植物基因工程疫苗的研究進(jìn)展.docx

1、會(huì)做傳真本欄目旨在從不同方面報(bào)道行業(yè)或企業(yè)的大型會(huì)議.歡迎提供會(huì)議殘索。E-mai:sysc.zn江西博乘大藥廠會(huì),*保50段4猊斌米會(huì)業(yè)1好*t、水地址：江西有九江晝沙域工業(yè)因電話：“792-6893392河址：公司推薦產(chǎn)品：通效阿H西尊朋針頭袍岐的釘北方金4i排止痢針2008年12月6-7日“京津冀畜牧善醫(yī)科技創(chuàng)新交流會(huì)暨新思想、新觀點(diǎn)、新方法論壇”部分內(nèi)容摘煽植物基因工程疫苗的研究進(jìn)展作者：王偉青李玉冰周珍輝曾俊安英鳳王振玲北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院畜牧獸醫(yī)系改編：趙翠卿本刊編輯部植物基因工程疫苗是利用植物系統(tǒng)表達(dá)病原菌抗原蛋白一個(gè)或兒個(gè)亞單位的疫苗，它沒有病原菌完整的侵染能力，卻可以使機(jī)體對特異

2、的病毒或細(xì)菌產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)。由于轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)生的疫苗對動(dòng)物實(shí)施免疫只是簡單地?cái)z取含這種疫苗的植物組織或種子，所以這種疫苗不會(huì)被酶類所破壞，可通過機(jī)體腸道黏膜作用激發(fā)特異性免疫應(yīng)答，使動(dòng)物獲得持久性疾病防御能力，旦沒有或很少出現(xiàn)病原體的過敏反應(yīng)。植物表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)異源蛋白成本低，具有正確折疊的能力、口服安全等特點(diǎn).受到了國內(nèi)外研究人員的廣泛關(guān)注,Curtiss等人在1990年首次報(bào)道了在煙草中表達(dá)鏈球前抗原蛋白SpaA.1997年轉(zhuǎn)基因植物疫苗的第一次臨床試驗(yàn)證明了植物基因工程疫苗在抵抗傳染性疾病方面的巨大潛能°利用植物作為抗原表達(dá)和傳遞的載體已經(jīng)成為當(dāng)今生物技術(shù)研究的熱點(diǎn)之一。一、植

3、物基因工程疫苗的優(yōu)勢植物基因工程疫苗是Mason等提出的,該技術(shù)是利用分子生物學(xué)技術(shù)把重組的疫苗基因?qū)胫参?，并使其在植物體內(nèi)大髭表達(dá)的一類技術(shù)。植物基因工程疫苗與常規(guī)疫苗及其它新技術(shù)疫苗相比,具有以下優(yōu)勢：1.植物細(xì)胞具有全能性，能夠再生植株,且植物細(xì)胞中很少含有潛在的動(dòng)物或人類病原,更安全可輜。2. 可利用植物能夠儲(chǔ)藏蛋白質(zhì)于種子中這一有利條件,進(jìn)行簡單方便地生產(chǎn)'儲(chǔ)藏和發(fā)放疫苗。3. 用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)疫苗是最經(jīng)濟(jì)的生產(chǎn)系統(tǒng)，因?yàn)樾枰膬H是陽光、水和肥料。4. 植物具有完整的真.核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng),有利于禾紐蛋白質(zhì)的準(zhǔn)確組裝和表達(dá)，使表達(dá)產(chǎn)物具有與高等動(dòng)物細(xì)胞一致的免疫原性和生物活性。

4、5. 直接以植物的可食用部分進(jìn)行曰服免疫,既可減去純化過程,降低生產(chǎn)成本，又可避免繁瑣的接種程序c與皮下注射相比,轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)生的亞基或可溶性抗原的口服免疫常常在刺激免疫反應(yīng)方面效率較高，只需要少屋的抗原。二、植物基因工程疫苗的研究進(jìn)展(-)植物基因工程疫苗的研究進(jìn)展隨著基因工程疫苗的發(fā)展將轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)基因工程疫苗用人或動(dòng)物疾病的防治已成為新興的研究領(lǐng)域。利用植物基因工程生產(chǎn)畜禽疫苗比生產(chǎn)人用疫苗更具現(xiàn)實(shí)意義和發(fā)展?jié)摿?。盡管目前還沒有培育出成熟的植物轉(zhuǎn)基因畜禽疫苗品種，但相關(guān)研究已取得了一定成果。牛、豬、家禽、兔等的植物基因工程疫苗的研究情況，見下表。植物基因工程疫苗的研究應(yīng)用物疫笛植物表達(dá)

