慢性排斥腎肥大細(xì)胞形態(tài)與超微結(jié)構(gòu)的研究

1、慢性排斥腎肥大細(xì)胞形態(tài)與超微結(jié)構(gòu)的研究關(guān)鍵詞：腎移植慢性排斥肥大細(xì)胞形態(tài)學(xué)超微結(jié)構(gòu)摘要：目的：了解腎移植慢性排斥反應(yīng)時(shí)肥大細(xì)胞在排斥腎中的形態(tài)、超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及分布規(guī)律，以探討肥大細(xì)胞是否在腎移植慢性排斥反應(yīng)中所起的作用。方法：采用甲苯胺藍(lán)、愛爾沙藍(lán)特殊染色法及電子顯微鏡技術(shù)。結(jié)果：發(fā)現(xiàn)慢性排斥腎中，有較多的肥大細(xì)胞，主要分布于腎皮質(zhì)區(qū)。特殊染色及超微結(jié)構(gòu)的結(jié)果顯示，排斥腎中至少存在幼稚與成熟兩種類型的肥大細(xì)胞。在移植后3個(gè)時(shí)間段(4年)，每個(gè)高倍視野中，肥大細(xì)胞的平均數(shù)分別為2.092.84,8.934.25和13.764.53，隨著移植時(shí)間的延長(zhǎng)，肥大細(xì)胞呈增加的趨勢(shì)。4年以上組明顯高于1年

2、4年組，(P0.01)；小于1年組的病例中52%未見到肥大細(xì)胞。結(jié)論：肥大細(xì)胞可能參與了腎移植排斥反應(yīng)，其作用機(jī)理尚需進(jìn)一步研究。中國(guó)書資料分類號(hào)：R329.24The morphological and ultrastructural studies on mast cells in chronic rejection of kidney allograftLiu Yage, Cao Jianping, Xiang Jun, Wang Shixian, Sun Wunli, Liu Long, Jiang Zhiming(Department of Medical Experiment, G

3、eneral Hospital of Shenyang Military Region, Shenyang 110015) Keywords：kidneytransplantationchronic rejectionmast cellmorphology ultrastructureAbstract：Aim:To clarify the morphological and ultrastructural features and the regularity of distribution of mast cells in the transplanted kidneys of chroni

4、c rejection and to srudy if mast cells play a role in the chronic rejection of kidney transplantation. Methods: Special stainings of toluidine blue, Alcian blue and electron microscopic technique were used in the study. Results: There were more mast cells in the kidneys of chronic rejection and the

5、cells were mainly distributed in the cortex region of the rejected kidneys. Special stainings and ultrastructural study showed that there were at least two types of mast cells, the young and the mature, in the rejected kidneys. In the groups of 4 year was significantly higher than that in the group

6、of 14 year(P 0.01). Mast cells were not seen in 52% of kidneys in the group of 1 year. Conclusion: Mast cells may be involved in the chronic rejection of kidney transplantation and its mechanism remains to be studied.腎臟的同種異體移植已成為挽救晚期腎功衰竭患者生命的重要手段，目前，影響移植腎功能的主要因素仍然是術(shù)后的排斥反應(yīng)。由于新型免疫抑制劑的不斷涌現(xiàn)，急性排斥反應(yīng)對(duì)移植腎已不

7、再構(gòu)成威脅，但隨著移植時(shí)間的推移，慢性排斥反應(yīng)又成為移植腎功能喪失的重要因素。慢性排斥腎的病理改變特征是：腎小球、血管、腎小管及間質(zhì)的纖維化。越來越多的研究證明，組織的纖維化與肥大細(xì)胞分泌的多種介質(zhì)及細(xì)胞因子有關(guān)。為此，我們對(duì)切除的慢性排斥腎中肥大細(xì)胞的形態(tài)、數(shù)量及超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析，以探討肥大細(xì)胞在腎移植慢性排斥反應(yīng)中是否起一定的作用。1材料和方法1.1研究對(duì)象均為我院泌尿外科1987年1997年期間的住院患者，共57例，其中男36例，女21例，年齡24歲63歲。同種異體腎移植前診斷為慢性腎炎尿毒癥。慢性排斥反應(yīng)的診斷參照文獻(xiàn)1，定為移植術(shù)后1年以上，腎功逐漸喪失，移植后常規(guī)應(yīng)用硫唑嘌呤、強(qiáng)

