淀粉的國(guó)標(biāo)測(cè)定方法

1、淀粉的國(guó)標(biāo)測(cè)定方法測(cè)定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的測(cè)定方法(酶-直接法)一、酶水解法1 .原理樣品經(jīng)除去脂肪及可溶性糖類(lèi)后，其中淀粉用淀粉酶水解成雙糖，再用鹽酸將雙糖水解成單糖，最后按還原糖測(cè)定，并折算成淀粉。2 .適用范圍GB5009.9-85,適用于所有含淀粉的食物。3 .儀器(1)回流冷凝器(2)水浴鍋4 .試劑除特殊說(shuō)明外，實(shí)驗(yàn)用水為蒸儲(chǔ)水，試劑為分析純。(1)乙醛(3)碘溶液：稱(chēng)取3.6g碘化鉀溶于20ml水中，加入1.3g碘，溶解后加水稀釋至100ml。(4)85%乙醇。(5)其余試劑同蔗糖測(cè)定方法5 .操作方法5.1 樣品處理稱(chēng)取25g樣品，置于放

2、有折疊濾紙的漏斗內(nèi)，先用50ml乙醛分5次洗除脂肪(注：如果脂肪含量少，此步驟可免)，再用約100ml85%乙醇洗去可溶性糖類(lèi)(注：此步驟目的是去除可溶性糖)，將殘留物移入250ml燒杯內(nèi)，并用50ml水洗濾紙及漏斗，洗液并入燒杯內(nèi)，將燒杯置沸水浴上加熱15min,使淀粉糊化，放冷至60c以下，加20ml淀粉酶溶液，再5560c保溫1h,并時(shí)時(shí)攪拌(注：溫度過(guò)高，淀粉酶的活性破壞)。然后取1滴此液加1滴碘溶液，應(yīng)不現(xiàn)蘭色，若顯蘭色，再加熱糊化并加20ml淀粉酶溶液，繼續(xù)保溫，直至加碘不顯蘭色為止。加熱至沸，冷后移入250ml容量瓶中，并加水至刻度，混勻，過(guò)濾。(注：此時(shí)淀粉已水解成雙糖，過(guò)濾可

3、去除殘?jiān)屠w維素)棄去初濾液，取50ml濾液，置于250ml錐形瓶中，加5ml6mol/L鹽酸，裝上回流冷凝器,在沸水浴中回流1h,冷后加2滴甲基紅指示劑，用5mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性，溶液轉(zhuǎn)入100ml容量瓶中，洗滌錐形瓶，洗液并入100ml容量瓶中，加水至刻度，混勻備用。(淀粉在沸水浴條件下糊化是淀粉水解的第一步反應(yīng)，然后在淀粉酶的作用下，分解成短鏈淀粉、糊精、麥芽糖等低聚合的糖，所以在淀粉酶解后需用酸進(jìn)一步水解得到葡萄糖。)5.2 測(cè)定按還原糖的測(cè)定方法操作。同時(shí)量取50ml水及與樣品處理時(shí)相同量的淀粉酶溶液，按同一方法做試劑空白試驗(yàn)。6 .計(jì)算(A1-A2)X1 =X0.9m1

4、xV1V3x V2100X100X1000(1)式中：X1-樣品中淀粉的含量，。為A1-測(cè)定用樣品中還原糖的含量。MgA2-試劑空白中還原糖的含量，mg0.9-還原糖（以葡萄糖計(jì)）換算成淀粉的換算系數(shù)；m1-稱(chēng)取樣品質(zhì)量，g；V 1-水解用樣品溶液體積，ml；V 2-樣品定容總體積，ml；V 3-測(cè)定用樣品處理液的體積，ml。二、酸水解法1. 原理樣品經(jīng)除去脂肪及可溶性糖類(lèi)后，其中淀粉用酸水解成具有還原性的單糖，然后按還原糖測(cè)定，折算成淀粉。2. 適用范圍本法適用于含淀粉的食物3. 儀器（ 1） 水浴鍋。（ 2） 高速組織搗碎機(jī)：1200rpm。（ 3） 皂化裝置并附250ml錐形瓶。4. 試

