反相色譜法中流動(dòng)相和溶劑選擇的一些經(jīng)驗(yàn)

1、精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計(jì)劃類文檔，歡迎閱讀下載反相色譜法中流動(dòng)相和溶劑選擇的一些經(jīng)驗(yàn)反相色譜法中流動(dòng)相和溶 劑選擇的一些經(jīng)驗(yàn)色譜分析中積累了一些經(jīng)驗(yàn)，分享給大家。 1 1反相色譜法分析，乙腈和甲醇哪個(gè)更 好？甲醇和乙腈是反相色譜法中最常用的有機(jī)溶劑，二者的極性和溶劑 強(qiáng)度相差不大，但它們還是有一些差異， 在此詳細(xì)闡述一下。（1 1）UVUV 檢測(cè)器上的響應(yīng)值：在紫外區(qū)尤其是遠(yuǎn)紫 外區(qū)（靠近 200200 nmnm）,乙腈的吸收遠(yuǎn)低于 甲醇，這一區(qū)別產(chǎn)生的影響在等度條件 下也許還不明顯，但若使用梯度，乙腈 所引起的基線漂移則遠(yuǎn)小于甲醇，這樣 使用乙腈做流動(dòng)相，得到的色譜圖不僅 美

2、觀，樣品的檢出限也低得多，所以該 指標(biāo)乙腈占優(yōu)；洗脫強(qiáng)度：乙腈的洗脫能力稍強(qiáng)于甲醇。如果查閱溶 劑參數(shù)表，能夠發(fā)現(xiàn)乙腈的極性指數(shù)精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計(jì)劃類文檔，歡迎閱讀下載（）- 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計(jì)劃類文檔，感謝閱讀下載-1 稍高于甲醇 （） ， 受此表啟發(fā)， 我曾固執(zhí)地 認(rèn)為在反相色譜法中甲醇與水混合所調(diào) 出的溶液的洗脫范圍要寬于乙腈，然而 實(shí)踐證明與水混合時(shí)，乙腈的洗脫能力 更強(qiáng)，隨著有機(jī)相比例的升高，這種區(qū) 別逐漸減小，如果是純?nèi)軇┒呲呌谝?致，也就是說(shuō)，混合水以后乙腈的洗脫 能力還是強(qiáng)于甲醇的；但洗脫能力不能 用作評(píng)價(jià)溶劑好壞的標(biāo)準(zhǔn)，不過(guò)對(duì)于某

3、 一項(xiàng)分析，如果用甲醇替代乙腈，相應(yīng)的有機(jī)相比例應(yīng)調(diào)高一些。（3 3）選擇性：二者的選擇性各具特點(diǎn)。色譜 分析中的選擇性往往無(wú)法給出普遍適用 的參數(shù)，這就需要實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)支持。我喜 歡進(jìn)行多組分分析，在某些情況下，使 用乙腈- -水洗脫分離情況優(yōu)于甲醇- -水，比 如 PAEsPAEs PAHsPAHs、酚類化合物等等，選擇 乙腈得到了較優(yōu)的分離效果，而甲醇則 不行；其他一些應(yīng)用中，甲醇的選擇性 也會(huì)優(yōu)于乙腈，比如羰基類化合物精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計(jì)劃類文檔，歡迎閱讀下載-DNPH-DNPH 分析和氟喹諾酮類藥物（沙星類 藥物），其他同行使用了乙腈，化合物并-精選公文范文，管理類，

4、工作總結(jié)類，工作計(jì)劃類文檔，感謝閱讀下載-2精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計(jì)劃類文檔，歡迎閱讀下載精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計(jì)劃類文檔，感謝閱讀下載 4 未完全分離，我進(jìn)行分析時(shí)改用了甲醇， 所有化合物全部分開了。這是于有機(jī)溶 劑分子的化學(xué)性質(zhì)不同所致。本人的觀 點(diǎn)，如果是多組分分析方法開發(fā)時(shí)，最 好用兩種溶劑進(jìn)行對(duì)比，以便得出最優(yōu) 條件。（4 4）色譜柱背壓：柱內(nèi)承受的壓力，根據(jù)有機(jī)溶劑的種類或混 合比例的不同而異. .2525C 時(shí)，甲醇/水 水乙腈冰 甲醇乙腈；4040C 時(shí)，甲醇/ /水水 乙腈/ /水甲醇乙腈； 總體而言，使用乙腈時(shí)，色譜柱的背壓 低于甲醇，原因是

