動(dòng)注射在線過(guò)濾稀釋原子吸收法測(cè)定銀杏黃酮的含量

1、動(dòng)注射在線過(guò)濾稀釋原子吸收法測(cè)定銀杏黃酮的含量    【摘要】     目的建立復(fù)方銀杏葉片中銀杏總黃酮含量的測(cè)定方法。方法在中性介質(zhì)中，銀杏黃酮與Cu2+締合為棕黃色沉淀，經(jīng)流動(dòng)注射在線過(guò)濾稀釋，以AAS法測(cè)定反應(yīng)剩余Cu2+的量來(lái)間接測(cè)定銀杏黃酮的含量。結(jié)果銀杏黃酮濃度在4.030 g/ml范圍內(nèi)與反應(yīng)中剩余Cu2+的量呈良好的線性關(guān)系，方法的標(biāo)準(zhǔn)差1.1%，回收率101%105%。結(jié)論該法操作簡(jiǎn)便, 易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，結(jié)果準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，可作為銀杏葉片的質(zhì)量控制方法。   

2、0; 【關(guān)鍵詞】  銀杏黃酮 原子吸收 在線過(guò)濾 流動(dòng)注射    銀杏Ginkgo biloba葉的主要活性物質(zhì)是銀杏黃酮類（flavonoids）和銀杏內(nèi)酯化合物，研究表明，銀杏黃酮類物質(zhì)能促進(jìn)心腦血管系統(tǒng)的代謝，作為植物藥物能有效促進(jìn)神經(jīng)末梢和大腦的血液流通，對(duì)治療心腦血管病和老年癡呆等多種頑疾具有明顯的效果1，目前其測(cè)定方法主要有高效液相色譜法2，3、紫外分光光度法4，5 、熒光分光光度法6。    本文是在中性介質(zhì)條件下，利用銀杏黃酮結(jié)構(gòu)中的臨酚羥基與醋酸銅絡(luò)合，產(chǎn)生棕黃色沉淀，用流動(dòng)注射在線過(guò)濾

3、-原子吸收光譜法（FI-AAS）測(cè)定上層清液中剩余Cu2+ 的量，從而間接測(cè)定了銀杏黃酮的含量。本法操作簡(jiǎn)便、快捷、靈敏度高、節(jié)省試劑、易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，同時(shí)克服了一般AAS法中沉淀手工分離、洗滌、稀釋的繁瑣，用于銀杏黃酮的測(cè)定，獲得滿意結(jié)果。1  器材與方法1.1  儀器與試劑TAS-968原子吸收分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）；IFIS-B型智能流動(dòng)注射進(jìn)樣器（西安瑞科數(shù)字記錄有限公司）； 420Aplus型酸度計(jì)（美國(guó)ORION公司）；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國(guó)華電器有限公司）。    銀杏黃酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取0.100 0

4、 g銀杏黃酮標(biāo)準(zhǔn)品（99.2%，鼎國(guó)生物責(zé)任有限公司提供），用50%乙醇溶解并定容于100 ml容量瓶中，配制成1.0 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用時(shí)稀釋成0.2 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)使用液；醋酸銅溶液（1.0 mg/ml），用時(shí)稀釋成0.1 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)使用液。     以上試劑均為分析純，水為二次去離子水。1.2  儀器最佳條件波長(zhǎng)324.7 nm；通帶寬0.4 nm；燈電流3.0A；燃燒器高度5 mm；乙炔流量1.5 L/min，空氣流量8.5 L/min。1.3  方法原理銀杏黃酮的基本結(jié)構(gòu)通式為：由于銀杏黃酮分子結(jié)構(gòu)中存在臨酚羥基，故黃

5、酮分子在中性介質(zhì)條件下能與銅離子絡(luò)合生成難溶的棕黃色沉淀，經(jīng)過(guò)流動(dòng)注射在線過(guò)濾分離后，通過(guò)原子吸收法測(cè)定濾液中剩余的Cu2+，從而間接測(cè)定銀杏黃酮的含量。1.4   實(shí)驗(yàn)方法移取一定量的銀杏黃酮標(biāo)準(zhǔn)使用液于10 ml比色管中，加0.1 mg/ml的醋酸銅溶液，用水稀釋至刻度，充分混勻，在80 水浴中反應(yīng)20 min后，將溶液引入FI-AAS流路（見(jiàn)圖1）進(jìn)行測(cè)定。R試劑  S樣品  P蠕動(dòng)泵  F過(guò)濾器  RC反應(yīng)盤(pán)管  D原子吸收分光光度計(jì)  W廢液圖1  FIAAS流路圖（略）2  

6、; 結(jié)果與討論2.1  化學(xué)參數(shù)的影響2.1.1  反應(yīng)溫度的影響移取一定量的銀杏標(biāo)準(zhǔn)使用液，按實(shí)驗(yàn)方法在20100范圍內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。見(jiàn)圖2。結(jié)果表明，隨著溫度的升高，沉淀增多，吸光度值逐漸減??；當(dāng)溫度在8090時(shí)吸光度值較穩(wěn)定，說(shuō)明此時(shí)沉淀反應(yīng)完全。因此，實(shí)驗(yàn)在80水浴中進(jìn)行。圖2  反應(yīng)溫度對(duì)吸光度的影響（略）2.1.2   酸度的影響溶液酸度的大小對(duì)沉淀的生成有一定影響。取一定量銀杏黃酮標(biāo)準(zhǔn)使用液，在不同的pH條件下，按實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，見(jiàn)圖3。由圖3可看出，pH值在6.08.0范圍內(nèi)吸光度值小而穩(wěn)定。當(dāng)pH6時(shí)，沉淀量少，溶液中剩余Cu2

