COC暴露及RAAS通路基因MicroRNA結(jié)合區(qū)位點多態(tài)與女性腦卒中發(fā)病風險的關(guān)聯(lián)研究

1、COO露及RAAS通路基因MicroRNA結(jié)合區(qū)位點多態(tài)與女性腦卒中發(fā)病風險的關(guān)聯(lián)研究復(fù)方口服避孕藥（combinedoralcontraceptive,COC是一種簡便、高效的避孕節(jié)育方法，在全球應(yīng)用廣泛，據(jù)估計目前全世界有將近一億的育齡婦女青睞選擇COCS行避孕。除確切的避孕效果之外，COC還具有許多其他方面的健康益處：可以預(yù)防貧血、異位妊娠、骨質(zhì)疏松癥，治療功能失調(diào)性子宮出血、改善多囊卵巢綜合癥及高雄激素水平過高癥狀、緩解子宮內(nèi)膜異位癥、治療子宮內(nèi)膜增生及息肉等。然而人們更加關(guān)注的是COC可能產(chǎn)生的嚴重不良反應(yīng)的風險：如升高血壓、增加心肌梗塞、靜脈血栓栓塞及腦卒中等心血管疾病的發(fā)病風險等

2、。腦卒中作為COC勺一種罕見且嚴重的不良反應(yīng)，一直為研究者所關(guān)注。在不用人群中所開展的COC與腦卒中發(fā)病風險的關(guān)聯(lián)研究所得到的結(jié)果不盡相同,就算是同樣使用COCK婦女也僅有一小部分發(fā)生腦卒中，這些都提示著特殊的遺傳因素能夠影響腦卒中的易感性。腎素-血管緊張素-醛固酮通路（reninangiotensinaldosteronesystem,RAAS）因其維持血管功能、調(diào)節(jié)動脈血壓等方面的重要作用成為腦卒中分子遺傳學研究的重要候選基因通路。同時COC中的雌激素可以激活RAAS1路）如升高AGTAGTR1勺表達水平）進而影響心血管疾病的發(fā)生。因此,RAAS通路很有可能是介導(dǎo)雌激素與腦卒中發(fā)病增加的重

3、要機制之一。研究發(fā)現(xiàn)MicroRNA （miRNA）在調(diào)控RAAS通路相關(guān)基因的表達方面起著著重要的作用,miRNA通過與靶mRNAS勺3UTRs非翻譯區(qū)）不完全互補配對）從而抑制翻譯或加速mRNA勺退化降解。而靶基因miRNA結(jié)合區(qū)的單核甘酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphisms,SNP位點能夠影響miRNA與靶區(qū)域的結(jié)合效率，引起miRNA調(diào)控作用發(fā)生變化，可能會誘導(dǎo)相應(yīng)的表型-疾病狀態(tài)。RAAS通路AGTR基因上的rs5186位點的基因突變使其與miR-155的結(jié)合效能發(fā)生改變，導(dǎo)致AGTRl的表達異常，進而影響高血壓的發(fā)生。但目前尚無RAAS通路miRNA吉

4、合區(qū)多態(tài)性位點與女性腦卒中關(guān)聯(lián)研究的報道。本研究以CO（暴露及RAAS通路基因miRNA吉合區(qū)域位點多態(tài)為切入點,采用生物信息學技術(shù),篩選RAAS通路基因miRNA吉合區(qū)域的SNP位點，并探討這些多態(tài)位點與中國女性腦卒中發(fā)病風險的關(guān)聯(lián)，以期找出中國女性人群腦卒中遺傳易感性標志物。并進一步分析遺傳因素之間、遺傳因素與環(huán)境因素之間的聯(lián)合作用對腦卒中發(fā)病風險的影響。研究結(jié)果對于完善腦卒中防治策略、指導(dǎo)安全避孕、促進女性健康具有重要意義。目的本研究旨在系統(tǒng)探討CO（暴露、RAAS通路基因miRNAs結(jié)合位點多態(tài)與中國女性腦卒中發(fā)病風險的關(guān)系，并在此基礎(chǔ)上進一步分析陽性位點間、COC暴露與陽性位點間的聯(lián)

5、合作用對腦卒中發(fā)病風險的影響。方法在中國女性避孕藥具使用隊列研究的基礎(chǔ)上，采用病例-對照研究設(shè)計，收集隊列中確診的腦卒中新發(fā)病例共453例，并按年齡、地區(qū)匹配919例對照，收集研究對象的避孕史（COC暴露情況）、個人疾病史、生育史等流行病學資料，并采集空腹靜脈血。利用miRNA靶基因多態(tài)性位點預(yù)測軟件及SNP數(shù)據(jù)庫，篩選出RAAS通路基因miRNAs結(jié)合區(qū)域的多態(tài)性位點（AGTRlrs5186、AGTR2rs5194NR3C2rs5534AGTrs7079、AVPR1Ars11174811），采用TaqMan探針技術(shù)對篩選出的位點進行檢測分型。結(jié)果1.COC暴露、高血壓等影響因素與女性腦卒中發(fā)