8、的松或與環(huán)孢素A聯(lián)合應(yīng)用。1.2形態(tài)學(xué)觀察光鏡觀察：標(biāo)本來自本院病理科保存的石蠟切片，經(jīng)常規(guī)HE染色后，光鏡下觀察。特殊染色基本按文獻(xiàn)2介紹的甲苯胺藍(lán)與愛爾沙藍(lán)法。染色后，于低倍鏡下選擇特殊染色陽(yáng)性的細(xì)胞相對(duì)密集區(qū)，計(jì)數(shù)5個(gè)以上高倍視野中的細(xì)胞總數(shù)，及每個(gè)高倍視野中的平均細(xì)胞數(shù)。結(jié)果采用t檢驗(yàn)分析。超微結(jié)構(gòu)觀察：在保存的電鏡標(biāo)本(由我院電鏡室提供)中，檢出8例慢性排斥腎。超薄切片標(biāo)本，經(jīng)醋酸雙氧鈾和檸檬酸鉛雙重染色后，以Philips M10型透射電鏡觀察。2結(jié)果HE染色顯示，慢性排斥腎的病理改變主要表現(xiàn)為腎內(nèi)各級(jí)動(dòng)脈管壁顯著增厚，內(nèi)膜增生，管腔狹窄或閉鎖，腎單位纖維化，間質(zhì)淋巴細(xì)胞及炎性細(xì)胞

9、浸潤(rùn)，腎小管變性，以及腎間質(zhì)纖維化等。兩種特殊染色陽(yáng)性細(xì)胞的特征為：細(xì)胞呈圓形、橢圓形或棱形，核較大，胞漿豐富。甲苯胺藍(lán)染色胞漿顆粒呈紫紅色，細(xì)胞核為淡蘭色；愛爾沙藍(lán)染色陽(yáng)性的細(xì)胞，細(xì)胞漿顆粒呈蘭色或紅色，細(xì)胞核為淡紅色。兩種方法染色呈陽(yáng)性的細(xì)胞均可確定為肥大細(xì)胞。肥大細(xì)胞主要分布于腎皮質(zhì)區(qū)(1)。移植后3個(gè)時(shí)間段的肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)見表1，其中移植時(shí)間少于1年組的21例中，有11例未見到肥大細(xì)胞。1肥大細(xì)胞在排斥腎中的分布(40)Fig1Distribution of mast cells in rejected kidney( 40)Mast cells were localized in th

10、e cortex region in cytoplasmic gran-ules. Violet staining denotes toluidine blue. 表1腎移植后不同時(shí)間段肥大細(xì)胞數(shù)量的變化Tab1The changes of mast cell counts in rejected kidneys afterrenal grafting at different survival time(year) YearnMast cell counts/HPF( s) 415 13.76 4.53b P 0.01 a vs b 電子顯微鏡：8例標(biāo)本中有4例見到肥大細(xì)胞。初步分為兩種類型

11、：一種細(xì)胞核較大，染色質(zhì)疏松；另一種細(xì)胞核較小，染色質(zhì)濃聚。細(xì)胞胞漿中的顆粒呈多樣性，電子密度減低，有的形成空泡(2A、B)。肥大細(xì)胞位于間質(zhì)內(nèi)，或與成纖維細(xì)胞、腎小球基底膜毗鄰。2肥大細(xì)胞的電鏡觀察Fig2Electronic microscope observation of mast cells A: The nucleus of mast cells were lager, chromosomal puff and cytoplasm granules fragment-like or vacule-like( 8900) B: The nucleus of mast cells we