5、劑除特殊說(shuō)明外，實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水，試劑為分析純。（ 1） 乙醚。（ 2） 85%乙醇溶液。（ 3） 6mol/L鹽酸溶液。（ 4） 10mol/L氫氧化鈉溶液。（ 5） 2.5mol/L氫氧化鈉溶液。（ 6） 甲基紅指示液：0.2%乙醇溶液。精密pH試紙。8） 8）20%乙酸鉛溶液，9） 10%硫酸鈉溶液。(10)其余試劑同還原糖的測(cè)定。5 .操作方法5.1 樣品處理洗液合并于容量瓶中，加水稀釋至刻度。過(guò)濾，棄去初濾液20ml,濾液供測(cè)定用。5.2 測(cè)定按還原糖的測(cè)定步驟操作。6 .計(jì)算(A3-A4)X0.9X2=義100(1)mx50義V2x1000250100式中：X2-樣品中淀粉的含量，

6、%A3-測(cè)定用樣品中還原糖的含量。mg;A4-試劑空白中還原糖的含量,mgm2-稱(chēng)取樣品質(zhì)量，g;V2-測(cè)定用樣品處理液的體積，ml。500-樣品液總體積，ml;0.9-還原糖(以葡萄糖計(jì))換算成淀粉的換算系數(shù)；(注：酸水解能分解部分半纖維素，形成具有還原力的單糖，如木糖、阿拉伯糖等，可影響分析結(jié)果。為了比較正確地測(cè)定食物中淀粉含量，建議采用淀粉酶糖化淀粉，除去不可溶性的殘?jiān)?，再用酸水解使之成為葡萄糖，然后測(cè)定其含量，最后換算成淀粉。三、可消化淀粉和抗性淀粉的測(cè)定方法(酶-直接法)1. 原理樣品先在37c下經(jīng)a-淀粉酶水解，使可消化淀粉轉(zhuǎn)化成葡萄糖，用80叱醇提取，未水解的抗性淀粉部分經(jīng)沸水

7、浴凝膠化后，在淀粉葡萄糖甘酶轉(zhuǎn)化成葡萄糖，用葡萄糖氧化酶法分別測(cè)定葡萄糖含量，再換算成可消化淀粉和抗性淀粉含量。2. 適用范圍參考Englyst和Champ的方法。適用于所有含淀粉食物的測(cè)定。3. 儀器（ 1） 恒溫水浴箱（ 2） 溫箱（ 3） 分光光度計(jì)4. 試劑除特殊說(shuō)明外，實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水，試劑為分析純。 1） 0.1mol/L乙酸緩沖液（pH5.0）:稱(chēng)取14.28g乙酸鈉（CH3COONJ3H2O溶于水中，加入2.7ml冰乙酸，并調(diào)節(jié)pH5.0，用水定容至1L。（2）酶溶液：分別稱(chēng)取4ga-淀粉酶溶液（a-amylase,Sigma公司）、1g淀粉葡萄糖普酶溶液（amylogluco

8、sidase,Sigma公司）和0.3g轉(zhuǎn)換酶（invertase,Sigma公司）溶液于研缽中，用0.1mol/L乙酸緩沖液研磨制成勻漿，并調(diào)節(jié)體積為100ml。3000rpm離心5min，取上清液。 3） 3）淀粉葡萄糖苷酶溶液：稱(chēng)取2g淀粉葡萄糖苷酶（amyloglucosidase,Sigma公司），加100ml0.1mol/L乙酸緩沖液研磨成勻漿。3000rpm離心5min，取上清液。 4） 80%乙醇：800ml乙醇加水至1L。 5） 5）4mol/L氫氧化鉀溶液：稱(chēng)取224g氫氧化鉀，用水溶解并加至1L。 6） 2mol/L乙酸溶液：量取冰乙酸118ml,加水至1L,混勻。 7）