7、+濃度偏高，吸光度值較大；當(dāng)pH8時(shí)，生成的沉淀物可能部分溶解，吸光度值較大。本文反應(yīng)選擇在中性介質(zhì)中進(jìn)行。圖3  pH值對(duì)反應(yīng)的影響（略）2.1.3   反應(yīng)時(shí)間的影響取一定量的銀杏黃酮標(biāo)準(zhǔn)使用液，按實(shí)驗(yàn)方法操作，在80水浴中反應(yīng)不同的時(shí)間，測(cè)定其吸光度，見(jiàn)圖4。結(jié)果表明，反應(yīng)25 min以后，吸光度值趨于穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)選用反應(yīng)時(shí)間為25 min。圖4  反應(yīng)時(shí)間對(duì)吸光度的影響（略）2.1.4  試劑用量的影響醋酸銅溶液的用量對(duì)測(cè)定結(jié)果有一定影響。實(shí)驗(yàn)選用不同量的醋酸銅試劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明：沉淀劑用量太少，沉淀不易生成；用量太多，造成標(biāo)準(zhǔn)曲線彎

8、曲。當(dāng)Cu2+用量大于1.0 ml時(shí)，溶液的吸光度值穩(wěn)定且靈敏，反應(yīng)完全，但不容易達(dá)到在線稀釋的目的。故本文選擇Cu2+ 用量為1.0 ml。2.2  流動(dòng)注射參數(shù)的選擇2.2.1  采樣環(huán)體積、混合管長(zhǎng)度及載流流速的影響在最佳化學(xué)反應(yīng)條件下，研究了采樣環(huán)體積、混合管長(zhǎng)度及載流流速對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。結(jié)果表明，隨著采樣環(huán)體積增大，吸光度也增大，但為了達(dá)到在線稀釋的目的，需要采用小體積的采樣環(huán)；混合管道越長(zhǎng)，稀釋效果越明顯，但當(dāng)管長(zhǎng)超過(guò)1 m后，吸光度增加緩慢，而且過(guò)長(zhǎng)的管道也降低了采樣頻率；當(dāng)采樣體積、混合管道一定時(shí)，隨流速的增加，吸光度值逐漸增大，但當(dāng)流速大于4.5 ml/

9、min后，吸光度增加緩慢。這是由于載流越快，對(duì)流作用的增強(qiáng)與擴(kuò)散作用的減弱相抵消，分散度不再變化7，綜合考慮，本文選擇流動(dòng)注射參數(shù)的最佳值見(jiàn)表1。2.2.2  過(guò)濾器的選擇本文選用了內(nèi)填微孔濾膜為0.22 m的柱形過(guò)濾器，過(guò)濾效果比較理想，重現(xiàn)性也好。過(guò)濾器外徑16 mm，內(nèi)徑12 mm，進(jìn)出口孔徑1 mm，內(nèi)填樹(shù)脂做的微孔濾膜一張。表1  流動(dòng)注射參數(shù)的優(yōu)化（略）2.3  重復(fù)性實(shí)驗(yàn)分別移取1 ml銀杏黃酮的標(biāo)準(zhǔn)使用液10份，按實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%。2.4   標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制     分

10、別移取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.6 ml的銀杏黃酮使用液于10 ml比色管中，按實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定，以吸光度A對(duì)濃度C繪制工作曲線，如圖5。其線性回歸方程：A=-0.016 2C+0.619 8，r = 0.999 6。圖5  銀杏黃酮的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線（略）2.5   共存物的影響經(jīng)銀杏黃酮內(nèi)含物純品驗(yàn)證：在銀杏黃酮標(biāo)準(zhǔn)液中分別加入同倍于銀杏黃酮的淀粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、滑石粉溶液，糊精、乳糖、維生素C，對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)影響；而同倍的氨基酸、Pb2+對(duì)測(cè)定有干擾，但在一般情況下，銀杏黃酮中氨基酸、Pb2+ 含量較少。為了減少氨基酸對(duì)測(cè)定的影

11、響，建議選用銀杏黃酮在4.030 g的低濃度進(jìn)行測(cè)定。3  樣品的測(cè)定3.1   樣品的前處理準(zhǔn)確稱取銀杏黃酮藥品15粒，研磨混勻，稱取適量（相當(dāng)于銀杏黃酮100 mg）溶解，定容于100 ml容量瓶中，于過(guò)濾后取其濾液10 ml定容于100 ml容量瓶中，待測(cè)定。3.2   樣品測(cè)定取銀杏黃酮樣品溶液1 ml，按實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定，計(jì)算樣品含量，同時(shí)做回收率實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表2。表2  樣品的測(cè)定結(jié)果及方法回收率（略）    【參考文獻(xiàn)】  1 黃天芳.銀杏資源開(kāi)發(fā)現(xiàn)狀J.生物學(xué)雜志，1997，14（2）:26.2 袁 龍.高效液相色譜法測(cè)定銀杏葉片劑中銀杏黃酮含量J.西北藥學(xué)雜志,2004,19(6):246.3 董文庚，鄧曉麗，苗鳳智. HPLC法測(cè)定銀杏葉中黃酮的含量J.理化檢驗(yàn)·化學(xué)分冊(cè) , 2005,41(8)：63.4 曾凡駿，陳松波，曾 里，等.一種改進(jìn)的銀杏黃酮紫外分光光度檢測(cè)方法的研究J.食品科學(xué) , 2003,24(11) :102.5 上官小東，郎惠云，趙