變形桿菌食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則WST

1、變形桿菌食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則WS/T 919961 主題內(nèi)容與適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了變形桿菌食物中毒的診斷標(biāo)準(zhǔn)、判定原則和處理原則。本標(biāo)準(zhǔn)適用于變形桿菌食物中毒。2 引用標(biāo)準(zhǔn)GB 4789.28 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)染色法、培養(yǎng)基和試劑GB 14938 食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及技術(shù)處理總則3 診斷標(biāo)準(zhǔn)3.1 流行病學(xué)特點(diǎn)：3.1.1 變形桿菌食物中毒在細(xì)菌性食物中毒中是較常見的一種，發(fā)病季節(jié)多在夏秋季節(jié)。3.1.2 引起中毒的食品，主要以動(dòng)物性食品為主，其次為豆制品和涼拌菜等，由于制作時(shí)造成污染而引起食物中毒。3.1.3 本菌食物中毒潛伏期多數(shù)為518h。3.2 臨床表現(xiàn)臨床特征以上腹部刀絞樣痛

2、和急性腹瀉為主，有的伴以惡心、嘔吐、頭疼、發(fā)熱，體溫一般在3839之間，病程較短，一般13d可恢復(fù)，很少有死亡。3.3 實(shí)驗(yàn)室診斷3.3.1 由中毒食品和患者吐瀉物中檢出占優(yōu)勢(shì)、且生化及血清學(xué)型別相同的變形桿菌。3.3.2 取患者急性期和恢復(fù)期(中毒后1215d)的血清，用分離的菌株做血清凝集效價(jià)測定，恢復(fù)期 滴度高于急性期滴度四倍，即有診斷意義。同時(shí)以健康人做為對(duì)照，應(yīng)為陰性。3.3.3 變形桿菌檢驗(yàn)方法見附錄A。4 判定原則4.1 具有本菌的流行病學(xué)與臨床表現(xiàn)。4.2 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)的各項(xiàng)指標(biāo)的檢定結(jié)果均與變形桿菌的特點(diǎn)相符。4.3 綜合分析上述特點(diǎn)，作出正確判定。5 處理原則立即停止進(jìn)食一切

3、可疑中毒食物，根據(jù)患者癥狀及時(shí)搶救與對(duì)癥治療。附錄A變形桿菌食物中毒檢驗(yàn)方法(補(bǔ)充件)A1 增菌培養(yǎng)：固體樣品加適量滅菌鹽水，均質(zhì)后吸取混懸液接種于GN肉湯，36士1培養(yǎng)24h。A2 分離平板：接種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板或SS平板，36士1培養(yǎng)24h。A3 伊紅美藍(lán)平板和SS瓊脂平板，生長菌落無色透明或半透明圓形菌落，普通變形桿菌和奇異變形桿菌在伊紅美藍(lán)平板上可呈現(xiàn)片狀蔓延生長菌落，挑取菌落接種三糖鐵培養(yǎng)基。A4 生化試驗(yàn)：三糖鐵培養(yǎng)基，乳糖陰性，葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，硫化氫陽性或陰性。尿素和苯丙氨酸酶陽性，可進(jìn)行生化試驗(yàn)，其鑒別見表A1、表A2、表A3、表A4。表A1 變形桿菌屬、普羅菲

4、登斯菌屬、摩根氏菌屬鑒別表表A2 變形桿菌屬四個(gè)生化群的鑒別表A3 摩根氏菌屬兩個(gè)生化群的鑒別表A4 普羅菲登斯菌屬四個(gè)生化群的鑒別A5 血清學(xué)凝集分型試驗(yàn)：普通變形桿菌和奇異變形桿菌O抗原為49個(gè)，H抗原為19個(gè)，見表A5。表A5 普通和奇異變形桿菌簡化抗原表A6 患者血清效價(jià)測定：A6.1 取患者急性期(發(fā)病后23d)和恢復(fù)期血清(1215d)進(jìn)行血清效價(jià)測定，同時(shí)取健康人血清做為對(duì)照。A6.1.1 稀釋血清：以生理鹽水稀釋血清，1：4，1：8倍比稀釋到1：640，每管0.5mL，同時(shí)做一鹽水對(duì)照，每個(gè)血清稀釋兩列。A6.1.2 將不同樣品中分離出的菌株，接種營養(yǎng)瓊脂斜面36士1培養(yǎng)182

5、4h，用鹽水洗下，制成H和O抗原，H抗原在菌液中加入0.2%甲醛，O抗原系將濃菌加入等量的95%酒精，于36±1過夜，兩種抗原分別經(jīng)離心沉淀，棄去上清液，其沉淀物用鹽水稀釋成含10億菌/mL。A6.1.3 在每管0.5mL的稀釋血清中一列加H抗原，一列加入O抗原，各加0.5mL，振蕩搖勻，置36±11824h，觀察結(jié)果。A6.1.4 凝集反應(yīng)呈“+”的最后一管，為其效價(jià)滴度。A7 交互吸收試驗(yàn)：取不同樣品中分離的菌株，進(jìn)行交互吸收試驗(yàn)。A7.1 抗原制備：將菌株接種營養(yǎng)瓊脂36±11824h，用生理鹽水洗下菌苔，制成含菌量為100億/mL2000億/mL，按0.5

6、%的濃度加入甲醛，殺菌，置36±11824h。A7.2 免疫血清制備：選擇體重2kg左右的健康家兔，從耳靜脈接種上述抗原，第一次2.5億個(gè)菌，第二次5億個(gè)菌，第三次10億個(gè)菌，第四次20億個(gè)菌體，每次間隔5d，在最后一次710d從耳靜脈取血做效價(jià)測定，一般效價(jià)在16400以上，即可從頸動(dòng)脈或心臟取血。A7.3 交互吸收：A7.3.1 吸收菌制備：將菌株接種于克氏瓶中營養(yǎng)瓊脂，置36±1培養(yǎng)24h，用少許鹽水洗下，制成濃厚菌液，每毫升含500億菌體。加入2%甲醛，于36±123d殺菌，經(jīng)做無菌試驗(yàn)合格后使用。A7.3.2 吸收試驗(yàn)：血清用110000硫柳汞的生理鹽水稀釋成15或110，每毫升血清中加入吸收菌0.20.8g，振搖混勻，置36±13h，并經(jīng)常搖動(dòng)，離心沉淀，分出血清與制備免疫血清的抗原細(xì)菌做玻片凝集試驗(yàn)，如還有凝集，繼續(xù)吸收，直至無凝集。再與吸收菌做凝集試驗(yàn)，如不凝集證實(shí)為同一型別，反