9、 7）其它試劑同葡萄糖測(cè)定方法。5. 操作步驟5.1 樣品處理：測(cè)定RS1時(shí)，直接稱(chēng)取樣品0.2g1g;測(cè)定RS2時(shí)，選用生的樣品，先研磨打碎后再稱(chēng)取樣品0.2g1g,。測(cè)定RS3時(shí)，則先將樣品加水煮沸至少15min,使之凝膠化，然后取出放入4c冰箱冷藏過(guò)夜，再混勻后稱(chēng)取樣品0.2g1g（需折合水分）。加入10ml酶溶液，輕輕混勻。37c溫箱或水浴中酶解16h。加入40ml無(wú)水乙醇，使乙醇含量終濃度為80%充分搖勻。靜置30min,3000rpm離心15min,上清液轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中。用80%乙醇反復(fù)洗滌沉淀23次。合并上清液并用乙酸緩沖液定容，供測(cè)定可消化淀粉用。5.2 水解抗性淀粉

10、：將經(jīng)反復(fù)洗滌的沉淀置于100干燥，然后用15ml水將沉淀轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，沸水浴中加熱30min。冷卻至室溫。加入1倍體積的4mol/L氫氧化鉀溶液，使氫氧化鉀終濃度為2mol/L，室溫下混合30min。（注：在樣品凝膠化后，2mol/L氫氧化鉀的作用是進(jìn)一步破壞淀粉結(jié)構(gòu)，如果氫氧化鉀的濃度過(guò)高或過(guò)低，不利于結(jié)構(gòu)破壞，操作中需注意。）加入約30ml2mol/L乙酸溶液，調(diào)節(jié)pH為5.0,再加入淀粉葡萄糖普酶溶液5ml,65C70c水浴90min。冷卻后將水解液轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，用乙酸緩沖液定容至刻度。過(guò)濾。5.3 測(cè)定：吸取0.5ml上清液（5.1）和抗性淀粉水解液（5.2），按照葡萄

11、糖氧化酶法分別測(cè)定葡萄糖含量（從測(cè)定步驟開(kāi)始)。同時(shí)做葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。6. 計(jì)算根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得出上清液中和抗性淀粉水解液中葡萄糖濃度，再根據(jù)稀釋定容體積和稱(chēng)樣量分別計(jì)算出可消化淀粉和抗性淀粉含量。X=(As- Ab) X V F0.5 x mx 0.1x 0.9式中：X-樣品中可消化淀粉/抗性淀粉含量，g/100g；As-由標(biāo)準(zhǔn)回歸方程求出的樣品測(cè)定管中葡萄糖含量，mg;Ab-由標(biāo)準(zhǔn)回歸方程求出的樣品空白管中葡萄糖含量，mgV-樣品定容體積，ml;F-稀釋倍數(shù)0.5-測(cè)定時(shí)吸取樣品提取液的體積，ml;m-樣品質(zhì)量，g；0.1-將mg/g轉(zhuǎn)換成g/100g的系數(shù)。7. 注意事項(xiàng)7.1 Eglyst根據(jù)抗性淀粉的分類(lèi)，對(duì)樣品處理采用不同的處理方法。讀者可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇相應(yīng)的方法。7.2 Eglyst測(cè)定抗性淀粉時(shí)，模擬胃腸道內(nèi)環(huán)境，根據(jù)“-淀粉酶水解時(shí)間長(zhǎng)短，將20min時(shí)已水解的淀粉稱(chēng)為快消化淀粉，20min120min水解的淀粉稱(chēng)為慢消化淀粉，120min后仍沒(méi)有水解的淀粉稱(chēng)為抗性淀粉。有的學(xué)者指出在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，腸道對(duì)淀粉的消化能力可能超過(guò)6h,認(rèn)為120min的水解時(shí)