生物技術(shù)與分離提取

1、生物技術(shù)與分離提取常用的分離提取技術(shù)方法：常用的分離提取技術(shù)方法：1、破碎法分離提取技術(shù)、破碎法分離提取技術(shù)2、離心分離提取技術(shù)、離心分離提取技術(shù)3、超聲波萃取分離法、超聲波萃取分離法4、微波萃取分離法、微波萃取分離法5、氣浮分離法、氣浮分離法6、色譜法（包括紙色譜、薄層色譜法）、色譜法（包括紙色譜、薄層色譜法）7、超臨界流體萃取等新興方法。、超臨界流體萃取等新興方法。8、膜分離技術(shù)、膜分離技術(shù)一、常用的破碎法方法一、常用的破碎法方法離心分離方法采用不同的離心速度和離心時(shí)間，使沉降速度不同的顆粒分批分離的方法，稱為差速離心。操作時(shí)，采用均勻的懸浮液進(jìn)行離心，選擇好離心力和離心時(shí)間，使大顆粒先沉

2、降，取出上清液，在加大離心力的條件下再進(jìn)行離心，分離較小的顆粒。如此多次離心，使不同大小的顆粒分批分離。差速離心所得到的沉降物含有較多雜質(zhì)，需經(jīng)過(guò)重新懸浮和再離心若干次，才能獲得較純的分離產(chǎn)物。差速離心主要用于分離大小和密度差異較大的顆粒。操作簡(jiǎn)單方便，但分離效果較差。密度梯度離心是樣品在密度梯度介質(zhì)中進(jìn)行離心，使密度不同的組分得以分離的一種區(qū)帶分離方法。密度梯度系統(tǒng)是在溶劑中加入一定的梯度介質(zhì)制成的。梯度介質(zhì)應(yīng)有足夠大的溶解度，以形成所需的密度，不與分離組分反應(yīng)，而且不會(huì)引起分離組分的凝聚、變性或失活，常用的有蔗糖、甘油等。使用最多的是蔗糖密度梯度系統(tǒng)，其梯度范圍是：蔗糖濃度5%60%，密度

3、1.021.30g/cm3。離心分離方法 密度梯度的制備可采用梯度混合器，也可將不同濃度的蔗糖溶液，小心地一層層加入離心管中，越靠管底，濃度越高，形成階梯梯度。離心前，把樣品小心地鋪放在預(yù)先制備好的密度梯度溶液的表面。離心后，不同大小、不同形狀、有一定的沉降系數(shù)差異的顆粒在密度梯度溶液中形成若干條界面清晰的不連續(xù)區(qū)帶。各區(qū)帶內(nèi)的顆粒較均一，分離效果較好。 在密度梯度離心過(guò)程中，區(qū)帶的位置和寬度隨離心時(shí)間的不同而改變。隨離心時(shí)間的加長(zhǎng)，區(qū)帶會(huì)因顆粒擴(kuò)散而越來(lái)越寬。為此，適當(dāng)增大離心力而縮短離心時(shí)間，可減少區(qū)帶擴(kuò)寬。將CsCl2、CsSO4等介質(zhì)溶液與樣品溶液混合，然后在選定的離心力作用下，經(jīng)足夠

4、時(shí)間的離心，銫鹽在離心場(chǎng)中沉降形成密度梯度，樣品中不同浮力密度的顆粒在各自的等密度點(diǎn)位置上形成區(qū)帶。前述密度梯度離心法中，欲分離的顆粒未達(dá)到其等密度位置，故分離效果不如等密度離心法好。離心分離方法應(yīng)當(dāng)注意的是，銫鹽濃度過(guò)高和離心力過(guò)大時(shí)，銫鹽會(huì)沉淀管底，嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成事故，故等密度梯度離心需由專業(yè)人員經(jīng)嚴(yán)格計(jì)算確定銫鹽濃度和離心機(jī)轉(zhuǎn)速及離心時(shí)間。此外，銫鹽對(duì)鋁合金轉(zhuǎn)子有很強(qiáng)的腐蝕性，故最好使用鈦合金轉(zhuǎn)子，轉(zhuǎn)子使用后要仔細(xì)清洗并干燥。36004222rnmrmFn：轉(zhuǎn)子每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)，r/min三、超聲波萃取分離法三、超聲波萃取分離法超聲波萃取儀超聲波萃取儀 超聲波并不能使樣品內(nèi)的分子產(chǎn)生極化，超聲波

5、并不能使樣品內(nèi)的分子產(chǎn)生極化，而是在溶劑和樣品之間產(chǎn)生聲波空化作用，導(dǎo)而是在溶劑和樣品之間產(chǎn)生聲波空化作用，導(dǎo)致溶液內(nèi)氣泡的形成、增長(zhǎng)和爆破壓縮，從而致溶液內(nèi)氣泡的形成、增長(zhǎng)和爆破壓縮，從而使固體樣品分散，增大樣品與萃取溶劑之間的使固體樣品分散，增大樣品與萃取溶劑之間的接觸面積，提高目標(biāo)物從固相轉(zhuǎn)移到液相的傳接觸面積，提高目標(biāo)物從固相轉(zhuǎn)移到液相的傳質(zhì)速率。質(zhì)速率。微波萃取儀微波萃取儀在這一微觀過(guò)程中，微波能量轉(zhuǎn)化為樣品內(nèi)的能量，從而降低目標(biāo)物與樣品的結(jié)合力，另一方面微波所產(chǎn)生的電磁場(chǎng)加速被萃取組分由樣品內(nèi)部向萃取溶劑界面的擴(kuò)散速率?？s短萃取組分的分子由樣品內(nèi)部擴(kuò)散到萃取溶劑界面的時(shí)間，從而提高萃取速率。氣浮分離法氣浮分離法簡(jiǎn)單裝置簡(jiǎn)單裝置 展開(kāi)方式：上行法：展開(kāi)速度慢、容易達(dá)到平衡，分離效果好下行法：展開(kāi)速度快、適用于易分離的組分分離雙向法：使用兩種展開(kāi)劑、90度展開(kāi)、適用于難分離的混合物的分離比移值Rf)：Rfa/ba為斑點(diǎn)中心到原點(diǎn)的距離cmb為溶劑前沿到原點(diǎn)的距離cmRf值最大等于1，最小等于。Rf值是衡量各組分的分離情況的數(shù)值Rf值相差越大，分離效果越好使用Rf值定性比移值比移值層析缸層析缸層析槽層析槽1. 層析槽層析槽 2. 薄層板薄層板 3. 墊架墊架 4. 墊板