蒽酮比色法測可溶性糖

1、蒽酮比色法測可溶性糖一、實驗?zāi)康?.1 學(xué)習(xí)分光光度法的基本原理1.2 學(xué)習(xí)對水果中糖含量進行測定的方法二、實驗原理2.1 分光光度法基本原理 物質(zhì)對光吸收的定量關(guān)系很早就受到了科學(xué)家的注意并進行了研究。皮埃爾布格(Pierre Bouguer)和約翰海因里希朗 伯(Johann Heinrich Lambert)分別在 1729 年和 1760 年闡明了物 質(zhì)對光的吸收程度和吸收介質(zhì)厚度之間的關(guān)系； 1852 年奧古斯 特比爾(August Beer)又提出光的吸收程度和吸光物質(zhì)濃度也 具有類似關(guān)系， 兩者結(jié)合起來就得到有關(guān)光吸收的基本定律 布格朗伯比爾定律，簡稱比爾朗伯定律。溶液中的物質(zhì)在

2、光的照射激發(fā)下， 產(chǎn)生對光的吸收效應(yīng)， 不 同的物質(zhì)具有各自選擇性的吸收光譜， 因此，當(dāng)某單色光通過溶 液時，能量會被吸收而減弱， 光能量減弱的程度和物質(zhì)濃度有一 定比例關(guān)系，即符合于比色原理比爾定律。朗伯 -比爾定律： A=lg(1/T)=KbcA:為吸光度；T:為透射比，是投射光強度比上入射光強度；K: 摩 爾 吸 收 系 數(shù) 。 它 與 吸 收 物 質(zhì) 的 性 質(zhì) 及 入 射 光 的波長入有關(guān)；C：為吸光物質(zhì)的濃度；b：為吸收層厚度；物理意義：是當(dāng)一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的 西光物質(zhì)時，起其吸光度A與吸光物質(zhì)的濃度 c及吸收層厚度b 成正比。22蒽酮比色法原理蒽酮比色法是一個

3、快速而簡便的定糖方法。 蒽酮可以和游離 的己糖或多糖中的己糖基， 戊醛糖及己糖醛酸反應(yīng)，反應(yīng)后溶液 呈藍綠色，在620nm處有最大吸收。蒽酮可與其他一些糖類發(fā)生反應(yīng)， 但顯現(xiàn)的顏色不同。當(dāng)樣 品中存有含較多色氨酸的蛋白質(zhì)時，反應(yīng)不穩(wěn)定，呈現(xiàn)紅色。對 于特定的糖類，反應(yīng)較穩(wěn)定。本法多用于測定糖原含量，亦可用于測定葡萄糖含量。HO- -CH'-CHOH|濃H占5H CH CM CHO| | OH OHHOCHCHOH|濃 HjSOxHOCHiCH CHOHOjA.OH OHCHCHII IICH CCHO + 3H O/oCHCHII IIHO CHCCCHO + 3HQ/o已柚三、實驗試

4、劑3.1蒽酮試劑：取0.2g蒽酮溶于100mL 80%（V/V）硫酸中，硫酸當(dāng)日配制使用；3.2標準葡萄糖溶液（0.1mg/mL）:可滴加幾滴甲苯作防腐劑；3.3糖樣品溶液四、實驗操作步驟4.1制作標準曲線：取干試管5支，依次加入標準糖溶液OmL，0.1mL，0.2mL，0.4mL，0.8mL并依次用蒸餾水補足體積到1mL，各管均加入蒽酮試劑4mL,震搖混勻。沸水浴準確煮沸10 min，室溫放置10min， 用1號試管溶液調(diào)零，比色測定 A620 （同時測定樣品）。用標 準糖溶液濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，制作標準曲線。管號12345葡萄糖標準液（ml）00.10.20.40.6蒸餾水（ml）10.90.80.60.4葡萄糖含量（ug）0102040504.2樣品含糖量測定將樣品溶液稀釋1000倍，吸取1mL置試管中，再加入4mL 蒽酮試劑，沸水浴中煮沸 10分鐘，取出后冷卻10min后比色， 其他條件與做標準曲線相同，測得的吸光度值由標準曲線查算出樣品液的糖含量 計算：樣品糖含量（） =（CX V1x D/W x V2x 106）x 100C標準曲線上查出