鴨禽流感疫苗免疫程序研究報告.docx

1、第53卷第21期2014年11月湖北農業(yè)科學HubeiAgriculturalSciences鴨禽流感疫苗免疫程序研究報告Hi楊峻，羅青平，艾地云，羅玲，王紅琳，張蓉蓉，溫國元，張騰飛，汪宏才，邵華斌(湖北省農科院畜牧獸醫(yī)研究所/動物胚胎工程及分子育種湖北省改點實驗室，武漢430064)播要：為了科學制定鴨的禽流感疫苗免疫程序，進行了以下三方面的試毆：不同品種維格母源抗體消長帶況測定。姑果表明，57日齡雛鴨AI-HI抗體可維持較高水平,15-17日齡下降至4.01og2以下。疫苗首免后抗體檢剝。結果表明，鴨首次免疫后2周可測出AI-HI擾體，4周時達到高峰；抗體水平持續(xù)4周后開始下降。肉鴨免疫

2、一次抗體水平差異大，不能完全預防禽流感的發(fā)生。肉種鴨及妥種曲免疫程序及抗體消長規(guī)律的測定。結果表明,7-14日齡初免，60日齡二次免疫和120日齡加強免疫(三次免疫)，種鴨的AI-HI抗體水平最高分別可達到91og2Jllog2,二次免疫后8個月其AI-HI平均抗體水平為5.6【og2,三次免疫后10個月其AI-HI平均抗體水平為7.6log2以上。關鍵詞：鴨；禽流感；滅活疫苗；免疫程序中圖分類號：S859.79；S858.32文獻標識碼：A文童編號：0439-8114(2014)21-5213-04DOLlO.l4088/ki.issn0439-8114.2014.21.042ImmuneP

3、rocedureofAvianinFluenzaVaccineforDuckYANGJun,LUOQing-ping,AlDi-yun,LUOLing,WANGHong-Un,ZHANGRoi-rong.WENGuo-yuan,ZHANGTeng-fei,WANGHong-cai,SHAOHua-bin(InstituteofAnima)andVeterinaryScience,HubeiAcademyofAgriculturalSciences/HubciKeyLaboratoryofAnimalEmbryoandMolecularBreeding,Wuhan430064,China)Abs

4、tract；Inordertoscientificallymaketheimmuneprocedureofavianinfluenzavaccineforduck,threetestsincludingthedetectionofthevarietyofmaternalantibodylevelsindifferentbreeds,theantibodydetectionafterfirstimmunization,andtherelationshipofimmuneprocedureandantibodylevelsvarietyweremade.Theresultsshowedthatth

5、eAI-HIantibodylevelsof1weekoldduckswererelativehigher,andthendroppedto4log2orevenlowerat15to17daysold.TTieAI-HIantibodyinduckswasdetectedat2weeksafterfirstimmunization,andantibodylevelreachedpeakatfourweeksafterfirstimmunization(4.81og2).Theantibodylevelwasstable4weeksandthenbegantodrop.Theantibodyl

6、evelsinmeatduckshadgreatdifferenceafterfirstimmunization.AIVwasnotpreventedcompletely.TheAI-HIantibodylevelofbreedingducksreachedto911log2whentheducksgotfirstimmunizationat8daysold,thesecondimmunizationat60daysold,andboosterimmunizationwereat120daysold.Theantibodylevelmaintainedat69log2after10months

7、.Keywords：duck；avianinfluenza；inactivedvaccine:immuneprocedure研究表明，水禽是禽流感病毒的天然宿主，禽流感病毒不僅可長期在其體內寄居，而且可通過其遷徙經消化道排毒污染水域而感染其他鳥類和哺乳動物。這可能是禽流感病毒長期適應水禽達到進化平衡狀態(tài)的結果。但自20世紀90年代中期以后,研究發(fā)現H5N1亞型禽流感病毒對水禽具有明顯的致病性，并可引起大批水禽發(fā)病死亡，這說明隨著自然生態(tài)的進化，禽流感病毒與水禽之間的生態(tài)平衡被打破，水禽也成了禽流感病毒的易感宿主s：。近年來周邊國家暴發(fā)的禽流感，給中國養(yǎng)收稿日期：2014-04-17捻金項目：湖

