臨床免疫組化實用大全

1、免疫組化定義： 免疫組化， 就是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理抗原抗體反應(yīng)， 即抗原與抗體特異性結(jié)合得原理， 通過化學(xué)反應(yīng)使標記抗體得顯色劑 （熒光素、 酶、 金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原（多肽與蛋白質(zhì)），對其進行定位、定性及定量得研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)（immunohistochemistry）或免疫細胞化學(xué)技術(shù) （immunocytochemistry）。臨床常用免疫組化指標得意義臨床病理工作中，我們常用到“腫瘤細胞免疫組化耐藥預(yù)后標記”，但就是許多單位只寫陽性結(jié)果， 不寫臨床意義， 其結(jié)果對臨床幫助不大， 因為許多醫(yī)生不懂得這些結(jié)果得意義， 因此建議大家在出此類報告時， 把“腫瘤細

2、胞免疫組化耐藥預(yù)后標記”得意義打印在報告中，以增加病理報告得使用價值。1、惡性月中瘤免疫組化耐藥預(yù)后標記，全套 4項：P-gP, GSTtt , TOPOII , Ki-67。2、乳癌免疫組化耐藥預(yù)后標記，全套 7項：P-gp, GSTtt , TOPOII , Ki-67, ER PR， C-erbB-2。3、意義：標記物-作用 -陽性部位-臨床意義多藥耐藥基因蛋白（P-Gp） -藥泵作用-胞膜 / 胞漿 -陽性率越高，對下列藥物耐藥性越強：阿霉素、柔紅霉素、表阿霉素、米托蒽醌、長春花堿、長春新堿、紫彬醇、泰素帝。谷光甘肽S轉(zhuǎn)移酶（GST冗）解毒作用胞漿-陽性率越高，對下列藥物耐藥性越強：阿

3、霉素、順鉑、氮芥、環(huán)磷酰胺、瘤可寧。拓撲異構(gòu)酶H （ TOPOII）-靶點作用-胞核-陽性率越高，對下列藥物越有效：意環(huán)類抗生素與鬼臼毒素類，如 VP1&替尼泊甘、玫瑰樹堿、新霉素、柔紅霉 素、表阿霉素、阿霉素、VM26。陽性率高者對VP16尤其有效。雌激素受體（ER） -性激素作用-胞核 -陽性率越高，腫瘤對內(nèi)分泌治療越有效，預(yù)后越好。孕激素受體（PR） -性激素作用-胞核 -陽性率越高，腫瘤對內(nèi)分泌治療越有效，預(yù)后越好。C-erbB-2-癌基因產(chǎn)物-胞漿 - 陽性率越高，腫瘤惡性程度越高。 ER、 PR 陽性而C-erbB-2也陽性者，用三苯氧胺治療效果不好。Ki-67-細胞增殖標

4、志-胞核 -陽性率越高，腫瘤增殖越快，惡性程度越高。Ki-67為細胞增值得一種標記，在細胞周期G1、S、G2、M期均有表達，G0期缺如，其與許多月中瘤分化程度、浸潤、轉(zhuǎn)移、預(yù)后密切相關(guān)。PCNA（曾埴細胞核抗原）。CEA 多數(shù)腺癌表達CEARb （retinoblastoma視網(wǎng)膜母細胞瘤）基因就是月中瘤抑制基因，調(diào)節(jié)細胞周期。P53在免疫組化中均為突變型，陽性率越高，預(yù)后約差。野生型半衰期很短Nm23就是轉(zhuǎn)移抑制基因，其陽性表達與月中瘤轉(zhuǎn)移呈負相關(guān)。目前已被廣泛應(yīng)用于乳腺癌、非小細胞肺癌、胃癌、大腸癌、肝癌、喉癌等多種惡性腫瘤得檢測。幾乎所有得研究都表明， nm23 蛋白高表達患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

