LCMSMS法測定魚肉中氯霉素的殘留

1、LC-MS/MS法測定魚肉中氯霉素的殘留朱葉青 張曉東 王瑞生（內(nèi)蒙古自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所 呼和浩特 010020）摘要：目的：建立動物源性食品氯霉素的殘留分析方法。方法：采用乙酸乙酯提取魚肉中氯霉素的殘留，以甲醇-水（70：30）為流動相，流速0.2ml，進(jìn)樣量20l，經(jīng)高效液相色譜分離，以多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）測定。結(jié)果：本方法在0.5 -10ng/ml內(nèi)線性良好（r = 0.9996).）；檢出限0.04g/kg；方法回收率為76.93%，RSD為2.90%。結(jié)論：本方法穩(wěn)定、可靠、準(zhǔn)確，可用于動物源性食品中氯霉素的殘留分析方法。關(guān)鍵詞：液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 魚肉 氯霉素 食品安全Vesti

2、gital of chloramphenicol residues in fish by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry zhu yeqing zhang xiaodong（Inner Mongolian Institute for the Control of Drug and Food， Hohhot，010020）Abstract：Aim：To establish a method for determination the chloramphenicol residues in fish .Methods：Ethyl ace

3、tate was used for extract chloramphenicol residues in fish. With mobile phase consisting of methanol-water（70：30）and eluted at flow rate of 0.2ml.min-1 at 25 .inject volume 20ul To Separate by HPLC, to analysis with MRM.Results The line ranges for chloramphenicol residues were within 0.510g/L .the l

4、imit of detection was 0.04g/kg.the average recorvery was 76.93%（RSD2.90%）.Conclusion：This method could be used for the determineation of the chloramphenicol residues in beef，and stable、reliable and accurate.Keywords Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry， fish，chloramphenicol residues，the sa

5、fe of foods氯霉素對革蘭陽性、陰性細(xì)菌均有抑制作用，且對后者的作用較強(qiáng)。其中對傷寒桿菌、流感桿菌、副流感桿菌和百日咳桿菌的作用比其他抗生素強(qiáng)，對立克次體感染如斑疹傷寒也有效，但對革蘭陽性球菌的作用不及青霉素和四環(huán)素。氯霉素的主要不良反應(yīng)是抑制骨髓造血機(jī)能。二是不可逆的再生障礙性貧血，雖然少見，但死亡率高。氯霉素也可產(chǎn)生胃腸道反應(yīng)和二重感染。新生兒與早產(chǎn)兒劑量過大可發(fā)生循環(huán)衰竭（灰嬰綜合征）。 2001年初，因?yàn)橛邢M(fèi)者在食用當(dāng)?shù)亍凹覙犯?”超市出售的凍蝦仁引起過敏反應(yīng)，奧地利“綠色和平”組織緊急對本國商場內(nèi)所有的水產(chǎn)品進(jìn)行檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)德國雷斯蒂克(RISTIC)公司生產(chǎn)的

6、部分蝦仁產(chǎn)品含有違禁物質(zhì)氯霉素。德國雷斯蒂克(RISTIC)公司決策層立即撤下公司所有在市場上出售的所有凍蝦仁產(chǎn)品，連夜查驗(yàn)所有來自中國、印度和越南的進(jìn)口庫存原料。檢測結(jié)果表明：中國出口的凍蝦仁中含有0 .2-5ppb的氯霉素。2001年以來，中國出口水產(chǎn)品頻頻被進(jìn)口國檢出氯霉素殘留。歐盟于2002年做出禁止中國動物源性食品進(jìn)口的決議，這就意味著我國將在歐盟市場丟掉13萬噸的市場份額和造成6億多美元的經(jīng)濟(jì)損失，使中國水產(chǎn)品對歐盟出口嚴(yán)重受挫。藥物殘留已成為擴(kuò)大水產(chǎn)品國際貿(mào)易的主要障礙。2002年8月，中國農(nóng)業(yè)部、國家質(zhì)檢總局日前聯(lián)合開展水產(chǎn)品藥物殘留專項(xiàng)整治活動，力求從源頭控制水產(chǎn)品中氯霉素及

