谷精草總黃酮提取及對(duì)羥自由基清除作用研究

1、谷精草總黃酮提取及對(duì)羥自由基清除作用研究         作者：袁建梅，尚學(xué)芳，汪應(yīng)靈，席榮英，趙曉霞 【摘要】 目的探討谷精草總黃酮的提                          作者：袁建梅，尚學(xué)芳，汪應(yīng)靈，席榮英，趙曉霞 【摘要】  目

2、的探討谷精草總黃酮的提取、鑒別及對(duì)羥自由基的清除作用。方法利用超聲波乙醇浸提法提取谷精草中的黃酮類化合物，采用化學(xué)方法對(duì)提取物進(jìn)行定性鑒別，通過(guò)分光光度法測(cè)定總黃酮含量，并且考察黃酮提取液對(duì)羥自由基的清除作用。結(jié)果谷精草中總黃酮含量為5.09%，回收率為102.1%。結(jié)論該方法簡(jiǎn)單可靠，能夠有效提取谷精草黃酮，而且黃酮提取液對(duì)羥自由基有一定的清除作用。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用谷精草提供了理論依據(jù)。 【關(guān)鍵詞】  谷精草; 總黃酮; 清除羥自由基Abstract：ObjectiveTo study the extraction and identification of total

3、 flavonoids from Eriocaulon buergerianum Koern and its Scavenging activity on hydroxyl free radical. MethodsThe total flavonoids from Eriocaulon buergerianum Koern was extracted with ethanol as the solvent by ultrasonic. The quality of extracted flavonoids was identified by chemical methods,and the

4、content of total flavonoids was determined with spectrophotometry. In addition, the effect of extracted flavonoids on hydroxyl free radical was investigated. ResultsThe content of total flavonoids from Eriocaulon buergerianum Koern was 5.09% and the recovery rate was 102.1%. ConclusionIt is an ideal

5、 way to extract flavonoids from Eriocaulon buergerianum Koern. The extracted flavonoids show strong scavenging activity on hydroxyl free radical. The results provide a theoretical basis for further development and use of Eriocaulon buergerianum Koern.Key words： Eriocaulon buergerianum Koern; Total f

6、lavonoids; Scavenging hydroxyl free radical谷精草來(lái)源于谷精草科(Eriocaulaceae)植物谷精草Eriocaulon buergerianum Koern.的干燥帶花莖的頭狀花序1，別名戴星草、珍珠草，生長(zhǎng)于水稻田或池沼邊潮濕處，主產(chǎn)于江蘇、浙江、湖北，是一種藥食同源植物，味辛、甘，性平，具有祛風(fēng)散熱、明目退翳的功效2。臨床上常用于治療眼結(jié)膜炎、結(jié)膜云翳、夜盲癥、慢性鼻竇炎等疾病。谷精草中含有黃酮類化合物，大量研究顯示3，4，黃酮類化合物具有抗菌、消炎、降血糖、降血壓、提高免疫力、抗衰老、抗癌等作用，還可以消除人體內(nèi)活性氧自由基。自由基具有強(qiáng)氧

7、化性，在正常情況下，人體內(nèi)的自由基處于不斷產(chǎn)生與清除的動(dòng)態(tài)平衡，確保機(jī)體正常的生命活動(dòng)，當(dāng)體內(nèi)自由基過(guò)量產(chǎn)生或人體自身清除自由基能力下降，自由基可損害機(jī)體的組織和細(xì)胞，會(huì)導(dǎo)致多種疾病的產(chǎn)生與惡化5，6。因此，對(duì)于黃酮類化合物的研究引起廣泛關(guān)注，但對(duì)于谷精草黃酮的提取及谷精草黃酮對(duì)自由基的清除作用尚少有報(bào)道。利用超聲波提取植物中的有效成分可以縮短提取時(shí)間，減少溶劑用量，提高提取率7，8，為此，本文采用超聲波提取谷精草黃酮，對(duì)谷精草黃酮提取液進(jìn)行定性鑒別，同時(shí)還考察了黃酮提取液對(duì)羥自由基的清除作用。1 儀器與材料1.1 儀器752型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海菁華科技儀器有限公司);SK3310HP

8、超聲波清洗器：(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司);SBH- II循環(huán)水式真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司);BS244 電子分析天平(德國(guó)Sartourus公司);R206D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申生科技有限公司);WD-9403D紫外分析儀(北京六一儀器廠);索氏提取器。1.2 材料谷精草(購(gòu)買于河南省新鄉(xiāng)市張仲景大藥房);蘆丁對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);石油醚(沸程6090 )、無(wú)水乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、濃鹽酸、三氯化鐵、三氯化鋁、鎂粉、苯、醋酸乙酯、冰醋酸、雙氧水、硫酸亞鐵、水楊酸均為分析純。2 方法與結(jié)果2.1 總黃酮的提取稱取谷精草，烘干，粉碎，將粉碎后的谷精草粉末包好置于索氏提

9、取器內(nèi)，用石油醚加熱回流提取脫脂6 h，此時(shí)抽提液呈無(wú)色，脫脂后粉末質(zhì)量為原粉末的95.62 %。精密稱取脫脂后的谷精草粉末3.000 0 g，加75 ml 60 %乙醇，在70 超聲波提取60 min，提取4次，抽濾，合并4次濾液，減壓回收乙醇至濾液僅剩25 ml左右，放置于100 ml容量瓶中，用60 %乙醇稀釋至刻度，制得谷精草提取液。2.2 谷精草總黃酮含量測(cè)定2.2.1 測(cè)定方法依據(jù)以蘆丁為對(duì)照品測(cè)定谷精草中總黃酮的含量，黃酮化合物與Al3+在堿性條件下形成絡(luò)合物，此絡(luò)合物在可見(jiàn)區(qū)有穩(wěn)定的特征吸收峰。2.2.2 對(duì)照品溶液制備準(zhǔn)確稱取120 干燥且恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0.020 0 g，

10、以60 %乙醇溫?zé)崛芙?，放冷，?0 %乙醇定容至 100 ml容量瓶中，制成0.200 0 mg/ml儲(chǔ)備液用。2.2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇分別取蘆丁儲(chǔ)備液、提取液適量，按“2.2.4”項(xiàng)下方法操作，在400700 nm范圍內(nèi)分別測(cè)定其吸光度，結(jié)果表明蘆丁、提取液中的黃酮化合物與Al3+ 形成的絡(luò)合物，均在510 nm處有最大吸收，所以選擇510 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密移取蘆丁儲(chǔ)備液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10 ml容量瓶中，分別加入60 %乙醇使成5 ml，加入5 % NaNO2 0.3 ml，搖勻，放置6 min，加入10 % Al(NO3)3 0.3 ml，搖勻，放置6 min，加入4% NaOH 4 ml，分別用60 %乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15 min，以試劑空白為參比溶液，在510 nm處測(cè)其吸光度。吸光度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。表1 蘆丁對(duì)照液吸光度值2.2.5 樣品總黃酮含量測(cè)定精密吸取1.00 ml提取液于25 ml容量瓶中，按“2.2.4”項(xiàng)下方法測(cè)定A=0.494，根據(jù)回歸方程求得提取液