5、率相對較低，存活期相對較長。E-Ca， E 鈣粘附蛋白，介導(dǎo)細胞間粘連作用得跨膜糖蛋白，其功能喪失引起細胞之間連接得破壞，主要用于腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移方面得研究。PS2（雌激素調(diào)節(jié)蛋白），其表達與ER表達有關(guān)，可作為內(nèi)分泌治療與預(yù)后判斷 得指標之一。CK18， 低分子量角蛋白， 主要標記各種單層上皮包括腺上皮， 而復(fù)層鱗狀上皮常陰性，主要用于腺癌診斷。CK19,分布于單層上皮與間皮，常用于腺癌診斷，肝細胞不表達，而膽管為陽性反應(yīng)Hep par 1,肝細胞抗原，正常肝細胞與高分化肝細胞癌陽性，低分化肝細胞癌多弱陽性或陰性。CK2Q用于胃腸道腺癌、卵巢黏液性月中瘤、皮膚 Merkel細胞癌診斷。鱗癌、乳

6、 腺癌、肺癌、子宮內(nèi)膜與卵巢非黏液性腫瘤常陰性。CK7 卵巢、肺與乳腺上皮常陽性，結(jié)腸、前列腺、胃腸道上皮陰性。Villin 絨毛蛋白，正常組織中， villin 通常只表達于有刷狀緣得細胞上，如胃腸道上皮細胞、 胰腺與膽管上皮細胞以及腎實質(zhì)得上皮細胞中 （特別就是近曲小管） 。Villin 在胃腸道癌、胰腺癌、膽囊癌與膽管癌組織中有很高得表達率，具有明顯腺樣結(jié)構(gòu)得腫瘤上沒有villin 表達，則這個腫瘤為胃腸道、胰腺、膽囊或膽管來源得可能性極低。乳腺癌也經(jīng)常成為女性患者未知原發(fā)部位轉(zhuǎn)移癌要鑒別排除得一種疾病。 因為在轉(zhuǎn)移癌組織上觀察到明顯得 villin 免疫組化陽性染色，則這個腫瘤就極不可

7、能為乳腺來源。其她villin 免疫組化染色通常為陰性表達得腫瘤還有：如卵巢漿液性癌、尿道移行細胞癌與前列腺癌。間皮瘤也經(jīng)常為 villin 陰性表達，因此在一些情況下 Villin 還可以作為鑒別間皮瘤與腺癌使用抗體得一種。但就是也有一些非胃腸道來源得腫瘤可表達villin ，如子宮內(nèi)膜樣腺癌、卵巢粘液性癌、腎細胞癌與小部分肺癌。也有一些專家報道Villin 在部分宮頸內(nèi)膜腺癌病例中表達。肝癌得診斷Villin 免疫組化染色可以顯示出毛細膽管結(jié)構(gòu)，因此它也可能在表達部分肝癌得管狀結(jié)構(gòu)上很有用。多克隆CEAS是用于此目得得第一種試劑，而且CD10 (CALLA) 在表達肝癌得該結(jié)構(gòu)上也非常有用

8、。多克隆 CEA villin與CD10 (CALL符肝癌病 例上得表達， 相互之間并沒有任何得沖突， 因此如果懷疑肝癌得可能性， 建議將 這三種抗體共同使用以協(xié)助疑難病例得診斷。Villin 在神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤上得應(yīng)用Villin 在神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤得研究上也很有幫助。眾所周知，類癌與胰腺得胰島細胞腫瘤具有相相似得形態(tài)學(xué)特征， 僅在形態(tài)學(xué)上區(qū)分這兩種腫瘤幾乎就是不可能得。 Villin 在這種情況下特別有用，因為據(jù)文獻報道在85%得胃腸道類癌病例中有 villin 得表達，但在胰島細胞腫瘤上未見陽性表達報道。 Villin 在類癌上得表達通常為胞膜陽性。另外，有一些證據(jù)表明 villin 在胃與

9、下消化道得小細胞癌上得表達率比在其她部位得小細胞癌上要高。如：肺、食道、膀胱或前列腺等。據(jù)文獻報道，大約有40%得肺類癌病例villin 陽性，在其她一些神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤上，如甲狀腺髓樣癌與少數(shù)得美克爾細胞瘤上也有villin 得表達。MRP1 多藥耐藥相關(guān)蛋白 1，影響化療敏感性，與預(yù)后相關(guān)。MDR 多藥耐藥基因TS胸昔合成酶，就是5-FU重要作用靶點，如果其高表達，陽性反映+以上，提示腫瘤細胞對5FU 耐藥。Syn 突觸素 神經(jīng)組織標志S-100 神經(jīng)組織標志， 存在于神經(jīng)組織， 垂體、 頸動脈體， 腎上腺髓質(zhì)、 唾液腺、少數(shù)間葉組織，常用于神經(jīng)鞘瘤、惡黑、脂肪肉瘤、軟骨腫瘤診斷。NSE主要