8、北省科技廳“十一五”重大攻關項目(2009BBB003)；農業(yè)部公益行業(yè)科研專項(201003012)；湖北省農業(yè)科技創(chuàng)新中心資助項目(2011-620-001-003)作者簡介：椅峻(1953-),男，湖北武漢人，研究員，主要從事禽病防研究工作，(電話電子信箱)junyang2013；通訊作者，邵華斌，研究員，(電子信箱)Shbl961°禽業(yè)構成了極大威脅，因此及時開展有關禽流感疫苗的研究成為當前預防和控制禽流感的必然選擇。有關禽流感疫苗免疫雞效果的研究報道較多，但對水禽系統(tǒng)免疫效果的報道較少。本研究針對鴨禽流感滅活疫苗免疫程序中最佳免疫時間及不同品種鴨

9、免疫效果進行了試驗，對預防和控制鴨禽流感的發(fā)生具有重要參考意義。1材料與方法1.1商品疫苗及檢測用抗原禽流感滅活疫苗（H5亞型）選擇國內批準的生產廠家疫苗；用于檢測AI-HI抗體的抗原、陽性血清、陰性血清購自中國農業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所。AI-HI抗體檢測方法按常規(guī)方法成進行。1.2試驗鴨雛鴨、青年鴨和成年產蛋鴨來自湖北省內蛋鴨場和肉鴨場，試驗前均未進行禽流感免疫。大部分試驗結合當地生產完成。1.3試驗設計1.3.1雛鴨母源抗體消長情況的測定分別對3批肉種鴨商品代和3批產蛋鴨商品代的雛鴨進行母源抗體測定，每批1日齡雛鴨80只，每2d采血1次，測定雛鴨母源抗體，直到AI-HlW31og2。1.

10、3.2疫苗首次免疫鴨抗體產生期試驗分別選擇3批肉種鴨商品代和3批產蛋鴨商品代的714日齡雛鴨進行試驗，每組免疫60只，首次免疫劑量：每只鴨頸背部皮下注射0.3mL；免疫后1、2、3、4、6、8、10周各采血一次，測定A1-HI抗體的消長情況，確定抗體最早產生時間。同時各組分別設30只條件相同的鴨不免疫禽流感疫苗作對照。1.3.3不同日齡維鴨首免效果觀察試驗選擇肉種鴨商品代和產蛋鴨商品代的雛鴨進行試驗，分別于3、5、7、9、14、19日齡進行免疫，每組免疫60只，各組在半開放鴨舍中隔離飼養(yǎng)，免疫劑量為0.3mL/只。免疫前檢測母源抗體水平，免疫后每周采血1次，測定AI-HI抗體的消長情況，觀察分

11、析不同品種鴨的最佳免疫日齡。1.3.4種鴨的免疫程序及抗體消長規(guī)律的測定1000只肉種鴨和1000只地方產蛋種鴨全部進行二次免疫（714日齡初免，60日齡二次免疫），在120日齡時各組均分為兩部分，其中500只進行第三次免疫（在二次免疫基礎t,120日齡加強免疫一次）。首免劑最為0.3mL/只，二次和三次免疫均為0.5mL/Ro免疫后14周每周檢測抗體1次，分析抗體上升規(guī)律；之后每2月采血1次，測定AI-HI抗體的持續(xù)期。試驗分別在肉鴨場和蛋鴨場進行。2結果與分析2.1雛鴨母源抗體消長情況的測定結果分別對3批肉種鴨商品代和3批產蛋鴨商品代的雛鴨進行母源抗體測定，結果（表1）表明，57日齡雛鴨A