5、蛋白他略)牛功妗薯、秘命芥口玲戎珥4(H4DV)VP1妥白煙草.4C±牛攜以，(RPV)血彼去(0釜白俳染姓炎古4巖突蚩臺(tái)(TGEV-S)和Ecoll不時(shí)熱股(HB)睛(牛用口躇疫瘍毒以荀也可用于祐村早)黃色玉米柱大桿茜LtB玉來樣子*tH緘傳豪姓胃腸炎珞#亞單待染姓炎恩狀珥，S釜白精流行姓腹瀉珥，杭原家禽璃件朵姓法氏去痛功,主矣括主保如姓枕原VP2蚩白1馬普薯育傳染姓女七管炎令#(IBV)S1的蛋白而h梅琦件染姓支七管炎(1BV)S1兔兌出血鞏滴4(RHDV)AST/89(二)提高植物丞因工程疫苗表達(dá)量和免疫原性的研究進(jìn)展植物基因工程疫苗抗原表達(dá)雖低是其發(fā)展的主要限制之-。雖然抗體

6、的表達(dá)量可以達(dá)到總的可溶性蛋白的8%,但是其他蛋白的表達(dá)水平僅有0.01%,幾乎沒有超過0.40%的。1. 在葉綠體中表達(dá)抗原蛋白在過去幾年中，用葉綠體表達(dá)頁組蛋白已取得了很大的進(jìn)展。在煙草葉綠體中,Staub等人表達(dá)了含二硫鍵的人生長素，占植物可溶性蛋白的7%;Decosa等人表達(dá)了一種殺蟲劑，占植物可溶性蛋白的45%;Daniell等人表達(dá)了其聚霍亂毒素亞單位,占植物可溶性蛋白的411%,是在核中表達(dá)的41倍;Tregoning等人表達(dá)了菌源的富含AT(7213%AT)和人工合成的富含GC(5213%AT)的破傷風(fēng)毒素C片段，笛源的基因在葉綠體中更為穩(wěn)定，兩種蛋白分別占細(xì)胞可溶性蛋白的25

7、%和10%。2. 通過融合蛋白表達(dá)杭原妥白Tregoning等人設(shè)計(jì)了一個(gè)融合蛋白.來提高HbsAg在植物中的表達(dá)最。這個(gè)融合蛋白由一段大豆生(仲下頁)2008年12月5-6日大連三儀動(dòng)物藥品有限公司舉辦的“科技成果產(chǎn)業(yè)化研討會(huì)夔大連三儀集團(tuán)創(chuàng)業(yè)十周年四顧”內(nèi)容描編禽流感疫苗使用中應(yīng)注意的4個(gè)問題主講：周蛟北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所摘編：趙翠卿本刊編輯部禽流感疫苗在使用過程中，常由于不能合理使用，而造成雞群產(chǎn)蛋率下降或免疫不確實(shí),從而為養(yǎng)殖戶造成不必要的經(jīng)濟(jì)損失。只有了解使用中應(yīng)注意的問題,才能合理使用禽流感疫苗。一、注意甲醪超標(biāo)問題對A、B、C、D、E、F6個(gè)禽流感疫苗生產(chǎn)企業(yè)的Re-1

8、株、Re-1株、Re-1+Re-4株、H5+H9二價(jià)苗的21批次疫苗中甲醛進(jìn)行含量測定,結(jié)果如下：表1禽濾感疫苗中的甲隧含量蟲戶廠本(.!%)ISH1tc-1<A2004124|O.SI%t.1A20頃06.66、6.6B9065.n%|B.u%I"C60*X,14%1.4C70201D.I?*1二、注意不同甲醛含量疫苗對產(chǎn)蛋率的影響不同甲醛含量的禽流感疫苗對產(chǎn)蛋率的影響不同,結(jié)果見表2表2不同甲醛含量的禽流感疫苗對產(chǎn)蛋率的影響姐劑血清中B2(Pg/nl)，蚩率（%）8佶平醉痍苗33.7170i.4傅甲醒疫苛57.5591未使用HS疫苗82.7092.5免疫6倍甲醛含量:疫苗可