10、用于神經(jīng)內(nèi)分泌月中瘤診斷Chr,嗜銘素，腎上腺髓質(zhì)含量很高，鑒別腎上腺髓質(zhì)與皮質(zhì)，用于神經(jīng)內(nèi)分泌月中瘤診斷。CKH 高分子角蛋白，主要標記鱗狀細胞腫瘤CKL低分之角蛋白，主要標記單層上皮、腺上皮EMA 上皮膜抗原，糖蛋白，廣泛分布各種上皮及其腫瘤Vim 波形蛋白，間葉組織標志P504甲?；o酶A消旋酶檢測診斷前列腺癌得敏感性為97%,特異性為100%。AMACR得優(yōu)點在于它就是癌癥特異性，只存在于癌癥組織。Rubin稱，AMACR亦可用作其她癌癥得診斷標志物。 對各種癌癥細胞進行檢查后發(fā)現(xiàn)， 結(jié)腸直腸癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤與黑素瘤都過度表達AMACR以結(jié)腸直腸癌與前列腺癌表達

11、最高。CD117 胃腸間質(zhì)瘤CD10 作為共同急性淋巴母細胞型白血病抗原，主要表達于未成熟淋巴細胞，在Burkitt 淋巴癌， 慢性髓性白血病等造血系統(tǒng)疾病得診斷中具有應(yīng)用價值。 近幾年來發(fā)現(xiàn)該抗原在造血系統(tǒng)外得某些腫瘤中有表達， 如子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤、 惡性黑 色素瘤等?？贵w在對腎細胞癌進行診斷與鑒別時有一定得參考價值。CD15就是一種細胞粘附分子，因其對霍奇金淋巴瘤（HD）中得R-S細胞具有良好得標記作用，被認為就是 HD得重要標志物。除HD得鑒別診斷外，對胃癌、 結(jié)直腸癌、甲狀腺癌、乳腺癌等月中瘤CD15得表達研究發(fā)現(xiàn)，CD15表達隨癌細 胞分化程度下降、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與臨床分期增高而明顯增高

12、。認為 CD15得表達就 是判斷腫瘤得發(fā)展、預(yù)測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與預(yù)后得良好 指標。免疫電鏡觀察顯示，CD15抗原主要分布于大腸癌細胞漿得界膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體及近細胞核膜處，CD15 可能就是通過對所結(jié)合得鋪基構(gòu)型改變影響與參與腫瘤得形成與轉(zhuǎn)移過程。SMA 平滑肌肌動蛋白，標記平滑肌CD56 為神經(jīng)細胞黏附分子，主要分布于大多數(shù)神經(jīng)外胚層來源細胞，常用于星型細胞瘤、神經(jīng)母細胞瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌月中瘤診斷，也就是NK細胞瘤得重要標志， 也標記小細胞肺癌Des結(jié)蛋白，廣泛分布于平滑肌、心肌、骨骼肌細胞與肌上皮細胞，高分化高表 達、低分化低表達。MSA 肌特異性肌動蛋白，廣泛分布于幾乎所有肌型細胞中CD68

13、 存在于骨髓與各神經(jīng)組織得巨噬細胞 用于粒細胞白血病、各種單核細胞 來源腫瘤、包括惡性纖維組織細胞瘤診斷（首選）。CD34 表達于早期淋巴造血干細胞、祖細胞、內(nèi)皮細胞、胚胎纖維母細胞與某些神經(jīng)組織細胞，多用于標記血管內(nèi)皮細胞，血管源性腫瘤得診斷，GIST 80-90%、CD31也標記血管內(nèi)皮。CD44就是一種分布廣泛得跨膜糖蛋白分子，分 CD44s與CD44v兩大類。CD44s 主要作為透明質(zhì)酸受體，結(jié)合透明質(zhì)酸后影響腫瘤得生長與轉(zhuǎn)移。而CD44v 則主要表達于轉(zhuǎn) 移得月中瘤細胞。李道明等用免疫組化LSAB法檢測了 42例食管鱗癌CD44v4/5得表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組得陽性表達率為76

