生藥鑒定的一般程序和方法

1、生藥鑒定的一般程序和方法生藥鑒定就是依據(jù)國(guó)家藥典,部頒和地方藥品標(biāo)準(zhǔn)以及有關(guān)資料規(guī)定或記載的生藥標(biāo)準(zhǔn),對(duì)商品生藥或檢品進(jìn)行真實(shí)性、純度、品質(zhì)優(yōu)良度的檢定。生藥真實(shí)性鑒定,包括原植(動(dòng)物鑒定、性狀鑒定、顯微鑒定、理化鑒定及生物檢定等項(xiàng)。生藥純度檢定是檢查樣品中有無(wú)雜質(zhì)及其數(shù)量是否超過(guò)規(guī)定的限度。雜質(zhì)包括生藥原植(動(dòng)物的非藥用部分、有機(jī)雜質(zhì)和無(wú)機(jī)雜質(zhì)。無(wú)機(jī)雜質(zhì)的檢查一般采用過(guò)篩及灰分、酸不溶性灰分定量等方法來(lái)測(cè)定。生藥品質(zhì)優(yōu)良度檢定是包括水分、浸出物、有效成分含量的測(cè)定,以確定檢品的質(zhì)量是否合乎規(guī)定的要求。中國(guó)藥典附錄部分收載的藥材取樣法,藥材檢定通則,藥材及成方制劑顯微鑒別法,藥材炮制通則,雜質(zhì)

2、檢查法,水分測(cè)定法,灰分測(cè)定法,浸出物測(cè)定法,揮發(fā)油測(cè)定法,色譜法(層析法等,都是生藥鑒定方法的依據(jù),現(xiàn)將部分常規(guī)操作方法介紹如下:一、生藥的取樣生藥的取樣是指選取供檢定用生藥樣品的方法。取樣的代表性直接影響到檢定結(jié)果的正確性。因此,必須重視取樣的各個(gè)環(huán)節(jié)。1.取樣前,應(yīng)注意品名、產(chǎn)地、規(guī)格等級(jí)及包件式樣是否一致,檢查包裝的完整性、清潔程度以及有無(wú)水跡、霉變或其他物質(zhì)污染等,詳細(xì)記錄。凡有異常情況的包件,應(yīng)單獨(dú)檢驗(yàn)。2. 從同批生藥包件中抽取檢定用樣品原則如下:生藥總包件數(shù)在100件以下的,取樣5件;1001000件按5%取樣:超過(guò)1000件的,超過(guò)部分按1%取樣;不足5件的逐件取樣;對(duì)于貴重

3、生藥,不論包件多少均逐件取樣。3. 對(duì)破碎的、粉末狀的或大小在1cm以下的生藥,可用采樣器(探子抽取樣品,每一包件至少在不同部位抽取23份樣品,包件少的抽取總量應(yīng)不少于實(shí)驗(yàn)用量的3倍;包件多的,每一包件取樣量一般規(guī)定:一般生藥100500g;粉末狀生藥25g;貴重生藥510g;個(gè)體大的生藥,根據(jù)實(shí)際情況抽取代表性的樣品。如個(gè)體較大時(shí),可在包件不同部位(包件大的應(yīng)從10cm以下的深處分別抽取。4.將所取樣品混和拌勻,即為總樣品。對(duì)個(gè)體較小的生藥,應(yīng)攤成正方形,依對(duì)角線劃"×"字,使分為四等分,取用對(duì)角兩份;再如上操作,反復(fù)數(shù)次至最后剩余的量足夠完成必要的試驗(yàn)以及留樣