12、I-HI母源抗體水平維持在較高水平，此后1周快速下降,15-17日齡母源抗體水平降至4.0log2以下。表1雛鴨母源抗體消長情況的測定5=5）不同n的兼鴨AI-HI母源抗體水平（log!）77出1357911131517192118.2(79)8.4(8-9)7.6(78)6.6(67)6.2(67)5.4(56)5.2(46)4.8(46)4.2(46)3.80-4)3.6(3-4)蛋鴨27.4(7-8)7.6(79)6.8(67)6.6(67)5.6(67)5.4(5-6)5.2(4%)4.4(45)3.8(34)3.8(34)3.4(34)35.2(56)5.4(56)5.2(5-6)5

13、.0(46)4.6(4-5)4.4(45)4.0(35)3.8(34)3.2(34)3.4(34)3.2(34)19.0(8-10)9.2(9-10)8.8(89)8.6(8-9)7.8(78)6.8(位7)6.4(67)5.6(56)4.2(45)3.2(34)3.0(34)肉鴨27.6(78)7.6(79)6.8(6-7)6.6(67)5.4(56)5.4(56)5.0(46)4.4(45)3.8(34)3.8(34)3.4(34)37.8(78)7.6(7-9)6.8(67)6.6(6-7)5.4(56)5.0(46)5.0(46)4.4(45)3.6(34)3.4(3-4)3.2(34

14、)2.2疫苗首次免疫鴨抗體產生期試驗結果由表2、表3可見，肉鴨和蛋鴨分別在7J4日齡免疫,2周后可檢測到AI-HI抗體,4周時抗體達到4.01og2以上，但抗體水平不一致，抗體平均幾何滴度達不到51og2；抗體水平持續(xù)4周之后開始下降，母源抗體對疫苗免疫效果影響不大。2.3不同日齡雛鴨首免效果觀察由表4、表5可見，鴨35日齡免疫時抗體上升慢，免疫效果差,AI-HI抗體水平為351og2。719日齡免疫時抗體水平在免疫后2周開始上升,46周達高峰。根據母源抗體情況，肉鴨79日齡首免較好，蛋鴨14-19日齡首免較好（非禽流感流行區(qū)）。3.4肉種鴨及產蛋種鴨免疫程序及抗體消長規(guī)律的測定由表6、表7可

15、見，二次免疫1周后鴨抗體水平開始上升，持續(xù)時間8個月（300日齡），二次免疫后8個月其AI-HI平均抗體水平為5.61og2,最高抗體水平為9.01og2；三次免疫2周后其抗體水平持續(xù)上表2肉鴨首次免疫抗體產生期測定（n=5）試驗批次鴨數首免免疫笊免疫前后鴨體內AI-H1抗體水平（Iog2）與分組只日齡ml/只01周2周3周4周6周8周10周免疫組6070.3W2W223.4(3-4)4.8(46)5.0(46)4.6(45)4.4(35)1對照狙307W2W2W2W2W2蚤2W2W2免疫組26070.37.6(78)6.2(6-7)42(3-5)3.4(35)4.6(4-6)5.2(4-6)

16、4.8(45)4.2(35)對照蛆3077.6(78)6.4(&7)4.4(4-5)3.4(34)2.8(24)W2W2W2免疫組3對照組6070.37.8(78)6.2(6-7)4.4(4-5)3.6(3-5)4.8(46)4.8(46)4.6(45)4.4(35)3077.8(7-8)6.8(67)4.6(45)3.4(3-4)2.8(24)2W2W2表3S費鴨首次免疫抗體產生期測定（n=5）試驗批次與分組鴨數首免免疫量免疫前后鴨體內AI-HI抗體水平（log2）只日齡ml?只01周2周3周4周6周8周10周免疫組160140.3W2W23.4(34)4.2(35)4.6(46)5

