附子對慢性充血性心力衰竭模型大鼠NO、TNFα水平的影響

1、附子對慢性充血性心力衰竭模型大鼠NO、TNF水平的影響         【摘要】   目的探討附子抗心力衰竭的療效及作用機制。方法用SD大鼠50只，隨機分正常、空白對照組（簡稱號組）、模型組(簡稱號組）、地高辛組（簡稱號組）、附子水煎劑低劑量組（簡稱號組）、附子水煎劑高劑量組（簡稱號組）。除正常對照組外均采用尾靜脈注射鹽酸阿霉素(ADR)損傷大鼠心肌致心力衰竭。各組分別用藥 治療 后，測定大鼠血清中TNF、NO水平，并光鏡觀察心肌的理變化。結果與正常對照組比較，心衰模型組大鼠血清中TNF、NO水平升高；與

2、心衰模型組比較，使用地高辛能顯著降低心衰模型大鼠血清中TNF、NO水平，差異顯著(P0.01)；而附子水煎劑高劑量、附子水煎劑低劑量則可輕度降低心衰模型大鼠血清中TNF、NO水平，兩組無明顯差異(P0.05),但這兩組跟地高辛組差異顯著(P0.01)。光鏡結果顯示附子水煎劑高劑量組、附子水煎劑低劑量組心肌細胞損傷度均輕于心衰模型組，而地高辛組心肌細胞損傷度明顯輕于心衰模型組。結論附子高、低劑量組能輕微改善心功能、減輕心衰癥狀，調節(jié)神經(jīng)內分泌細胞因子水平，必要時應復方使用，方能收到滿意的療效。 【關鍵詞】   附子 慢性充血性心力衰竭 NO TNF SD大鼠慢性充血性心力衰竭(CHF)

3、也稱慢性心力衰竭，是大多數(shù)心血管疾病的最終歸宿，也是最主要的死亡原因。近年來用附子單味藥治療多種原因引起的心力衰竭的研究較少，本實驗旨在復制CHF動物模型，從細胞因子水平探討附子水煎劑對實驗性CHF大鼠的作用機制，為CHF的綜合治療提供理論和實驗依據(jù)。1  實驗材料 1.1  藥物  附子水煎劑高劑量組、附子水煎劑低劑量組。按傳統(tǒng)方法水煎，藥液濃縮成100，即每毫升含生藥0.1g，4 冰箱貯存?zhèn)溆?；鹽酸阿霉素(ADR)，山西普德藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號20070603；地高辛，廣東邦民制藥有限公司生產(chǎn)，批號060921，用蒸餾水稀釋成0.2mgml，滅菌后備用。1.

4、2  實驗動物  WISTAR大鼠50只，雌雄各半，體重250300g，由重慶第四軍醫(yī)大學動物所提供。1.3  主要試劑  一氧化氮(NO)試劑盒由上海貝西公司提供、(腫瘤壞死因子)TNF試劑盒由上海西唐生物科技有限公司提供。1.4  主要實驗儀器及設備  哺乳類動物手術器械(手術刀、組織剪、有齒鑷、止血鉗、12號灌胃針、5ml注射器、4號頭皮針等)高速低溫冷凍離心儀( 中國 科技大學實業(yè)總公司中佳光學儀器公司)、低溫冰箱、 電子 秤(湖南儀器儀表總廠天平廠)。2  實驗方法 2.1  動物分組及造模 

5、取60只SD大鼠適應性喂養(yǎng)3d后，隨機取10只(雌雄各半)作為號組(空白對照組)。尾靜脈注射等體積生理鹽水，給藥容積同鹽酸阿霉素。余50只大鼠用阿霉素造模，每kg次大鼠用4mg，每5天注射1次，共3次。末次ADR給藥24h后，隨機選取模型鼠2只，斷頭處死，取出心臟，用預冷0.9生理鹽水沖洗，取左室心肌部分，以10甲醛固定，HE染色，光鏡下觀察確認造模成功后，再將所余大鼠隨機分為號組(心衰模型對照組)、號組(地高辛治療組)、號組(附子水煎劑低劑量組)、號組(附子水煎劑高劑量組)。各組均精飼料喂養(yǎng)，自由飲水。2.2  給藥方法  、組造模后次日開始灌胃給藥，連續(xù)給藥21d，附子

6、水煎劑低劑量組12 mlkg，、附子水煎劑高劑量組46mlkg，地高辛按1.6mgkg進行，、組則以710mlkg的生理鹽水灌胃。2.3  觀察項目及檢測方法         3  實驗結果 3.1  一般情況  整個實驗期間，正常對照組(號組)大鼠毛色有光澤，雙眼靈活有神，行動敏捷，對周圍變化靈敏。余50只大鼠在第1、2次尾靜脈注射ADR后先后出現(xiàn)癥狀，如活動減少、蜷縮、納食減少、皮毛松軟、體重減輕等，此后癥狀呈逐漸加重趨勢，從第3次注射后出現(xiàn)程度不一的腹水，尿少便溏，唇周

7、青紫，雙耳蒼白，呼吸減弱，毛色枯槁、散亂豎起，脫毛，嚴重者行走不穩(wěn)，消瘦，口唇及雙耳發(fā)紺，個別開始死亡，至第3次ADR注射時，50只大鼠中死亡6只，取2只大鼠作造模測試，余42只大鼠隨機選分4組，組12只、組10只、組10只、組10只，雌雄各半。在用藥階段組又死亡4只，組死亡2只，組死亡3只，組死亡3只，故完整觀察到40只，其中組10只，組8只，組8只，組7只，組7只。隨后實驗期間，用藥組大鼠不再死亡，存活大鼠癥狀有明顯改善，組癥狀改善比和組明顯，而心衰模型組癥狀無明顯改善。3.2  大鼠TNF、NO含量變化的測定  模型組血清TNF、NO水平明顯高于正常對照組及各 治療