4、數(shù)為止,此為平均樣品。個(gè)體大的生藥,可用其他適當(dāng)方法取平均樣品。平均樣品的量一般不得少于作真實(shí)性、純度和品質(zhì)優(yōu)良等實(shí)驗(yàn)所需用量的3倍數(shù),即1/3供實(shí)驗(yàn)室分析用,另1/3供復(fù)核用,其余1/3則為留樣保存,保存期至少一年。二、雜質(zhì)檢查生藥中混雜的雜質(zhì),系指來(lái)源與規(guī)定相同,但其性狀或部位與規(guī)定不符;來(lái)源與規(guī)定不同的物質(zhì);無(wú)機(jī)雜質(zhì)如砂石、泥塊、塵土等。檢查方法可取規(guī)定量的樣品,攤開(kāi),用肉眼或擴(kuò)大鏡(510倍觀察,將雜質(zhì)揀出,如其中有可以篩分的雜質(zhì),則通過(guò)適當(dāng)?shù)暮Y,將雜質(zhì)分出。然后將各類(lèi)雜質(zhì)分別稱重,計(jì)算其在樣品中的百分?jǐn)?shù)。如生藥中混存的雜質(zhì)與正品相似,難以從外觀鑒別時(shí),可進(jìn)行顯微、理化鑒別試驗(yàn),證明其

5、為雜志后,計(jì)入雜質(zhì)重量中。對(duì)個(gè)體大的生藥,必要時(shí)可破開(kāi),檢查有無(wú)蟲(chóng)蛀、霉?fàn)€或變質(zhì)情況,雜質(zhì)檢查所用的樣品量,一般按生藥取樣法稱取。三、水分測(cè)定水分的測(cè)定,是為了保證生物不因所含水分超過(guò)限度而發(fā)霉變質(zhì)。水分測(cè)定的方法常用的有烘干法和甲苯法。供測(cè)定用的生藥樣品,一般先破碎成直徑不超過(guò)3mm的顆?；蛩槠?直徑和長(zhǎng)度在3mm以下的花類(lèi)、種子類(lèi)、果實(shí)類(lèi)藥材,可不破碎。1. 烘干法適用于不含或少含揮發(fā)性成分的生藥。取樣品25g,平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中,厚度不超過(guò)5mm,疏松樣品不超過(guò)10mm,精密稱定,打開(kāi)瓶蓋在100105干燥5小時(shí),將瓶蓋蓋好,移置干燥器中,冷卻30分鐘,精密稱定重量,再在上述

6、溫度干燥1小時(shí),冷卻,稱重,至連續(xù)兩次稱重的差異不超過(guò)5mg為止。根據(jù)減失的重量,計(jì)算供試品中含有水分的百分?jǐn)?shù)。2. 甲苯法適用于含揮發(fā)性成分的生藥,用化學(xué)純甲苯直接測(cè)定,必要時(shí)甲苯可先加少量蒸餾水,充分振搖后放置,將水層分離棄去,經(jīng)蒸餾后使用。儀器裝置如圖4-1。A為500ml的短頸圓底燒瓶;B為水分測(cè)定管;C為直形冷凝管,外管長(zhǎng)40cm。使用前,全部?jī)x器應(yīng)清潔,并置烘箱中烘干。測(cè)定時(shí)取樣品適量(約相當(dāng)于含水量14ml,精密稱定,置A瓶中,加甲苯約200ml,必要時(shí)加入玻璃珠數(shù)粒。將儀器各部分連接,自冷凝管頂端加入甲苯,至充滿B管的狹細(xì)部分,將A瓶置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱,待甲苯開(kāi)

7、始沸騰時(shí),調(diào)節(jié)溫度,使每秒鐘餾出2滴。待水分完全餾出,即測(cè)定管刻度部分的水量不再增加時(shí),將冷凝管內(nèi)部先用甲苯?jīng)_洗,再用飽蘸甲苯的長(zhǎng)刷或其他適宜方法,將管壁上附著的甲苯推下,繼續(xù)蒸餾5分鐘,放冷至室溫,拆卸裝置,如有水粘附在B管的管壁上,可用蘸甲苯的銅絲推下,放置,使水分與甲苯完全分離(可加亞甲藍(lán)粉末少許,使水染成藍(lán)色,以便分離觀察。檢讀水量,改算成供試品中含有水分的百分?jǐn)?shù)。3. 減壓干燥法適用于含有揮發(fā)性成分的貴重藥品。減壓干燥器的裝置:取直徑12cm左右的培養(yǎng)皿,加入新鮮五氧化二磷干燥劑適量,使鋪成0.51cm的厚度,放入直徑30cm的減壓干燥器中。測(cè)定時(shí)取供試品24g,混合均勻。分取約0.