5、乙腈的黏度低于甲醇 （2525 C 時(shí)，乙腈，甲醇）。該指標(biāo)，乙腈 占優(yōu)。綜上所述，反相色譜法中乙腈的效果優(yōu)于甲醇。2 2離子抑制色譜法該選何種試劑？離子抑制就是向流動(dòng)相中加入酸或堿，使弱酸 或弱堿以單純的未解離形式存在，既能 增大其在反相柱上的保留又能得到更完 美的峰形。該方法主要用于弱酸分析（堿 性化合物通常不采用離子抑制法）。常用 的酸性添加物為磷酸、醋酸、甲酸等。精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計(jì)劃類文檔，歡迎閱讀下載精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計(jì)劃類文檔，感謝閱讀下載 5 對(duì)比三者的吸光值，磷酸是最小的，乙 酸和甲酸相差不大，這一事實(shí)會(huì)導(dǎo)致一 個(gè)問(wèn)題一一在低波長(zhǎng)下，添

6、加乙酸和甲 酸會(huì)引起更高的噪聲，這就影響了分析 的靈敏度，另外于磷酸酸性強(qiáng)，達(dá)到同 一 pHpH 值用量更少，所以使用磷酸時(shí)噪聲 會(huì)更低。而在使用緩沖溶液和甲醇或乙 腈進(jìn)行梯度分析時(shí)，乙酸或甲酸的存在 可能會(huì)對(duì)乙腈、甲醇的基線漂移起到一 定的抵消作用，當(dāng)然這只是猜測(cè)，還有待驗(yàn)證。3.3.上樣前樣品溶劑的選擇。最好的溶劑是流動(dòng)相。上面這句話可能很多人都知道，但至于為什 么要這樣可能不清楚。原因：(1(1) )流動(dòng)相作溶劑不會(huì)岀現(xiàn)溶劑峰。在藥物 QCQC、化學(xué)品 QCQC 中，主成分和雜質(zhì)定量 是通過(guò)歸一化法進(jìn)行的，溶劑峰的出現(xiàn) 會(huì)使主成分測(cè)定值偏離實(shí)際值，所以溶 劑峰是必須要消除的，唯一的辦法就

7、是 以與流動(dòng)相組成嚴(yán)格一致的溶劑溶解樣 品。 如果這樣做還是會(huì)出峰，那可能就 是不被保留的化合物了；(2)(2)反精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計(jì)劃類文檔，歡迎閱讀下載精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計(jì)劃類文檔，感謝閱讀下載 6 相分析中，如果采用洗脫強(qiáng)度明顯高于 流動(dòng)相的溶劑或溶液進(jìn)行溶解，往往會(huì) 導(dǎo)致柱效下降、峰前沿、峰前分叉峰， 這種影響對(duì)洗脫較快的化合物影響更 甚，并且進(jìn)樣量越大影響越嚴(yán)重。原因 在于強(qiáng)洗脫樣品溶劑的加入局部增大了 流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度，使單種組分的前部 分與后部分的保留性不一致，進(jìn)而導(dǎo)致 區(qū)域展寬。我舉兩個(gè)例子： 我分析氯霉素時(shí)，流動(dòng)相為甲醇：水=40=40： 6060，氯霉素是用甲醇溶解的，結(jié)果塔板 數(shù)不足32000/m32000/m，后來(lái)改用流動(dòng)相溶解， 塔板數(shù)升到了 90000/m90000/m ;還有一次，我分離磺胺類藥物，用的梯度（起點(diǎn)乙腈: 果第一個(gè)峰分叉了，其余正常。要知道, 如果是色譜柱損壞，那么所有的峰形均應(yīng)分叉。后來(lái)改用流動(dòng)相溶解，一切問(wèn) 題迎刃而解。我的結(jié)論：溶劑的洗 脫強(qiáng)度等于流動(dòng)相，峰形和色譜圖會(huì)很 完美；若稍低于流動(dòng)相，