淺論氟伐他汀對高血壓腎臟硬化大鼠腎臟細胞凋亡的影響

1、淺論氟伐他汀對高血壓腎臟硬化大鼠腎臟細胞凋亡的影響 作者：華云， 韓楓， 李愛梅， 夏春英， 張國輝【摘要】 目的： 探討羥甲基戊二酰輔酶A還原酶抑制劑氟伐他汀對氧化亞氮缺乏性高血壓大鼠腎臟細胞凋亡的影響。方法： 給予左旋硝基精氨酸甲酯(Lnitroargininemethylester，LNAME)建立氧化亞氮缺乏性高血壓腎臟硬化大鼠模型，觀察氟伐他汀對高血壓腎臟硬化大鼠Fas、FasL、Bax和Bcl2蛋白表達水平的影響。結果： 氟伐他汀使高血壓腎臟硬化大鼠凋亡蛋白Fas、FasL、Bax表達減少，抗凋亡蛋白Bcl2表達增加。結論： 氟伐他汀能夠改善高血壓腎臟硬化，調節(jié)細胞凋亡水平可能是其

2、機制之一。 【關鍵詞】 高血壓腎臟硬化; 氟伐他汀; 細胞凋亡Abstract Objective: To assess the apoptosis occurring in the kidney of SD rats induced by Lnitroargininemethylester(LNAME)over time and investigate the effects of fluvastatin treatment. Methods： Male SD rats were administered by LNAME to form hypertensive nephropathy，t

3、hen the rats were administered by fluvastatin，at last the rats had their kidneys removed to measure protein expression of Fas，FasL，Bax and Bcl2 genes by Western blot. Pathologic measurement had been taken. Results: After fluvastatin treatment the protein expression of Fas, FasL and Bax were more dep

4、ressed and the protein expression of Bcl2 was higher. Conclusion：Fluvastatin prevented or retarded hypertensioninduced renal nephropathy via inhibition of renal nephropathy fibrosis，the apoptosis might be one of the mechanisms.Key words hypertensive nephropathy; fluvastatin; apoptosis近來，隨著我國人口的老齡化和人

5、們生活方式的改變,原發(fā)性高血壓的患病率逐年升高，高血壓所導致的終末期腎衰發(fā)生率呈上升趨勢，在終末期腎衰竭患者中，高血壓腎臟硬化占第二位1。氟伐他汀是一種新型的3羥基3甲基戊二酰輔酶A(HMGCoA)還原酶抑制劑，不僅具有降脂作用，還是有一定的腎保護作用。本實驗通過觀察大鼠腎臟凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的變化，以探討氟伐他汀對高血壓腎臟硬化大鼠腎臟細胞凋亡的影響。1 材料與方法1.1 材 料1.2 方 法 2 結 果2.1 各組大鼠收縮壓的變化LNAME灌胃后，造模大鼠2周血壓即升高，到第4周時形成穩(wěn)定的高血壓模型，4周時收縮壓140 mmHg,均達到高血壓診斷標準。8周時正常對照組收縮壓為(102.

6、66.48)mmHg，高血壓腎臟硬化組為(213.813.44)mmHg，氟伐他汀組為(216.611.44)mmHg，高血壓腎臟硬化組和氟伐他汀組相比，血壓的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。16周時正常對照組收縮壓為(106.77.26)mmHg，高血壓腎臟硬化組為(207.311.53)mmHg，氟伐他汀組為(199.311.61)mmHg,高血壓腎臟硬化組和氟伐他汀組相比，血壓的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)，氟伐他汀對血壓沒有影響，見圖1。 2.2 腎臟病理變化與正常對照組相比，高血壓腎臟硬化組大鼠多數腎小球存在嚴重硬化，腎小球萎縮，囊腔縮小，球囊明顯粘連，重度系膜細胞增生，基底膜增厚

7、明顯，單個腎小球內細胞數增多，HE染色可見系膜旁及系膜區(qū)嗜紅物質基質沉積，見圖2。Masson染色可見腎小球內有較強的基質膠原陽性染色(藍色)，見圖3。高血壓腎臟硬化組的腎小球內細胞數、腎小球硬化評分與正常對照組比較顯著提高，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。氟伐他汀組與高血壓腎臟硬化組相比較，兩項指標明顯好轉，見表1。表1 各組腎小球硬化評分和腎小球內細胞數比較2.3 細胞凋亡的檢測結果高血壓腎臟硬化組腎皮質的Bax、Fas和FasL 蛋白表達水平顯著高于正常對照組，Bcl2蛋白表達水平顯著低于正常對照組，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);而氟伐他汀組Bax、Fas和FasL蛋白