14、 19 （16 21），而非轉(zhuǎn)移組得陽性率為42 86（9 12），兩組間有顯著性差異。癌巢周邊得癌細胞、肌間浸潤得癌細胞、有核分裂得癌細胞與癌栓中得癌細胞及浸潤脈管壁得癌細胞均呈強陽性表達。 張成武等檢測了 20 例正常胃粘膜上皮、 43 例異型增生與85例胃癌組織CD44v6得表達，結(jié)果正常胃粘膜無 表達，而異型增生與胃癌 組織 陽性率分別為 30 2與 74 1，其表達強度與胃癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、 腫瘤生長方式、靜脈與淋巴管侵襲及遠處 轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。以上結(jié)果均表明，CD44v得高表達構(gòu)成了月中瘤細胞得侵襲性與易轉(zhuǎn)移性。NESTIN#經(jīng)干細胞中極為豐富Ost 成骨素，為骨化細胞分泌。A

15、AT抗胰蛋白酶 纖維組織細胞來源月中瘤 ACT抗糜蛋白酶GFAP膠質(zhì)纖維酸性蛋白神經(jīng)組織標志，多用于星形膠質(zhì)瘤診斷Tg 甲狀腺球蛋白，甲狀腺癌TG 陽性。CT 降鈣素 甲狀腺髓樣癌陽性。PH 甲狀旁腺素 甲狀旁腺腫瘤陽性N-myc表達增強得小細胞肺癌與神經(jīng)母細胞瘤對化療缺乏反應(yīng)并進展快速；bcl-2 ：耐藥機理為抗凋亡作用，高表達者對多數(shù)抗癌藥物/放射治療耐受。月中瘤相關(guān)抗原72 （TGA72）多種惡性上皮性月中瘤表達TGA72尤其就是乳腺癌、卵巢癌與結(jié)腸癌。正常上皮細胞、肉瘤、淋巴造血系統(tǒng)腫瘤通常TGA72 陰性。TGA72抗體用于乳腺癌得研究較多，其高表達通常與月中瘤體積大、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移瘤

16、細胞分化差及高增殖活性有關(guān)。腫瘤相關(guān)抗原（GA733） 編 碼上 皮 糖 蛋白 40 ，就是一種 上皮細 胞 黏 附分子（EP-CAM）對上皮細胞得生長與分化起著重要作用。多種月中瘤可有GA733表達，尤其就是乳腺癌、結(jié)腸癌及肺癌等。Kubuschok等采用GA733對非小細胞肺癌手 術(shù)切除淋巴結(jié)中隱匿性微轉(zhuǎn)移灶進行檢測， 發(fā)現(xiàn)隱匿灶得檢出就是判斷總生存率得獨立預(yù)后因子。結(jié)腸癌GA733 表達形式與腫瘤預(yù)后有關(guān)，細胞膜及細胞漿得表達預(yù)后較基膜側(cè)得表達為差。TTF-1甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1, TTF-1表達于甲狀腺腺上皮與肺得上皮細胞中。在肺月中瘤研究中發(fā)現(xiàn)， 大多數(shù)肺得小細胞癌、 原發(fā)性與轉(zhuǎn)移性肺

17、腺癌、 少部分大細胞未分化肺癌、大多數(shù)非典型神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤免疫組化結(jié)果顯示TTF-1陽性，而肺鱗癌及絕大多數(shù)典型類癌TTF-1陰性。在甲狀腺乳頭狀腺癌中TTF-1亦陽性，而TTF在其它組織表達陰性。據(jù)此認為 TTF-1可用來鑒別肺腺癌與鱗癌，并有助于與肺 轉(zhuǎn)移性腺癌得鑒別。TTF-1在甲狀腺及其月中瘤中得表達TTF-1主要表達在甲狀腺濾泡細胞中與甲狀旁腺得主細胞中，TTF-1 為甲狀腺分化與甲狀腺球蛋白分泌調(diào)節(jié)得基礎(chǔ)物質(zhì)，可促進甲狀腺過氧化物酶、碘/鈉得轉(zhuǎn)運，？TTF-1與血清TSH得活性有關(guān)，活性得TSH-R可增強TTF-1 得表達。TTF-1 在良惡性甲狀腺組織中表達不同，正常甲狀腺與良性

