液態(tài)食品中脫氫乙酸含量的高效液相色譜測定方法的研究

1、液態(tài)食品中脫氫乙酸含量的高效液相色譜測定方法的研究    【關(guān)鍵詞】  液態(tài)食品 脫氫乙酸含量 高效液相色譜測定方法脫氫乙酸(DHA，Dehydroacetic)，別名 二乙?；阴Ｒ宜?，固態(tài)呈白色或淡黃色結(jié)晶粉末，無嗅、無味、熔點(diǎn)108110，沸點(diǎn)270，是一種低毒高效防腐、防霉劑。在酸、堿條件下均有一定的抗菌作用，尤其對霉菌的抑制作用最強(qiáng)。我國自20世紀(jì)70年代中期開始用于食品防腐劑至今，曾用于果汁、醬菜、腐乳、人造奶油、乳酸菌飲料、果醬等食品的防腐劑1。雖然它的抗菌作用是有效的，但是它的毒性較大的缺點(diǎn)卻限制了脫氫乙酸的廣泛應(yīng)用。脫氫乙酸能

2、迅速被人體所吸收，進(jìn)人人體后即分散于血漿和許多器官中，有抑制體內(nèi)多種氧化酶的作用。目前，脫氫乙酸的安全性受到質(zhì)疑，國際上已明確禁止使用，我國在一定范圍內(nèi)允許其使用，但最大允許使用量為0.3g/kg2。目前檢測脫氫乙酸的國標(biāo)方法為氣相色譜法3，前期樣品處理過程涉及到有機(jī)溶劑萃取、濃縮等步驟，操作起來比較麻煩，而且脫氫乙酸還容易造成色譜峰出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，使得難以獲得準(zhǔn)確的定性和定量的結(jié)果4。應(yīng)用高效液相色譜測定食品中脫氫乙酸的方法已見報道，比如采用超聲萃取、氫氧化鈉溶液浸泡等方法萃取月餅中的脫氫乙酸后再注射到色譜柱進(jìn)行分離測定5。這些研究為應(yīng)用高效液相色譜法測定果汁、罐頭、瓶裝腐乳等液態(tài)食品中的脫氫

3、乙酸做了探索性的工作。本研究在國標(biāo)GB/T 5009.1212003的基礎(chǔ)上，通過對目前市場上廣泛銷售的多種液態(tài)食品中的脫氫乙酸以高效液相色譜的方法進(jìn)行分析，取得了比較滿意的結(jié)果，克服了氣相色譜法前處理復(fù)雜以及污染性大的缺點(diǎn)。1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)樣品、主要儀器與試劑參加測定的樣品主要包括目前市場上銷售的果汁、腐乳、罐頭以及酸奶。HP1100型高效液相色譜儀、紫外分光光度計(上海光譜儀器公司);快速混勻器。甲醇(HPLC級，DIKMA公司);甲醇(分析純，國藥);碳酸氫鈉(優(yōu)級純，國藥);脫氫乙酸(國家標(biāo)物中心);脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品100 mg，用甲醇定溶至100mL

4、。再用甲醇稀釋成1、5、10、15、20、30 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，經(jīng)0.45m濾膜過濾。測定用水為二次蒸餾水。1.2 樣品處理果汁和酸奶混勻后直接稱取，腐乳和罐頭樣品需要先將固體物粉碎后再混勻。預(yù)先混勻的樣品稱取大約5.0g，加入到25.0ml容量瓶中，再加入10ml 2%的碳酸氫鈉溶液，用雙蒸水稀釋至刻度，搖勻。靜置10min后將上清液過0.45m濾膜，以10l進(jìn)樣器加入到液相色譜儀測定。1.3 色譜條件色譜柱C18(5um,250×4.60mm);柱溫25;流動相選用甲醇0.02mol/L乙酸銨(5:95);流速1.0mL/min;進(jìn)樣量10ul;檢測波長310nm;按照這

