體和細(xì)胞碎片)。 包涵體洗滌及裂解： 用Tris-HCl洗滌3次，離心收集沉淀，用鹽酸胍變性，