槐定堿有關(guān)物質(zhì)的薄層色譜法研究

1、槐定堿有關(guān)物質(zhì)的薄層色譜法研究                                作者：張愛華， 陳新菊， 吳聯(lián)奎【摘要】  目的建立薄層色譜法檢查槐定堿中有關(guān)物質(zhì)的方法。方法采用堿性硅膠G薄層板，苯-丙酮-甲醇（830.5）（氨蒸氣飽和）為展開劑，依次噴稀碘化鉍鉀試

2、液和30%的硫酸乙醇溶液顯色。結(jié)果主成分與其他生物堿、降解產(chǎn)物的斑點(diǎn)能得到較好的分離。結(jié)論該法可用于槐定堿提取工藝、原料和制劑的質(zhì)量監(jiān)控。 【關(guān)鍵詞】  槐定堿 有關(guān)物質(zhì) 薄層色譜法Abstract：ObjectiveTo establish the method of Thin-Layer Chromatography for sophoridine and its impurities. MethodsLamella of basic silica gel G was adopted. The spread solvent was made of Benzene-Acetone-

3、Methanol (830.5) (They are saturated by ammonia steam). Color display was made by spraying sparse Potassium Bismuth Iodide and followed by spraying  30% sulfuric acid ethanol. ResultsSophordine and its impurities (such as unrelated alkaloid, degradation product) could be separated .Conclusion T

4、he method can be used for the quality control of material , preparation and sophoridine extraction process.Key words：Sophoridine；  Impurity；  Thin-Layer Chromatography槐定堿（sophoridine）是一種具有新型結(jié)構(gòu)的抗腫瘤新藥，是從豆科槐屬植物苦豆子Sophora alopecuroides L.的成熟種子中提取的生物堿。在對(duì)新藥槐定堿定性定量分析的系統(tǒng)性研究中，曾采用薄層色譜法檢查槐定堿中的有關(guān)物質(zhì)，取得

5、了滿意的結(jié)果。有報(bào)道1從苦豆子中分得生物堿成分有20種之多，其中主要生物堿是槐定堿、槐果堿、苦參堿等，它們大都含有相似的基本骨架，屬于喹喏里西啶（Quiolizidine）類生物堿，也常被稱為苦參堿類生物堿，對(duì)這類生物堿的薄層色譜分析，國內(nèi)曾有一些報(bào)道2，3，筆者在有關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，除比較了不同的吸附劑、展開劑外，主要在顯色劑的應(yīng)用上有一點(diǎn)改進(jìn)，即增加了通用顯色劑30%硫酸乙醇溶液的使用，使槐定堿的薄層色譜中其它雜質(zhì)均能顯現(xiàn)，提高了方法的靈敏度。本法不僅可作為槐定堿提取工藝、原料和制劑的質(zhì)量監(jiān)控手段，也可為其他生物堿的薄層色譜分析提供參考。1  藥品與試劑硅膠G（青島海洋化工廠）；其

6、余試劑為分析純。    苦參堿對(duì)照品(0805-9703)、氧化苦參堿對(duì)照品(0780-9703)由藥品生物制品檢定所提供；槐定堿、槐果堿純品由江西中醫(yī)學(xué)院吳運(yùn)光教授提供?；倍▔A原料由江西中醫(yī)學(xué)院提供。2  方法與結(jié)果2.1  供試品溶液的制備分別取槐定堿、苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿純品各適量，用三氯甲烷制成2 mg·ml-1的溶液；量取上述各溶液1 ml，混勻即得混合溶液；另取槐定堿適量，置105加熱破壞3 h，用三氯甲烷制成2 mg·ml-1的溶液。2.2  薄層色譜條件堿性硅膠G（取硅膠G 2 g，加0.4%