6、病風險的關(guān)聯(lián)1.1COC暴露與腦卒中發(fā)病風險的關(guān)聯(lián)COC使用者發(fā)生腦卒中的風險是未使用者的1.31倍(OR=1.31,95%C:1.01-1.71),發(fā)生出血型腦卒中的風險是未使用者的1.83倍(OR=1.83,95%C:1.25-2.66)，且腦卒中的發(fā)病風險隨著COCR積使用時間的延長而增加，趨勢性檢驗P<0.001oCOCR積使用時間達到20年的女性發(fā)生出血型腦卒中及梗塞型腦卒中的風險是未使用者的2.89倍及1.95倍。1.2腦卒中影響因素的單因素logistic回歸分析高血壓可以顯著升高女性腦卒中的發(fā)病風險(OR=12.18,95%CI:8.85-16.78),其中出血型

7、腦卒中的發(fā)病風險增加6.90倍(OR=7.90,95%C:5.12-12.18)，梗塞型腦卒中的發(fā)病風險增力口15.80倍(OR=16.80,95%C:10.84-26.05);高脂血癥可以使腦卒中的發(fā)病風險則略有增加(OR=1.70,95%CI:1.35-2.16),其中梗塞型腦卒中的風險增加0.97倍(OR=1.97,95%C:1.48-2.63)，但并不升高出血型腦卒中的發(fā)病風險。2.RAAS通路基因miRNA結(jié)合區(qū)SNPs與腦卒中發(fā)病風險的關(guān)聯(lián)2.1SNPS與腦卒中發(fā)病風險的關(guān)聯(lián)調(diào)整年齡、地區(qū)、高血壓、高脂血癥等因素后,miR-155的靶基因AGTR1上的rS5186位點的多態(tài)性改變與

8、出血型腦卒中的發(fā)生成正關(guān)聯(lián),miR-539/miR-584的靶基因AGT上的rs7079位點的多態(tài)性改變與梗塞型腦卒中的發(fā)生成負關(guān)聯(lián)。與野生型rs5186AA基因型相比)雜合型rs5186AC及AC/CC基因型均可以增加出血型腦卒中的發(fā)病風險(OR=1.83,95%CI:1.10-2.97;OR=1.74,95%CI:1.06-2.87);與野生型rs7079CC基因型相比)雜合型CA及CA/AA基因型可以降低梗塞型腦卒中的發(fā)病風險(OR=0.62,95%CI:0.43-0.90;OR=0.58,95%CI:0.56-0.85)o2.2RAAS通路基因miRNA吉合區(qū)位點多態(tài)與腦卒中發(fā)病風險的

9、分層分析對rs5186位點的基因型與出血型及梗塞型腦卒中的發(fā)病風險進行了分層分析，發(fā)現(xiàn)在年齡55歲及BMI<24的人群中，攜帶rs5186AC/CC基因型可以升高出血型腦卒中的發(fā)病風險(OR=1.93,95%CI:1.02-3.646;OR=1.88,95%CI1.01-3.52);BMI<24的女性攜帶rs5186AC/CC基因型可以升高梗塞型腦卒中的發(fā)病風險(OR=1.94,95%CI:1.11-3.38)。對rs7079位點的基因型與出血型及梗塞型腦卒中的發(fā)病風險進行了分層分析，在年齡55歲、患有高血壓或高脂血癥的人群中，攜帶AGT基因的rs7079CA/AA

10、基因型可以顯著降低塞型腦卒中的發(fā)病風險(OR=0.54,95%C:0.35-0.83;OR=0.62,95%C:I0.42-0.91;OR=0.60,95%C:I0.38-0.93)。3.聯(lián)合作用分析3.1rs5186位點和rs7079位點的聯(lián)合作用與腦卒中發(fā)病風險的關(guān)聯(lián)rs5186位點和rs7079位點風險等位基因的聯(lián)合作用可以升高女性腦卒中的發(fā)病風險(趨勢性檢驗P=0.0037),隨著攜帶風險等位基因個數(shù)的增加，腦卒中的發(fā)病風險呈現(xiàn)升高趨勢，尤其是梗塞型腦卒中的發(fā)病風險。3.2COC暴露和基因多態(tài)性的聯(lián)合作用與腦卒中發(fā)病風險的關(guān)聯(lián)與攜帶rs5186AA基因型且不使用COC勺個體相比,攜帶rs5186AA基因型且使用COC勺女性發(fā)生出血型腦卒中的風險增加0.71倍(OR=1.71,95%C:1.18-2.48),而使用COC同時攜帶rs5186AC/CC基因型的女性發(fā)生出血型腦卒中的風險增加1.81倍(OR=2.81,95%CI:1.45-5.64)o結(jié)論COC暴露、高血壓、高脂血癥是中國女性腦卒中的重要危險因素；miR-15