18、腺瘤表達多，甲狀腺乳頭狀癌與濾泡癌中表達少，未分化癌中不表達， TTF-1 在惡性甲狀腺病變中得表達強度隨年齡增加而增強，而且病變存瘤期長，復(fù)發(fā)機率高。TTF-1在肺癌中得表達75%馬肺非小細胞癌（NSCLC顏性表達，腺癌（ACs明顯高于鱗癌（SCC） 90%以上 得原發(fā)性小細胞肺癌（SCLC）（達陽性，TTF-1在非小細胞肺癌（NSCLC枷性表達 強度與病人得預(yù)后成呈負相關(guān)，可作為一項獨立得預(yù)后指標，肺得典型性類癌（TC現(xiàn)為陰性，表明小細胞肺癌與非小細胞肺癌可能有一個不同于TCS馬共同起源得理論。臨床常見得免疫組化指標在乳腺癌診治中得應(yīng)用近年來， 由于免疫組化實驗方法在各醫(yī)院病理科得迅速普及

19、， 許多患者得術(shù)后標本可以進行免疫組化檢查。 這對于患者得診斷、 分型以及術(shù)后得綜合治療有著重要得意義。本文就臨床上常見得一些指標及其意義進行綜訴。一、激素受體（ER）與孕激素受體（PR）人類最先發(fā)現(xiàn)乳腺癌細胞與激素得關(guān)系始于 1896 年。 Bentson 觀察到乳腺癌患者切除卵巢后可使乳腺癌細胞得生長受到抑制。1967年Jensen發(fā)現(xiàn)人類乳腺癌中含有ER從此開始了真正意義上得乳腺癌內(nèi)分泌治療得研究。女性正常乳腺得細胞上存在ER與PR,雌激素與孕激素通過ER與PR對細胞功能進行調(diào)節(jié)。當細胞惡變時，腫瘤細胞可以部分地或全部保留正常得受體系統(tǒng)， 其功能與正常細胞相似。 這種腫瘤細胞得生長仍然依

20、賴原來得激素環(huán)境調(diào)節(jié)， 稱為激素依賴性腫瘤，臨床上稱為 ER 陽性乳腺癌。有些細胞在癌變過程中，其受體系統(tǒng)保留很少或完全喪失， 不能再作為激素得靶細胞， 其生長不再受激素得控制與調(diào)節(jié)， 臨床 上表現(xiàn)為ER陰性乳腺癌。Jensen發(fā)現(xiàn)ERB,很快又發(fā)現(xiàn)PR,并證明PR得合成 與雌激素與ER復(fù)合物在核內(nèi)發(fā)生得變化過程有關(guān)，PR得形成直接受ER得控制 與調(diào)節(jié)，故PR陽性得乳腺癌，ER大多為陽性。臨床上可以通過對雌激素受體（ERi與孕激素受體（PR）得檢測，得出腫瘤細胞 內(nèi)激素受體含量得水平， 從而提示乳腺癌得預(yù)后信息與指導(dǎo)內(nèi)分泌治療。 據(jù)報道 乳腺癌ER PR檢測得陽性率分別為40%60%、30%左

21、右。許多文獻均已證實， ER、 PR 變化與乳腺癌病人預(yù)后密切相關(guān)，亦與其她公認得預(yù)后因素，如腫瘤分級、倍體性及分期有關(guān)。高分化月中瘤或臨床分期較低得月中瘤 ER、PR更可能陽性， 受體陽性月中瘤細胞得明顯減少與細胞增殖分級增高、c-erbB-2癌基因擴增增加及EGFR表達增加有關(guān)。免疫組化抗受體檢測可預(yù)測乳腺癌對激素治療得反應(yīng)性。 無ER或PR表達得月中瘤對激素治療通常反應(yīng)性差，而ER及PR陽性月中瘤則對激素治療反應(yīng)性高。1974年美國Bethesde國際會議，綜合世界各國400多例各種方式得內(nèi)分泌治療 報道，表明事先未經(jīng)激素受體測定得乳腺癌患者，應(yīng)用內(nèi)分泌治療有效率只有30%;而經(jīng)ER測定