8、表達水平與高血壓腎臟硬化組比較顯著降低，Bcl2蛋白表達水平與高血壓腎臟硬化組比較顯著升高，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。見圖4、5和表2。表2 各組大鼠Bax、Bcl2、Fas和FasL蛋白灰度值表達與正常對照組比較，a：P0.05;與高血壓腎臟硬化組比較，b：P0.053 討 論細胞凋亡和細胞增生共同調節(jié)腎臟各部分細胞總量的平衡，細胞凋亡可參與高血壓腎臟硬化的發(fā)生, 并在調節(jié)靶器官細胞數量方面發(fā)揮重要作用。高血壓可能作為一種觸發(fā)因素, 激活凋亡基因表達, 從而誘導或抑制細胞凋亡, 參與高血壓所致腎損害。本研究結果表明，高血壓腎臟硬化組的Fas、FasL和Bax蛋白水平明顯高于正常

9、對照組，而Bcl2蛋白水平低于正常對照組。目前認為腎實質細胞的凋亡是高血壓腎臟硬化的重要機制之一，細胞凋亡是腎小球硬化時腎小球細胞清除的重要形式。高血壓時腎實質細胞凋亡增加與下列因素有關： 系膜細胞分泌的異常細胞外基質。在人腎小球腎炎和大鼠腎小球硬化模型中，系膜細胞凋亡主要出現在細胞外基質成分和結構發(fā)生改變的時期，提示在進行性腎小球硬化時，腎小球細胞凋亡可能受其周圍細胞外基質的控制。 TGF1的增加。新近的研究發(fā)現TGF1對腎小球細胞是否發(fā)生凋亡也起重要調控作用，TGF1可誘導體外培養(yǎng)的腎小球足突細胞凋亡。氟伐他汀使用8周后Fas和FasL的蛋白水平明顯低于高血壓腎臟硬化組，并且促凋亡基因Ba

10、x蛋白水平顯著低于高血壓腎臟硬化組，而抗凋亡基因Bcl2的蛋白水平顯著高于高血壓腎臟硬化組。氟伐他汀可能通過減少腎實質細胞的凋亡，改善腎臟硬化。已有研究表明，他汀類藥物能夠抑制細胞凋亡，辛伐他汀對糖尿病腎病晚期細胞凋亡有一定的抑制作用。Mizuguchi等研究表明，阿伐他汀顯著抑制單側輸尿管梗阻模型大鼠腎小管上皮細胞凋亡,促進腎小管上皮細胞的再生。Usui等研究表明，他汀類藥物通過抑制法呢基焦磷酸(FPP)和攏牛兒基攏牛兒焦磷酸(GGPP)的產生，阻斷了由Ras介導的細胞內信號傳遞，從而引起腎臟細胞的凋亡減少。他汀減少了小G蛋白p21RhoB的異戊二烯化，從而減少了血管平滑肌細胞的凋亡，通過調

11、節(jié)信號途徑而減少了細胞的凋亡。我們認為在高血壓腎臟硬化后期以腎實質細胞凋亡為主要表現時，他汀類藥物可通過降低TGF1的作用而達到抑制細胞凋亡的作用。Zhang等發(fā)現阿伐他汀治療大鼠異體移植腎臟時，可降低TGF1的表達。體外研究也表明他汀類藥物可降低TGF1的表達，可能是通過降低血管緊張素來下調其表達的。另一方面他汀類藥物可通過調節(jié)纖溶酶原減少細胞外基質沉積而減少細胞凋亡。他汀可通過調節(jié)纖溶酶原系統(tǒng)的活性使失活的纖溶酶原再生。董一飛等研究表明，無論在mRNA水平還是蛋白水平，阿伐他汀都能明顯抑制膠原和纖溶酶原激活物抑制劑1的表達，表明阿伐他汀能影響系膜細胞的細胞外基質合成和降解，改善大鼠系膜細胞

12、的細胞外基質積聚。他汀通過減少細胞外基質沉積，使受其控制的腎小球細胞凋亡受到抑制。因此，我們認為氟伐他汀可能通過減少細胞外基質沉積和降低TGF1的表達而抑制了腎實質細胞的凋亡，改善了高血壓腎臟硬化?！緟⒖嘉墨I】 1 高秀林.高血壓腎損害發(fā)病機制的研究進展J.北京醫(yī)學，2007，29(9):559-561. 鄭桂安，吳可貴，萬建新.他汀類藥物對腎臟疾病非降脂的保護作用J.高血壓雜志，2006，14(2)：91-93. Yang B,Johnson TS,Thomas GL,et al.Expression of apoptosisrelated genes and proteins in exp

13、erimental chronic renal scarringJ.J Am Soc Nephrol,2001,12(2):275-288. Nellemann B,Gormsen LC,Dollerup J,et al.Simvastatin reduces plasma osteoprotegerin in type 2 diabetic patients with microalbuminuriaJ. Diabetes Care,2007,30(12):3122-3124. Mizuguchi Y,Miyajima A,Kosaka T,et al.Atorvastatin ameliorates renal tissue damage in unilateral obstructionJ. J Urol,2004,172(6 Pt 1):2456-2459. Usui H, Shikata K, Matsuda M,et al. HMGCoA reductase inhibitor ameliorates diabetic nephropathy by its pleiotropic effects in ratsJ. Nephrol Dial Transplant,2003,18(2):265