5、種條件進(jìn)行分析，以保留時間定性，以峰面積定量，測定樣品中脫氫乙酸的濃度。1.4 結(jié)果計算待測樣品中脫氫乙酸的含量(g/kg)=C×V×10-3/m式中，C:樣品中脫氫乙酸的濃度(mg/L);V: 樣品體積(mL);m:樣品質(zhì)量(g)2 結(jié)果與討論2.1 檢測波長的確定用紫外分光光度計對脫氫乙酸進(jìn)行全波長掃描檢測到兩個吸收峰，在310nm處有最大吸收，在230nm處有次強(qiáng)吸收。在310nm處的干擾比在230nm處要小，背景吸收少，因此選擇310nm作為檢測波長。標(biāo)準(zhǔn)品及待檢樣品中的脫氫乙酸的檢出峰色譜圖見圖1，脫氫乙酸的保留時間在8.5min左右。2.2 流動相的選擇液相色譜

6、柱C18分析中常用的流動相有甲醇磷酸鹽緩沖溶液系統(tǒng)、甲醇硫酸溶液系統(tǒng)以及甲醇乙酸鹽溶液系統(tǒng)。參考以前的研究結(jié)果，從流動相的本底吸收、靈敏度的影響和色譜柱的壽命等方面來考慮，本研究選擇了甲醇-0.02mol/L乙酸銨(5:95)。在流動相中加入甲醇，可以提高出峰的對稱性，隨著甲醇量的增加，出峰時間明顯加快，為了避開樣品中其它成分的干擾，將甲醇的比例調(diào)整到5%時，脫氫乙酸的出峰時間較為理想，且不受雜質(zhì)的干擾。 2.3 測量精密度和回收率取同一罐頭樣品10份，每5份添加同一個濃度的脫氫乙酸標(biāo)樣，分別進(jìn)行HPLC分析。從表1的結(jié)果可以看出這種方法有較好的重復(fù)性和較高的回收率，可以用來進(jìn)行定量分析。2.

7、4 線性實(shí)驗(yàn)和靈敏度分析取同一果汁樣品10份，每份約5.0g，置于25mL容量瓶中，分別加入脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)液(5mg/L)1ml、2ml、3ml、4ml和5ml，樣品按照標(biāo)準(zhǔn)步驟處理后取10uL進(jìn)入色譜柱測定，以出峰面積對脫氫乙酸濃度進(jìn)行回歸分析，結(jié)果表明脫氫乙酸濃度與色譜峰面積有良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)為0.9993。以信噪比(S/N)為3測得各成分的最低檢出限為0.25mg/kg。2.5 樣品的測定取目前國內(nèi)銷售的液態(tài)食品4種，每種選取3種不同的品牌按照前面介紹的方法進(jìn)行HPLC分析，結(jié)果見表2。可以看出，一般酸奶中并沒有添加脫氫乙酸，因?yàn)樗崮痰谋Ｙ|(zhì)期通常只有半個月到1個月。果汁中也基本

8、不含脫氫乙酸，而在選取的腐乳和罐頭中則添加了少量的脫氫乙酸，但是都遠(yuǎn)低于最大添加量?？傊?，該法簡便快速，可以在相應(yīng)類型的食品檢驗(yàn)中推廣使用。表2 常見的4種液態(tài)食品中脫氫乙酸的含量測定結(jié)果【參考文獻(xiàn)】  1 駱萌. 脫氫乙酸及相關(guān)化合物生產(chǎn)技術(shù). 化工中間體，2004，1(7)：3133.2 明立艷，張忠義. 高效液相色譜法測定食品中脫氫乙酸含量.食品研究與開發(fā)，2009，3(30):106108.3 衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所. GB/T 1494194 食品中脫氫乙酸的含量測定. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，1994.4 張輝珍，馬愛國，梁惠，等. 高效液相色譜法測定食品中脫氫乙酸的方法研究. 衛(wèi)生研究，2007