7、其他禁用藥物的使用，進(jìn)行從生產(chǎn)到市場全程質(zhì)量監(jiān)控。1、實(shí)驗(yàn)部分1.1實(shí)驗(yàn)儀器與材料API3200LC-MS/MS串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國AB公司），配LC-20A型高效液相色譜儀（日本島津公司）和電噴霧離子源。SIGMA 2-16K型冷凍離心機(jī)（Sartorius公司），IKA T18 basic ULTRA-TURRAX型均質(zhì)機(jī)，VS-100 VORTEX SHAKER 型振蕩器，TTL-DL型氮吹儀，24-Port SPE Vacuum Manifold System固相萃取裝置，氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所），乙酸乙酯（色譜純），甲醇（色譜純），1.2 分析條件液相色譜條件：色譜柱：ZO

8、RBAX C18 5m 3×150mm；流動相：甲醇-水（70：30）；流速：0.2ml；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20l質(zhì)譜條件：離子源：ECI，掃描方式：負(fù)離子掃描：Curtain Gas：30psi;Collision Gas：4psi;Ion Source Gas1:35 psi; Ion Source Gas2:45 psi；離子源溫度350：監(jiān)測離子及碰撞能量：320.6/152.0（-10eV）；320.6/256.9（-10eV）；320.6/194.2（-10eV）1.3氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲備液的制備：取氯霉素約10mg，置100ml量瓶中，用甲醇超聲溶解并稀釋成濃度為100g/

9、mL。-20保存，有效期1年。再逐級用流動相稀釋至所需濃度。1.4樣品的制備：取10000r/min勻漿1min試料5.00g，置50mL離心管中，加乙腈5mL，4氯化鈉溶液5mL，渦旋振蕩2min，4000r/min離心10min，取上清液至另一50mL離心管中，重復(fù)提取1次，合并提取液。提取液中加正己烷5mL，渦旋振蕩1min，2000r/min離心10min，棄去上層液，重復(fù)1次。加水飽和乙酸乙酯溶液5mL，渦旋振蕩1min，2000r/min離心10min，將上層液轉(zhuǎn)移到15mL離心管中，重復(fù)提取1次，合并提取液氮?dú)獯蹈?，用流動?mL溶解，備用。2結(jié)果與討論：2.1 LC-MS/MS

10、條件的選擇選擇不同的液相色譜柱及色譜質(zhì)譜條件，最后確定出1.2的LC-MS/MS質(zhì)譜條件檢測氯霉素。氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品的多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）及質(zhì)譜圖見圖1、圖2。應(yīng)用1.2中的色譜-質(zhì)譜條件進(jìn)行分析。通過保留時(shí)間以及各離子之間的豐度比值可以定性確定氯霉素是否存在。2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限氯霉素在0.5 -10ng/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，取0.5g/L、1.0g/L、2.0g/L、5.0g/L、10ng/ml的溶液，用1.2的LC-MS/MS條件進(jìn)行測定，得到子離子320.6/152.2的峰面積和濃度。以濃度（X，ng/ml）對二級子離子321.1/277.2峰面積（Y）進(jìn)行線性分析，線性方程為Y=1

11、.21e+0.04x+454(r=0.9996)。方法的最低檢出限為0.04g/kg（S/N>3）。2.3方法的準(zhǔn)確度與精密度取經(jīng)測定不含有氯霉素的樣品5.00g9份，分別加入25ng/mL、50ng/ml、75ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)工作液100l，按1.4方法操作，測得9份的回收率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1.表1 魚肉中氯霉素的添加回收率序號加入量測得量回收率（）平均回收率（）RSD（）12.5081.81272.25 22.5081.98178.99 32.5081.93277.03 45.0163.84576.65 55.0163.98179.37 76.932.9065.0163.76275.00 77.5245.78976.94 87.5245.81977.34 97.5245.93278.84 2.4實(shí)際樣品的測定應(yīng)用本方法測定了六個(gè)地區(qū)的魚肉共180批，共有15批檢出氯霉素，最大檢出量為5.91g