免疫重建荷人卵巢癌-SCID鼠模型的建立

1、免疫重建荷人卵巢癌-SCID鼠模型的建立                  作者：趙衛(wèi)東張愛(ài)君凌斌王群華陳崢崢姚鳳球周穎申震【摘要】  目的 探討建立具有人免疫學(xué)特征的卵巢癌-SCID鼠模型的可行性。方法 將16只雌性SCID小鼠隨機(jī)分為4組。A組：磷酸鹽緩沖液( PBS)0.5ml；B組為荷HO-8910組：HO-8910 細(xì)胞1×106個(gè)/ 只；C組為人免疫重建組：PBL細(xì)胞4×107個(gè)/只，

2、進(jìn)行免疫重建；D組為荷HO-8910免疫重建組：PBL細(xì)胞4×107 個(gè)/只，24h后腹腔注射HO-8910 細(xì)胞1×106個(gè)/只，觀察各組小鼠的生物學(xué)及免疫學(xué)特性。結(jié)果免疫重建鼠的骨髓、肝臟、脾臟、胸腺、淋巴結(jié)、外周血、腹腔液中檢測(cè)到人源性細(xì)胞；荷HO-8910細(xì)胞免疫重建組小鼠移植瘤體積小于荷HO-8910組小鼠；各組均無(wú)移植物抗宿主病(GVHD)發(fā)生。結(jié)論初步建立免疫重建荷人卵巢癌-SCID鼠模型，為卵巢癌治療的臨床前研究提供了理想動(dòng)物模型。 【關(guān)鍵詞】  卵巢腫瘤SCID小鼠疾病模型動(dòng)物    Establishment of

3、 Hu-PBL-SCID Mice Model of Ovarian Carcinoma       Abstract: Purpose To investigate the feasibility of establish a human ovarian carcinoma model in human lymphocyte-engrafted to severe combined immunodeficient (hu-PBL-SCID) mice. Methods Sixteen SCID mice were randomly

4、divided into 4 groups: group A with intraperitoneally phosphate buffered saline(0.5ml each mouse), group B with human ovarian carcinoma cells HO-8910(1×106 each mouse), group C with human peripheral blood lymphocyte(PBL) (4×107 each mouse) for immune reconstruction, and group D with PBL(4&

5、#215;107 each mouse) and HO-8910 (1×106 each mouse) cells. The biological and immunological features of each groups were evaluated. Results Human immunological cells were detected in bone marrow, liver, spleen, thymus, lymphoid node, peripheral blood and peritoneal fluid of hu-PBL-SCID mice. Th

6、e volume of tumor were less in the reconstruction of human immunsystem group. No graft-versus-host disease(GVHD) was found in all groups. Conclusion A human ovarian carcinoma model has been established in hu-PBL-SCID mice which is an ideal animal model for preclinical research and treatment for ovar

7、ian carcinoma.    Key words: ovarian neoplasms; mice, SCID; disease model, animal    卵巢惡性腫瘤發(fā)病率占婦科惡性腫瘤第3位，而其死亡率卻位居首位，對(duì)卵巢癌的研究已成為婦科惡性腫瘤主要的研究方向。本研究通過(guò)建立免疫重建荷人卵巢癌嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷(SCID) 鼠模型，觀察其生物學(xué)、免疫學(xué)特性，為進(jìn)一步研究卵巢癌的生物學(xué)行為，尋找新的、更有效的免疫治療方法提供一種更能模擬人體免疫環(huán)境下的荷瘤動(dòng)物模型。    1 材料與方法&#

8、160;   1.1 材 料    SCID鼠： 購(gòu)自中山醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，雌性，45周齡，體重20g25g，共16只。在本實(shí)驗(yàn)室屏障系統(tǒng)內(nèi)飼養(yǎng)，一切進(jìn)入屏障系統(tǒng)的人、動(dòng)物、飼料、水、空氣、鋪墊物及各種用品均須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的微生物控制。    腫瘤細(xì)胞系： 人卵巢癌細(xì)胞系HO-8910購(gòu)自中科院上海細(xì)胞所。    人外周血淋巴細(xì)胞(PBL)：來(lái)源于健康女性志愿者的外周靜脈血，由我院血庫(kù)提供。    試劑及儀器： RPMI-1640培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)GIBCO公

9、司，淋巴細(xì)胞分離液購(gòu)自上海華精生物有限公司，鼠抗人單克隆抗體CD3-CY、CD19-FITC、HLA-ABC-PE購(gòu)自BD PharMingen 公司，流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)Becton Dickinson公司。    1.2 方 法    HO-8910細(xì)胞培養(yǎng)于RPMI-1640完全培養(yǎng)基（10熱滅活新生牛血清），置于37、5CO2孵箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)換液傳代。HO-8910細(xì)胞是貼壁細(xì)胞，傳代及試驗(yàn)前需用0.25胰蛋白酶溶液消化。    用淋巴細(xì)胞分離液按常規(guī)方法分離后，PBS 液懸浮細(xì)胞并計(jì)數(shù)

10、，調(diào)整細(xì)胞濃度為8×107/ml。    A組即空白組：磷酸鹽緩沖液( PBS)0.5ml；B組即荷HO-8910 組：HO-8910 細(xì)胞1×106個(gè)/只；C組即免疫重建組：PBL 細(xì)胞4×107個(gè)/只，進(jìn)行免疫重建；D組即荷HO-8910細(xì)胞免疫重建組：PBL 細(xì)胞4×107 個(gè)/只，24h 后注射HO-8910 細(xì)胞1×106個(gè)/只。所有動(dòng)物在移植前采用6MV X線直線加速器一次性全身照射，劑量率為150cGy/min，總劑量為300cGy。所有的細(xì)胞均懸浮在PBS0.5ml 中，HO-8910細(xì)胞皮下注射于

11、NOD/SCID鼠左側(cè)腋下，PBL 細(xì)胞經(jīng)腹腔注射。    (1)生物學(xué)特性：荷瘤鼠生長(zhǎng)情況觀察：荷瘤后觀察各組鼠行為、營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)等改變,若28d后仍生存，摘眼球取血處死。大體檢查：處死SCID鼠后進(jìn)行解剖，肉眼觀察移植瘤生長(zhǎng)表面形態(tài)、直徑、質(zhì)地、活動(dòng)度情況。組織學(xué)觀察：移植腫瘤及各臟器石蠟包埋、切片、HE染色，在光學(xué)顯微鏡下行組織學(xué)檢查。    (2)免疫學(xué)特性：小鼠頸椎脫臼處死，取小鼠肝、脾、胸腺、淋巴結(jié)、外周血、腹腔液細(xì)胞懸液測(cè)定人CD3、CD19、HLA-ABC陽(yáng)性細(xì)胞比例。移植物抗宿主疾病(GVHD)情況：主要臟器如肝臟、脾臟、結(jié)腸等組織HE染色，GVHD診斷標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)1。&#