8、51g,置已在供試品同樣條件下干燥并稱重的稱瓶中,精密稱定,打開(kāi)瓶蓋,放入上述減壓干燥器中,減壓至2.67kPa(20mmHg以下持續(xù)半小時(shí),室溫放置24小時(shí)。在減壓干燥器出口連接新鮮無(wú)水氯化鈣干燥管,打開(kāi)活塞,待內(nèi)外壓一致,關(guān)閉活塞,打開(kāi)干燥器,蓋上瓶蓋,取出稱瓶迅速精密稱定重量,計(jì)算供試品中含有水分的百分?jǐn)?shù)。也可應(yīng)用紅外線干燥法和導(dǎo)電法測(cè)定水分含量,迅速而簡(jiǎn)便。四、灰分測(cè)定生藥中灰分的來(lái)源,包括生藥本身經(jīng)過(guò)灰化后遺留的不揮發(fā)性無(wú)機(jī)鹽,以及生藥表面附著的不揮發(fā)性無(wú)機(jī)鹽類(lèi),即總灰分。同一種生藥,在無(wú)外來(lái)?yè)诫s物時(shí),一般都有一定的總灰分含量范圍。規(guī)定生藥的總灰分限度,對(duì)于保證生藥的品質(zhì)和純凈程度,

9、有一定的意義。如果總灰分超過(guò)一定限度,表明摻有泥土、砂石等無(wú)機(jī)物質(zhì)。有些生藥本身含有的無(wú)機(jī)物差異較大,尤其是含多量草酸鈣結(jié)晶的生藥,測(cè)定總灰分有時(shí)不足以說(shuō)明外來(lái)無(wú)機(jī)物的存在,還需要測(cè)定酸不溶性灰分,即不溶于10%鹽酸中的灰分。因生藥所含的無(wú)機(jī)鹽類(lèi)(包括鈣鹽大多可溶于稀鹽酸中而除去,而來(lái)自泥沙等的硅酸鹽類(lèi)則不溶解而殘留,故測(cè)定酸不溶性灰分能較準(zhǔn)確地表明生藥中是否有泥沙等摻雜及其含量。1. 總灰分測(cè)定法供測(cè)定樣品須粉碎,使能通過(guò)二號(hào)篩,混合均勻后,稱取樣品23g(如需測(cè)定酸不溶性灰分,可取35g,置熾灼至恒重的坩堝中,稱定重量(準(zhǔn)確至0.01g,緩緩熾熱,注意避免燃燒,至完全碳化時(shí),逐漸升高溫度至

10、500600,使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓?計(jì)算供試品中含總灰分的百分?jǐn)?shù)。如樣品不易灰化,可將坩堝放冷,加熱蒸餾水或10%硝酸銨溶液2ml,使殘?jiān)鼭駶?rùn),然后置水浴上蒸干,殘?jiān)涨胺ㄗ茻?至坩堝內(nèi)容物完全灰化。2. 酸不溶性灰分測(cè)定法取上項(xiàng)所得的灰分,在坩堝中加入稀鹽酸10ml,用表面皿覆蓋坩堝,置水浴上加熱10分鐘,表面皿用熱蒸餾水5ml沖洗,洗液并入坩堝中,用無(wú)灰濾紙濾過(guò),坩堝內(nèi)的殘?jiān)谜麴s水洗于濾紙上,并洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止,濾渣連同濾紙移至同一坩堝中,干燥,熾灼至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓?計(jì)算供試品中含酸不溶性灰分的百分?jǐn)?shù)。五、浸出物的測(cè)定對(duì)于有效成分尚不明確或尚無(wú)精確定量方法的生