17、.0(46)5.2(5Y)4.8(46)1對照組3014W2W2W2W22W222免疫組2對照祖60140.33.8(34)3.4(3-4)3.4(34)4.0(3-5)4.4(45)4.8(46)5.0(46)4.6(45)30143.8(34)3.4(3Y)W2<2W2W2W2W2免疫組60140.33.2(34)3.2(34)3.4(34)4.4(3-5)4.8(46)5.0(46)5.2(46)4.8(46)對照組30143.2(34)3.2(34)W2W2W2W2W2W2表4不同日齡肉鴨首免效果觀察（n=5）試驗分蛆鴨數免疫皺ml/只免疫前后鴨體內AI-H1抗體水平（log2）

18、母源抗體1周2周3周4周6周8周10周3日齡600.37.6(79)5.4(56)3.6(34)4.0(35)4.4(35)4.4(45)4.2(45)4.0(35)5日齡600.36.8(6-7)5.4(56)3.4(34)4.0(35)4.4(35)4.4(35)4.2(4-5)4.2(35)7日齡600.36.4(67)4.4(45)4.4(35)4.6(46)5.2(46)4.8(45)4.2(45)4.4(3-5)9日齡600.35.4(56)3.6(34)4.4(45)4.8(46)5.2(46)5.2(4-6)4.8(45)4.4(45)14日齡600.34.4(45)3.2(3

19、4)4.4(35)4.8(46)5.2(46)5.2(4)4.8(45)4.4(45)19H齡600.33.4(34)3.2(34)4.4(4-5)4.8(46)5.2(46)5.2(46)4.8(45)4.4(45)衰5不同日齡蛋鴨首免效果觀察（n=5）試驗分蛆竺免疫量免疫前后精體內AI-H1抗體水平（Iog2）ml7只母源抗體1周2周3周4周6周8周10周3日齡600.38.2(8-9)6.4(67)4.6(45)4.2(35)4.4(35)4.4(4-5)4.2(45)4.0(35)5日齡600.37.6(78)5.4(56)4.2(34)4.4(3-5)4.8(45)4.4(45)4.

20、2(45)4.2(35)7日齡600.36.8(6-7)4.8(45)4.4(35)4.6(4-6)5.2(46)5.2(56)4.2(45)4.2(3-5)9日酸600.36.2(56)4.6(45)4.4(45)4.8(46)5.4(56)5.2(46)4.6(45)4.4(45)140齡600.34.8(46)3.2(3-4)4.4(3-5)4.8(46)5.2(46)5.2(46)4.8(45)4.4(45)19日齡600.33.8(34)3.2(34)4.4(45)4.8(4-6)5.2(46)5.2(46)4.8(45)4.4(45)升，持續(xù)時間10個月以上（420日齡），三次免疫

21、后10個月其AI-HI平均抗體水平為7.61og2以上，最高抗體水平為11.01og2。肉種鴨及產蛋種鴨分別在60日齡和120日齡進行二次和三次免疫效果基本一致。3小結與討論1）本研究表明，不同品種的雛鴨，母源抗體水平在57日齡維持在較高水平，此后1周快速下降。不同日齡雛鴨首免效果觀察結果表明，35日齡免疫時鴨抗體水平上升慢，免疫效果差,7-19B齡免疫時鴨抗體水平在2周時開始上升,46周達高峰。根據母源抗體情況，肉鴨79日齡首免較好，蛋鴨1419日齡首免較好（非禽流感流行區(qū)）。疫苗首次免疫鴨抗體產生期試驗結果表明，肉鴨和蛋鴨分別在7、14日齡免疫,2周后可檢測到AI-HI抗體,4周時其抗體水

22、平達到4.01og2以上，但抗體水平不一致，抗體平均幾何滴度達不到5.01og2；抗體水平持表6肉種鴨抗體消長規(guī)律的測定（n=5）試驗分組鴨數免疫日齡免疫后不同時間鴨體內體內AI-HI抗體（log2）01周2周3周4周2月4月6月8月10月二次免疫500604.2(45)4.6(46)5.4(56)6.0(57)6.6(6-8)7.0(69)6.4(58)6.0(57)5.6(56)5.0(46)三次免疫5001207.0(6-9)6.6(68)7.8(79)8.2(79)8.4(7-10)9.4(8-11)8.8(8-10)8.4(79)8.0(79)7.8(79)表7蛋種鴨抗體消長規(guī)律的測