22、陽性者有效率達55%60%,受體陰性者有效率5% 8%。TAM 治療無效得原因與ER得異常結(jié)構(gòu)有關(guān)。其后多年病例不斷積累，報道得有效率 基本在這一水平。1998年美國臨床月中瘤年會（ASCO國際權(quán)威協(xié)作臨床研究報 道37 000例乳腺癌患者得結(jié)果表明：乳腺癌術(shù)后輔助三苯氧胺（TAM）治療可以明顯降低復(fù)發(fā)率、死亡率；TAM對絕經(jīng)后患者有效，絕經(jīng)前患者也有一定 療效；ER陽性患者用TAM效果最好，ER不明得患者也有效；輔助化療后加 用TAM,能進一步提高療效；延長服藥時間能提高療效；服用 TAM明顯降 低對測乳腺癌發(fā)生率；長期服用 TAM會增加患子宮內(nèi)膜癌得風險。二、PS2基因PS2蛋白就是Mas

23、ialowski于1982年從激素依賴性乳腺癌 MCF-7細胞株中提取出 來得雌激素誘導(dǎo)蛋白之一，在乳腺癌中表達陽性率約為43%58%。PS2基因受 雌激素調(diào)節(jié)與控制，在雌激素誘發(fā)與控制下才能轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生PS2 蛋白。換言之PS2依賴于ER得存在。可以認為，PS2基因得存在與ER PB存在著密切正相關(guān) 關(guān)系。Gion研究446例原發(fā)性乳腺癌，觀察PS2與ER PR關(guān)系。結(jié)果68. 5% PS2 陽性病例，具ER、PB均陽性；而PS2陽性其ER PR均陰性者不足3%。Gillesby 等報道ER（ 十 ）者中有59%, PR（ + ）者中有60% PS2呈陽性。大量研究表明， PS2蛋白可以顯示功

24、制性雌激素調(diào)節(jié)系統(tǒng)，能更好得指導(dǎo)臨床抗雌激素治療。目 前認為PS2對判斷預(yù)后及指導(dǎo)內(nèi)分泌治療均有價值，陽性者預(yù)后好，復(fù)發(fā)率及死亡率均較低，且內(nèi)分泌治療有效。作為內(nèi)分泌治療效果預(yù)測得指標，PS2可以補充ER PR得不足，甚至有學(xué)者認為PS2更優(yōu)于ER PR如果將三者結(jié)合使用， 可達到相當滿意得效果。當三項均陰性時，內(nèi)分泌治療很少有效，預(yù)后甚差。三、c-erbB-2癌基因c-erbB-2癌基因就是乳腺組織細胞中較常見而易激活得原癌基因。在多種腺癌細 胞中此癌基因均有高水平表達，報道最多得就是乳腺癌。c-erbB-2癌基因得異常表達擴增見于25-30%得原發(fā)性乳腺癌病例，并且僅限于癌細胞，而不出現(xiàn)于

25、正常乳腺上皮。 c-erbB-2 擴增與 雌、孕激素受體表達呈負相關(guān)，與腫瘤級別較高有關(guān)。c-erbB-2 基因表達陽性者可使ER 陽性病人對內(nèi)分泌治療得反應(yīng)率降至20%;ER陰性病人內(nèi)分泌7B療幾乎無效。c-erbB-2癌基因得擴增或過度表達還與乳 腺癌得復(fù)發(fā)、 轉(zhuǎn)移及生存期明顯相關(guān)。過度表達者其術(shù)后早期復(fù)發(fā)率與遠處轉(zhuǎn)移率增加,生存期縮短，淋巴結(jié)陽性得乳腺癌c-erbB-2 得過表達就是預(yù)后不良得重要因素。 另有研究表明，乳腺癌c-erbB-2 表達陽性病例其瘤腫往往大于 2cm，因此推測其蛋白產(chǎn)物 p185 過量表達可能與腫瘤得生長速度有關(guān)。因而c-erbB-2得強陽性表達可作為識別早期乳