7、的氫氧化鈉6 ml制成）薄層板，厚度0.20.3 mm；展開劑：苯-丙酮-甲醇（830.5）（氨蒸氣飽和）上行展開15 cm；顯色劑：依次噴稀碘化鉍鉀試液和30%的硫酸乙醇溶液。1         2.3  薄層分離實(shí)驗(yàn)取上述供試品溶液各10 l，按上述薄層色譜條件試驗(yàn)，結(jié)果顯示，主成分與其他生物堿、降解產(chǎn)物的斑點(diǎn)能得到較好的分離。見圖1。2.4  最低檢測(cè)量實(shí)驗(yàn)在上述薄層色譜條件下測(cè)得槐定堿、苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿的最小檢出量分別為0.2，0.5，0.2，0.5g。2.5  有關(guān)

8、物質(zhì)的限量檢查方法取本品，加三氯甲烷制成每毫升中含10 mg的溶液，作為供試品溶液，精密量取適量，加三氯甲烷制成每毫升中含0.2 mg的溶液，作為對(duì)照溶液。吸取上述兩種溶液各10l，分別點(diǎn)于同一堿性硅膠G薄層板上，用苯-丙酮-甲醇（830.5）為展開劑，置氨蒸氣飽和的環(huán)境中展開，展開后，晾干，依次噴稀碘化鉍鉀試液和30%的硫酸乙醇溶液，使顯色，供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于兩個(gè)，其顏色與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。2.6  樣品有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果檢查了10批槐定堿原料，結(jié)果均檢出一個(gè)雜質(zhì)斑點(diǎn)，顏色均淺于對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)（即2%）。3  討論3.1 對(duì)薄層色譜條件的選擇比

9、較了不同的薄層板：硅膠G、堿性硅膠G、中性氧化鋁、堿性氧化鋁板；不同的展開劑：苯-丙酮-甲醇（830.5）（氨蒸氣飽和）、苯-丙酮-醋酸乙酯-甲醇（氨蒸氣飽和）、三氯甲烷-甲醇（氨蒸氣飽和）、三氯甲烷-甲醇-氨水、石油醚-苯-丙酮-甲醇、三氯甲烷-無水乙醇（氨蒸氣飽和）等，結(jié)果分離效果以堿性硅膠G板、苯-丙酮-甲醇（830.5）（氨蒸氣飽和）為最佳。3.2   對(duì)顯色劑進(jìn)行了比較在最佳薄層色譜條件下，分別噴碘化鉍鉀試液、稀碘化鉍鉀試液和改良碘化鉍鉀試液，結(jié)果碘化鉍鉀試液噴后整塊板顏色深，微量雜質(zhì)不易觀察；改良碘化鉍鉀試液顯色后，常褪色太快，不夠穩(wěn)定；稀碘化鉍鉀試液顯色效果較好，背景顏色淺，斑點(diǎn)清晰。但是無任用上述哪種顯色劑，顯色后的斑點(diǎn)均易消褪，尤其是微量雜質(zhì)斑點(diǎn)不易顯現(xiàn)或顯色后瞬間消失，不利于觀察比較，雖加大點(diǎn)樣量，仍不能避免這種情況，致使雜質(zhì)斑點(diǎn)不易檢出。經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn)，采用了在稀碘化鉍鉀試液顯色后繼續(xù)噴以30%的硫酸乙醇溶液，結(jié)果斑點(diǎn)顯色靈敏度增加，微量的雜質(zhì)斑點(diǎn)也能清晰可辨，而且穩(wěn)定時(shí)間較長(zhǎng)。本法與高效液相色譜法4比較，后法雖然靈敏度更高，但本法設(shè)備簡(jiǎn)單，價(jià)廉，用自身對(duì)照法可以滿足本品有關(guān)物質(zhì)檢查要求?！尽?#160; 1王秀坤，李家實(shí)，魏璐雪，等. 槐屬植物化學(xué)成分研究概況J.國外醫(yī)學(xué)·中醫(yī)中藥分冊(cè)，1996，1