23、定（n=5）試莪分組鴨數免疫免疫后不同時間時體內體內AI-HI抗體（log2）只日齡0周2周3周4周2月4月6月8月10月二次免疫三次免疫500604.2(45)4.4(46)5.2(56)6.2(5-7)6.6(68)7.2(69)6.4(58)5.8(5-7)5.6(56)5.0(46)5001207.2(6-9)6.8(68)7.6(79)8.0(79)8.6(7-10)9.2(8-11)8.8(8-10)8.6(7-9)8.2(7-9)7.6(79)續(xù)4周之后開始下降；母源抗體對疫苗免疫效果影響不大。而二次免疫后AI-HI抗體滴度明顯上升，且維持時間長。因此，在臨床生產實踐中必須對鴨進

24、行二次免疫，尤其是種用鴨最好在開產前23周根據情況進行三免,確保有效抗體的持續(xù)時間。2）關于鴨禽流感免疫有效抗體問題，根據姜北宇等血所做的H5亞型禽流感疫苗免疫后HI抗體與攻毒保護率的關系的研究結果，當免疫雞HIW23時，攻毒后全部發(fā)病死亡；HI=24時，攻毒保護率為77.4%；HI=25時，攻毒保護率為97.4%；HIN26時，攻毒保護率為100%。這與其他一些研究人員所得結果基本一致。由于條件的限制，本研究未做抗體水平與攻毒保護率關系的相關性試驗，國內也尚未見相關報道，但根據作者多年對水禽的臨床診斷經驗認為，以上的相關性試驗結果可用于評價禽流感疫苗免疫效果時參考。3）肉種鴨及產蛋種鴨免疫程

25、序及抗體消長規(guī)律的測定結果表明，二次免疫1周后鴨抗體水平開始上升，持續(xù)時間8個月（300日齡），二次免疫后8個月其A1-HI平均抗體水平為5.61og2,最高抗體水平為9.01og2；三次免疫2周后鴨抗體水平持續(xù)上升，持續(xù)時間10個月以上（420日齡），三次免疫后10個月其AI-HI平均抗體水平為7.61og2以上，最高抗體水平為11.0k）g2。因此商品蛋鴨推薦二次免疫程序，種鴨推薦三次免疫程序，商品肉鴨推薦79日齡首免。4）堅持定期檢測鴨群AI-H1抗體，是確保鴨禽流感疫苗免疫成功的關鍵措施，不同年齡、不同品種、不同飼養(yǎng)條件鴨群的禽流感疫苗免疫效果均會有一定的差異，應根據不同情況，制定適合

26、本場的禽流感免疫程序，確保養(yǎng)鴨業(yè)健康發(fā)展。參考文獻：1美】Bw卡爾尼克禽病學M.第十版.高福.劉文軍譯.北京：中國農業(yè)出版社，1999.743-746.2 劉秀梵.家養(yǎng)水愈A型流感病毒和新城疫病毒的感染和臨床疾病A.第15屆世界禽病大會性中國畜牧冉醫(yī)學會2007年學術年會論文集C.北京：中國畜牧善醫(yī)學會,2007.87-95.3 于睫震.中國的禽流感A.第15屆世界禽病大會實中國畜牧時醫(yī)學會2007年學術年會論文集C.北京：中國畜牧獸醫(yī)學會，2007.134-137.4 甘孟侯.全球禽流感的流行形勢J.中國預防善醫(yī)學報.2004,26（6）:468-470.5 中國冉藥典委員會.中華人民共和國魯藥典（2005年版）M.北京：中國農業(yè)出版It,2006.6 姜北宇，劉月煥，?？〗?等.H5亞型禽流感疫苗對特禽及水禽的免疫效果觀察:J.中國獸藥雜志,2005,39（9）：23-25.（責任編輯曾德芳）（上接第5212頁）(8):10