11、藥,一般可根據(jù)已知成分的溶解性質(zhì),選用水或其它適當(dāng)溶劑為溶媒,測(cè)定一藥中可溶性物質(zhì)的含量,以示生藥的品質(zhì)。通常選用水,一定濃度的乙醇(或甲醇、乙醚作浸出物測(cè)定。供測(cè)定的生藥樣品須粉碎,使能通過(guò)二號(hào)篩,并混合均勻。1. 水溶性浸出物測(cè)定(1冷浸法:取樣品約4g,稱定重量(準(zhǔn)確至0.01g,置250300ml的錐形瓶中,精密加入水100ml,塞緊,冷浸,前6小時(shí)內(nèi)時(shí)時(shí)振搖,再靜置18小時(shí),用干燥濾器迅速濾過(guò),精密量取濾液20ml,置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,在水浴上蒸干后,于105干燥3小時(shí),移置干燥器中,冷卻30分鐘,迅速精密稱定重量,以干燥品計(jì)算供試品中含水溶性浸出物的百分?jǐn)?shù)。(2熱浸法:取樣品

12、約24g,稱定重量(準(zhǔn)確至0.01g,置250300ml的錐形瓶中,精密加入水50100ml,塞緊,稱定重量,靜止1小時(shí)后,連接回流冷凝管,加熱至沸騰,并保持微沸1小時(shí)。放冷后,取下錐形瓶,塞緊,稱定重量,用水補(bǔ)足減失的重量,搖勻,用干燥濾器濾過(guò)。精密量取濾液25ml,置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,在水浴上蒸干后,于105干燥3小時(shí),移置干燥器中,冷卻30分鐘,迅速精密稱定重量,以干燥品計(jì)算供試品中含水溶性浸出物的百分?jǐn)?shù)。2. 醇溶性浸出物測(cè)定取適當(dāng)濃度的乙醇或甲醇代替水為溶媒。照水溶性浸出物測(cè)定法進(jìn)行(熱浸法須在水浴上加熱。3. 醚溶性浸出物測(cè)定取樣品24g,稱定重量(準(zhǔn)確至0.01g,置于已恒

13、重?zé)康闹居统槌銎髦?用乙醚作溶劑,水浴加熱46小時(shí),放冷,以少量乙醚沖洗回流器,洗液接入蒸餾瓶中,低溫蒸去乙醚,于105干燥3小時(shí),移置干燥器中,冷卻30分鐘,迅速稱定重量,以干燥品計(jì)算供試品中含醚溶性浸出物的百分?jǐn)?shù)。六、揮發(fā)油測(cè)定適用于含較多量揮發(fā)油的生藥。測(cè)定用的樣品,一般須粉碎使能通過(guò)二號(hào)至三號(hào)篩,并混合均勻,儀器裝置如圖4-2。(注:裝置中揮發(fā)油測(cè)定的支管分岔處應(yīng)與基準(zhǔn)線平行測(cè)定法甲法:適用于測(cè)定相對(duì)密度在1.0以下的揮發(fā)油。取樣品適量(約相當(dāng)于含揮發(fā)油0.51.0ml,穩(wěn)定重量(準(zhǔn)確至0.01g,置1000ml的燒瓶中,加水300500ml(或適量與玻璃珠數(shù)粒,振搖混合后,連接揮發(fā)油測(cè)定器與回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測(cè)定器(有0.1ml的刻度的刻度部分,并溢流入燒瓶時(shí)為止,置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱至沸,并保持微沸約5小時(shí),至測(cè)定器中油量不再增加,停止加熱,放置片刻,開(kāi)啟測(cè)定器下端的活塞,將水緩緩放出,至油層上端到達(dá)刻度0線上面5mm處為止。放置1小時(shí)以上,再開(kāi)啟活塞使油層下降至其上端恰與刻度0線平齊,讀取揮發(fā)油量并計(jì)算供試品中含揮發(fā)油的百分?jǐn)?shù)。乙法:適用于測(cè)定相對(duì)密度在1.0以上