26、腺癌得有效指標。近年來有人提出"四聯(lián)"檢測，包括ER PR PS2以及c-erbB-2。ER PR、PS2陽性表達得乳腺癌激素治療得敏感性高，無c-erbB-2基因過度擴增得乳腺癌同樣治療敏感性增加。相反，前三者陰性而后者陽性得乳腺癌，通常其復(fù)發(fā)率、死亡率均高，預(yù)后差。4、 p53 抑癌基因p53 就是一種抑癌基因，就是人類研究最多得基因，分野生型（ Wtp53 ）與突變型（Mtp53） 。 Wtp53在正常組織內(nèi)含量低，半衰期短，僅3060分鐘，而免疫組化得敏感性無法檢測如此微量得抗原成分。 當 p53 突變后， 能與進入組織內(nèi)得各種病毒蛋白、 Wtp53 蛋白、 正常等

27、位基因蛋白與熱休克蛋白等結(jié)合形成穩(wěn)定得復(fù)合物， 在組織內(nèi)得半衰期長， 含量逐漸積累， 為免疫組化得檢測提供了條件。其陽性表達率約2 5 % 3 5 %。 Wtp53在正常組織中能參與細胞從 G0期進入G1 期得負調(diào)節(jié)。從而控制細胞得增生，同時誘導(dǎo)細胞得程序性死亡。當 p53 突變后則喪失了啟動細胞凋亡得能力， 結(jié)果使腫瘤細胞數(shù)目增加， 從而使細胞呈現(xiàn)無休止生長而凋亡受到抑制。在乳腺癌增生過程中有Mtp53 基因表達，并隨著非典型增生程度得增加而增加。 p53 表達水平與細胞得高度增生及腫瘤細胞得分化程度有關(guān)，分化越低惡性程度越高得腫瘤， p53 基因水平越高。 p53 基因蛋白陽性與ER陰性得

28、乳腺癌患者預(yù)后不良，生存期短。5、 nm23nm23 又稱為抗轉(zhuǎn)移癌基因，就是一種抑癌基因，產(chǎn)物就是由 152 個氨基酸組成得蛋白質(zhì)， 與二磷酸核苷激酶（ NDPK） 得氨基酸序列具有高度同源性。人類 nm23基因有2個亞型：nm23H1與nm23H2,兩者有88%同源性，nm23H1與乳腺癌得預(yù)后關(guān)系更密切。nm23蛋白具有NDPK功能，通過影響微管聚合而調(diào)節(jié)細胞運動，并通過影響 G 蛋白得信號傳遞而發(fā)揮負向調(diào)節(jié)作用，從而抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。但其作用并不依耐于 NDPK 得活性。有實驗結(jié)果表明，與轉(zhuǎn)移潛能有關(guān)得就是nm23NDPK得表達水平而不就是NDPK得活性。nm23就是獨立預(yù)后指標，其表達與

29、年齡、月中瘤大小、ER PR與C-erbB-2無關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、組織學(xué)分型、分級及臨床分期均有顯著關(guān)系， nm23 高表達者得預(yù)后明顯好于低表達者。nm23表達降低得乳腺癌分化較低，ER表達水平低，并常常出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預(yù)后不良。在乳腺癌進展過程中， nm23 得表 達水平降低。通過檢測 nm23 可以把腋淋巴結(jié)陽性病人中可能發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移與腋淋巴結(jié)陰性病人中有潛在高轉(zhuǎn)移傾向得病例篩選出來，進行相應(yīng)得預(yù)防性治療，從而提高治療效果。六、多耐藥（MDR）基因腫瘤細胞耐藥就是化療失敗得主要原因， 引起耐藥得重要原因之一就是多藥耐藥性， 即腫瘤細胞接觸一種抗癌藥物產(chǎn)生耐藥性后， 對多種結(jié)構(gòu)與作用機