9、見雞冠萎縮、蒼白。剖檢可見卵泡數(shù)：B少、卵子數(shù)量少、卵子及子宮腔體積萎縮等。由上表可見,1.4倍甲醛疫苗對產(chǎn)蛋率影響不明顯，而8倍甲醛疫苗對產(chǎn)蛋率的影響較明顯.因此，免疫接種時(shí)應(yīng)選擇甲酷含量低的禽流感疫苗。三、注意禽流感疫苗免疫時(shí)間長短對產(chǎn)蛋率的影響由下表可見，隨著禽流感免疫時(shí)間的延長，禽流感疫苗對產(chǎn)蛋率的影響逐漸減弱，產(chǎn)蛋率逐漸回升。表3禽流感免疫時(shí)間對產(chǎn)蛋率的影響inM尸釜率（%）JAJt疲后15天ttiiA1H5N1(M等2006333)*7.9980.1686.66tMtt85.02S5.1385.27*產(chǎn)蛋率：以免疫前的平均產(chǎn)蛋率為哀敬四、注意新城疫母源抗體對禽流感-新城疫重組二聯(lián)活

10、疫苗的干擾表4新城疫母源杭體對禽流感抗體的影響cutn釜0X分AKSW1>flX.*<M(OIOOI209S)7.“S.33Hf奔4log2AHKD”二“第4.笛4.02.46由上表可見，養(yǎng)雞生產(chǎn)中雛雞母源抗體均大于41<?g2時(shí)，應(yīng)用禽流感-新城疫二聯(lián)活疫苗后，兩種抗體均不升高,免疫空白期存在發(fā)生新城疫和旗流感的隱患，因此，免疫禽流感-新城疫二聯(lián)活疫苗應(yīng)在母源抗體低于41og2時(shí)進(jìn)行。QB埴嘛日斯：2008-1219責(zé)編：趙早辯電話Q：744150942（校上頁）長儲(chǔ)存蛋白（VSPalphas）氨基端融合，信號(hào)肽的作用是引導(dǎo)HbsAg進(jìn)入植物細(xì)

11、胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，融合蛋白不裂解,在轉(zhuǎn)基因植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中大屋積累，提高了HbsAg的表達(dá)SoHuang等人在表達(dá)麻疹病最凝血素蛋白（H蛋白）時(shí)。構(gòu)建了3種不同的表達(dá)結(jié)構(gòu):pSinH（只是H基因）,SinH/KDEL（加了一個(gè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)逗留序列）,Spinsp/H/KDEL（加了一個(gè)植物信號(hào)肽N端）。結(jié)果，表達(dá)雖最高的是SinH/KDEL。3. 加上強(qiáng)啟動(dòng)子CarriUo等在轉(zhuǎn)基因馬鈴薯中表達(dá)口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP1時(shí),在VP1基因中加入一個(gè)或兩個(gè)花椰菜病毒35S啟動(dòng)子（CaMV35s啟動(dòng)子）,或一個(gè)改進(jìn)的啟動(dòng)子和煙草花葉病毒5,端非編碼區(qū)相連，表達(dá)的蛋白量:也得到了提高。4. 提高免疫原桂的方法為多種疫苗的

12、聯(lián)用Diane等人發(fā)現(xiàn)，在轉(zhuǎn)基因煙草:中表達(dá)的麻疹凝血素蛋白，小鼠試驗(yàn)誘發(fā)低濃度的中和性抗體，但兩種疫苗-DNA疫苗和轉(zhuǎn)基因疫苗的聯(lián)用，能產(chǎn)生高濃度的抗體。三、發(fā)展前景在疫苗的研制方面，應(yīng)用多種生物技術(shù)研究和開發(fā)不同類型的高新技術(shù)制品，可提高疫苗的安全性和效力，并且在商品化方面取得更大的成就。眾多的實(shí)驗(yàn)表明，單靠花椰菜花葉病毒（CaMV）的35S啟動(dòng)子效果并不理想，而II成型表達(dá)會(huì)造成不必要的能垃浪致，所以器官特異型強(qiáng)啟動(dòng)子是今后研究和應(yīng)用的理想的啟動(dòng)子;葉綠體基因組表達(dá)也將提高重組表達(dá)蛋白員，進(jìn)一步加強(qiáng)葉綠體轉(zhuǎn)化的研究,并擴(kuò)大葉綠體轉(zhuǎn)化的植物種類。另外，黏膜佐劑和適當(dāng)?shù)目乖f呈細(xì)胞將提高口服亞單位疫苗的免疫效率，不同的