12、re smaller, chromosomal concentration and cytoplasm granules were the same as A( 6610) 3討論本研究對(duì)57例腎移植后因腎功衰竭而行腎切除的患者腎標(biāo)本中肥大細(xì)胞的形態(tài)進(jìn)行了觀察，對(duì)3個(gè)不同時(shí)間段肥大細(xì)胞的數(shù)量進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，甲苯胺藍(lán)及愛爾沙藍(lán)兩種染色方法均能較好地顯示腎組織中的肥大細(xì)胞，其染色特征與文獻(xiàn)2的報(bào)道相一致。其中用愛爾沙藍(lán)染色法，可將肥大細(xì)胞胞漿中的顆粒染呈蘭色和紅色兩種型式，提示排斥腎中的肥大細(xì)胞存在著幼稚與成熟兩種類型。對(duì)肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果顯示，隨著移植時(shí)間的延長(zhǎng)，肥大細(xì)胞的數(shù)量呈上升趨勢(shì)。

13、移植腎存活1年以上的兩個(gè)組肥大細(xì)胞的數(shù)，均高于移植腎存活不到1年組；存活4年以上組的肥大細(xì)胞數(shù)，明顯高于存活1年4年組(P0.01)，提示肥大細(xì)胞可能參與了腎移植的慢性排斥反應(yīng)過程。超微結(jié)構(gòu)研究表明，排斥腎中肥大細(xì)胞的基本特征是：細(xì)胞漿顆粒呈多樣性，電子密度減低，有的形成空泡狀。一種細(xì)胞核較大，染色質(zhì)疏松；另一種細(xì)胞核較小，且染色質(zhì)濃聚。前種細(xì)胞核的類型按LiQiu-Yn的報(bào)道3，考慮為幼稚型。結(jié)合形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)分析，排斥腎中的肥大細(xì)胞存在著不同的類型，這些不同類型的細(xì)胞與其所處的功能狀態(tài)存在著一定的關(guān)系。雖然肥大細(xì)胞在循環(huán)中數(shù)量極少，據(jù)報(bào)道小鼠約為12個(gè)/105有核細(xì)胞4，且為未成熟型，但其

14、分布甚廣，幾乎遍布全身各處，包括結(jié)締組織、粘膜組織及各個(gè)臟器。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，其所合成分泌的各種介質(zhì)和細(xì)胞因子(如組織胺、肝素和腫瘤壞死因子等)與許多疾病的發(fā)病機(jī)理有關(guān)。尤其在纖維性硬化疾病中，已證明肥大細(xì)胞及其產(chǎn)物與組織纖維化密切相關(guān)5。在肺移植后的排斥反應(yīng)機(jī)理研究中，也證明有肥大細(xì)胞的參與6。本研究觀察到，在慢性排斥腎中有較多的肥大細(xì)胞，且隨移植后時(shí)間的延長(zhǎng)呈增加趨勢(shì)，提示腎移植慢性排斥反應(yīng)時(shí)，組織纖維化的病理改變可能系肥大細(xì)胞及其釋放的介質(zhì)和細(xì)胞因子所致，但此研究只是初步觀察的結(jié)果。關(guān)于肥大細(xì)胞的作用方式及其與它免疫細(xì)胞之間的相互關(guān)系還需進(jìn)一步研究。作者簡(jiǎn)介：劉亞革，女，53歲，主任醫(yī)師。沈陽(yáng)

15、市沈河區(qū)文化路83號(hào)，Tel.(024)23844039作者單位：劉亞革，曹建平，姜志明：沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院，醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)科；王世賢，孫文利：病理科；向軍；劉龍：泌尿外科，沈陽(yáng)，110015參考文獻(xiàn)1朱有華，閔志廉.腎移植慢性排斥反應(yīng)的研究現(xiàn)狀.中華器官移植雜志，1997:18；61632凌啟波著.實(shí)用病理特殊染色和組織技術(shù).廣東高等教育出版社，廣州：1989:1421453Li Qiu-yan, Ahmad AR, Macaulay MA, et al. The relationship of mast cells and their secreted products to the volume

16、of fibrosis in posttransplant hearts. Transplantation, 1992; 53:1047 1051 4Middleton E, Reed CE, Ellis EF, et al. Allergy. third edition. St.Louis, The C.V. Mosby Company. 1988: 108 5Schaffer FL, Weg VB. Mast cells eosinophils and fibrosis. Clin Exp Allergy, 1997; 27:64 70 6Buvry A, Garbarg M, Dimtriadon V, et al. Phenotypi