30、制不同得其它抗癌藥也產(chǎn)生耐藥性。多藥耐藥（MDR）基因得產(chǎn)物P糖蛋白（P-gp）就是一種跨膜蛋白，作為“藥泵”功能引起癌細胞產(chǎn)生耐藥，它具有膜轉(zhuǎn)運蛋白得許多結(jié)構(gòu)特征，一旦與抗癌藥物結(jié)合，在 ATP供能下，將藥物由胞內(nèi)泵出胞外，因而胞內(nèi)藥物濃度不斷下降， 以致無法發(fā)揮細胞毒作用， 出現(xiàn)耐藥性。 陽性表達得細胞對化療劑尤其就是蒽環(huán)類與長春花堿類及阿霉素等化療劑， 具有固有與獲得性耐藥。P-gp表達可見于高度固有耐藥得月中瘤，在這些月中瘤，P-gp得高水平表達亦見于產(chǎn)生這些月中瘤得正常組織。對化療敏感得月中瘤通常P-gp表達 率低，那些對系統(tǒng)化療最敏感得實體瘤（精原細胞瘤與胚胎性癌）很少出現(xiàn)P-gp

31、 表達，曾接受過化療患者發(fā)生得月中瘤常有 P-gp表達增強。檢測P-gp表達有助于確定可能 對常規(guī)化療耐藥得腫瘤， 從而提供適合于這些病人合理得替代治療方法， 對腫瘤 病人選擇化療方案與預(yù)后得判斷具有重要得臨床意義。七、血管內(nèi)皮細胞生長因子（VEGF）血管形成在腫瘤生長、 浸潤、 轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用， 它受到一系列促進與抑制因子得調(diào)節(jié)，其中最重要得促進因子之一就是月中瘤細胞在生長過程中分泌得VEGF它得編碼基因位于6P21、3,由8個外顯子構(gòu)成，由于mRNA不同得剪切形式，形 成5種不同得VEG吩別含有121、145、165、189、206個氨基酸，其中以VEGF165 最重要，在各種細胞中表達

32、占優(yōu)勢，VEGF12W VEGF189ft大部分表達 VEGF得組 織與細胞中均能檢測到，VEGF145f VEGF206t常少見，其中VEGF206只在人胎 肝cDNA庫中可以檢測到。VEGR!過二硫鍵結(jié)合形成二聚體后才有活性，它得 受體為酪氨酸蛋白激酶型膜受體，具有高度特異性。當VEGF與受體結(jié)合后，可以刺激血管內(nèi)皮細胞增殖，促進血管形成，并增加血管通透性,這樣腫瘤細胞一方面可以獲得充分得營養(yǎng)而迅速增殖， 另一方面也容易通過血管內(nèi)皮細胞進入血流從而發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移。VEGF主要由月中瘤細胞產(chǎn)生，小部分來自細胞間質(zhì)，它就是獨 立預(yù)后指標，與年齡、絕經(jīng)狀態(tài)無關(guān)，與 ER、PR呈負相關(guān)，高表達者易轉(zhuǎn)

33、移復(fù) 發(fā)，預(yù)后不良，且內(nèi)分泌治療與化療得效果差，建議對VEGF®表達者聯(lián)合應(yīng)用抗血管生成治療，如利用VEGF單抗阻斷與受體結(jié)合，重組VEGF與VEGFlS爭受 體，將VEGF與小分子毒性物質(zhì)結(jié)合，利用反義核酸技術(shù)抑制VEGFS達等等。七、腫瘤細胞增生標志物目前被廣泛采用得兩種增殖相關(guān)標志物就是Ki-67及PCNA （增埴細胞核抗原）。PCNA （增殖細胞核抗原）：就是一種僅在增殖細胞中合成或表達得核內(nèi)多肽，其表達與細胞周期有關(guān)。主要表達于增殖細胞得S期、G1期與G2初期。Ki-67與PCNA一樣，為細胞增殖得一種標記，在細胞凋亡中 S G2、M期均有表達， G0期缺如。Ki-67增殖指數(shù)高低與許多月中瘤得分化程度、浸潤、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后密 切相關(guān)。Ki-67與PCNA免疫反應(yīng)性與細胞增生得形態(tài)學(xué)特征關(guān)系密切，特別就 是與有絲分裂數(shù)及腫瘤分級相關(guān)。 在乳腺腫瘤中， 其表達還與其她分化及預(yù)后指標相關(guān)，如與雌孕激素受體表達呈負相關(guān)，而與P53基因異常呈正相關(guān)。在乳腺 癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、肝癌、胃癌與一些淋巴瘤及肉瘤，采用 Ki-67與PCNA免疫組化分析，均顯示有增殖證據(jù)，提示這些月中瘤