8、組，與兩用藥組比較有學意義(P0.01)；附子水煎劑高劑量組與附子水煎劑低劑量組之間無明顯差異(P0.05)，但兩組與地高辛組之間差異顯著(P0.01)，見表1。表1  各組大鼠NO、TNF含量變化（略）與正常組比較，P0.01、P0.05；與心衰模型組比較P0.01；與地高辛組比較，P0.013.3  病理改變  光鏡下可見正常組心肌細胞形態(tài)、胞質、間質及橫(縱)紋均為正常，但心衰模型組存在心肌細胞橫(縱)紋不清，部分區(qū)域肌質纖維溶解，胞漿空泡變性，不同程度的炎癥細胞浸潤和問質水腫病變表現(xiàn)。附子水煎劑低劑量組、附子水煎劑高劑量組、地高辛組以上病變較心衰模型有明顯

9、減輕，心肌細胞橫(縱)紋存在。4  討論 本實驗利用鹽酸阿霉素的心肌毒性作用制備CHF模型。阿霉素是常用的廣譜抗腫瘤藥，具有引起心臟損害的嚴重毒性作用，主要損傷心肌細胞，引起類似擴張性心肌病樣病理、生理改變和在此基礎上的心力衰竭。使用阿霉素建立CHF模型成功率高，技術難度不大，適合研究衰竭心臟心超微結構改變、神經(jīng)內分泌異常等1。附子的功效是回陽補火、散寒除濕、溫中止痛2。從實驗結果看附子單用治療CHF，效果沒有地高辛組明顯，有報道3：四逆湯能顯著降低阿霉素致心力衰竭大鼠血清BNP和IL6水平，及CHF心肌細胞損傷程度，從而改善心功能、減輕心衰癥狀、降低死亡率。提示四逆湯不僅能直接加強

10、心肌收縮力、擴張外周血管、減輕前后負荷、改善心臟舒縮功能，而且具有調節(jié)改善心衰大鼠神經(jīng)內分泌功能的作用。因而可治寒邪深入少陰所致的陽虛寒厥證。附子有抗休克、強心，抗心肌缺血缺氧，能興奮垂體腎上腺皮質系統(tǒng)、抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)及提高免疫功能等作用。但其組方四逆湯效更顯。NO在心血管系統(tǒng)中發(fā)揮作用的可能機制是通過提高細胞中鳥苷酸環(huán)化酶（guanylate cyclase, GC）的活性，促進磷酸鳥苷環(huán)化產(chǎn)生環(huán)一磷酸鳥苷（guanosine 3, 5-cyclic monophosphate cGMP），使細胞內cGMP水平增高，繼而激活依賴cGMP的蛋白激酶對心肌肌鈣蛋白的磷酸化作用加強，肌鈣蛋白c對

11、Ca2+的親合性下降，肌細胞膜上K+通道活性也下降，從而導致血管舒張。本實驗結果顯示，正常對照組、地高辛組大鼠NO含量均顯著低于附子水煎劑低、高劑量組和心衰模型組，說明地高辛能有效地降低血清NO水平，增強心肌收縮力、保護血管、心肌細胞，而單味附子效不顯。地高辛組和附子水煎劑低、高劑量組差異明顯(P0.01)。TNF的局部升高可直接影響心功能，與心衰的發(fā)生有關。它導致的心肌機能障礙包括鈣平衡的改變，直接的細胞毒作用，氧化張力、興奮-收縮耦聯(lián)的破壞，心肌細胞凋亡和壞死，心肌細胞丟失及被非心肌細胞取代，心室腔擴大,纖維結締增生等構，心肌重塑的特征性改變。CHF時心臟本身合成釋放TNF是其重要來源之一

12、。本實驗結果顯示正常對照組、地高辛組大鼠TNF含量均顯著低于心衰模型組和附子水煎劑低、高劑量組(P0.01)，說明地高辛能有效地降低血清TNF水平，保護血管、心肌細胞，而單味附子效不顯。地高辛組和附子水煎劑低、高劑量組差異顯著(P0.01)。本實驗對照組用藥地高辛屬洋地黃類強心劑，是目前治療CHF的常用藥物。強心苷對主要由紊亂導致的心衰療效欠佳，如縮窄性心包炎、主動脈瓣狹窄、竇性心律的二尖瓣狹窄、肥厚型心肌病等。而對收縮功能抑制狀態(tài)的療效較好。在竇性心律的心衰患者，停用地高辛，仍用利尿劑者未見心衰惡化；停用地高辛，繼續(xù)使用擴血管藥及利尿劑者在臨床及左心射血分數(shù)、每分鐘搏出量等與使用地高辛時無顯著變化。若地高辛通過增加細胞內Ca2+的濃度而產(chǎn)生正性肌力作用，則在長期用藥后，細胞內Ca2+和Na+將恢復到正常水平，地高辛的正性肌力作用將減弱或消失，因此竇性心律的心衰患者維持量地高辛2個月以上時，停用地高辛不會引起病情惡化。經(jīng)血流動力學研究證實長期服用維持量地高辛治療慢性心衰有效。本實驗結果表明，附子水煎劑組降低阿霉素致心力衰竭大鼠血清TNF、NO水平及CHF心肌細胞損傷程度不顯著，提示附子單味附子不能直接加強心肌收縮