常用免疫學檢驗技術(shù)的基本原理

1、WORD格式常用免疫學檢驗技術(shù)的根本原理免疫學檢測即是根據(jù)抗原、抗體反響的原理，利用的抗原檢測未知的抗體或利用的抗體檢測未知的抗原。由于外源性和內(nèi)源性抗原均可通過不同的抗原遞呈途徑誘導生物機體的免疫應答，在生物體內(nèi)產(chǎn)生特異性和非特異性T細胞的克隆擴增，并分泌特異性的免疫球蛋白抗體。由于抗體抗原的結(jié)合具有特異性和專一性的特點，這種檢測可以定性、定位和定量地檢測某一特異的蛋白抗原或抗體。免疫學檢測技術(shù)的用途非常廣泛，它們可用于各種疾病的診斷、療效評價及發(fā)病機制的研究。最初的免疫檢測方法是將抗原或抗體的一方或雙方在某種介質(zhì)中進展擴散，通過觀察抗原抗體相遇時產(chǎn)生的沉淀反響，檢測抗原或抗體，最終到達診斷

2、的目的。這種擴散可以是蛋白的自然擴散，例如環(huán)狀沉淀試驗、單向免疫擴散試驗、雙向免疫擴散實驗。單向免疫擴散試驗就是在凝膠中混入抗體，制成含有抗體的凝膠板，而將抗原參加凝膠板預先打好的小孔內(nèi)，讓抗原從小孔向四周的凝膠自然擴散，當一定濃度的抗原和凝膠中的抗體相遇時便能形成免疫復合物，出現(xiàn)以小孔為中心的圓形沉淀圈，沉淀圈的直徑與參加的抗原濃度成正比。利用蛋白在不同酸堿度下帶不同電荷的特性，可以利用人為的電場將抗原、抗體擴散，例如免疫電泳試驗和雙向免疫電泳。免疫電泳首先將抗原參加凝膠中電泳，將抗原各成分依次分散開。然后沿電泳方向平行挖一直線形槽，于槽內(nèi)加入含有針對各種抗原的混合抗體，讓各抗原成分與相應抗

3、體進展自然擴散，形成專業(yè)資料整理WORD格式沉淀線。然后利用標準的抗原抗體沉淀線進展抗原蛋白或抗體的鑒別。上述的方法都是利用肉眼觀察抗原抗體反響產(chǎn)生的沉淀，因此靈敏度有很大的局限。比濁法引入沉淀檢測產(chǎn)生的免疫比濁法就是利用濁度計測量液體中抗原抗體反響產(chǎn)生的濁度，根據(jù)標準曲線來計算抗原或抗體的含量。該方法不但大大提高了檢測的靈敏度，且可對抗原、抗體進展定量的檢測。免疫印跡法那么首先通過電泳別離標準的抗原，然后將電泳別離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上，浸于待測血清中。如果血清中含有與一種或幾種抗原相對應的抗體的話，那么在該抗原印跡部位形成免疫復合物沉淀。在洗去未結(jié)合的抗原和抗體后，在膜上加標記的抗人免

4、疫球蛋白的抗體，此抗體可以和病毒抗原與人抗體形成的免疫復合物發(fā)生反響，最后參加顯色底物可以是普通顯色劑，化學發(fā)光劑或放射性同位素等進展顯色。由于利用了第二種抗體進展了信號放大，并且可以利用高靈敏的顯色方式，靈敏度也得到了很大的提高。目前該方法已經(jīng)利用凝集反響檢測抗原抗體反響也是較傳統(tǒng)的手段之一。利用帶有抗原的乳膠顆粒等不溶性的顆?？乖c相應抗體結(jié)合形成凝集團塊，通過凝集現(xiàn)象，就可以到達檢測的目的。無論是直接凝集法還是間接凝集法都可對抗原或抗體進展檢測。還可以利用二抗對信號進展放大，從而提高檢測的靈敏度。利用補體介導的反響例如溶血反響，檢測抗原抗體反響也是過去常用的方法?？贵w與細胞外表抗原相遇，

5、形成紅細胞- 抗體復合物即可使參加反響中的補體活化，導致細胞的溶解，此方法可用于紅細胞的各種抗原或相應抗體的專業(yè)資料整理WORD格式檢測，此外利用補體反響的競爭效應，也可對抗原抗體反響進展定量的檢測利用帶有標記熒光素、同位素、膠體金或酶的抗體抗原檢測抗原抗體反響是目前應用最廣泛、最靈敏的方法，使用放射性同位素標記法可使檢測的靈敏度到達pg 級。由于帶標記的抗體能準確而可靠地反映出抗原的位置和數(shù)量，且利用二抗可對信號進展放大，因此該方法可用于抗原定性、定量或定位檢測。以下是幾種常用的免疫學技術(shù)：1免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)是利用熒光素標記的抗體或抗原檢測組織、細胞或血清中的相應抗原或抗體的方法。由

6、于熒光抗體具有平安、靈敏的特點，因此已廣泛應用在免疫熒光檢測和流式細胞計數(shù)領(lǐng)域。根據(jù)熒光素標記的方式不同，可分為直標熒光抗體和間標熒光抗體。間標熒光抗體中一抗并不直接連接熒光素，而是先將一抗結(jié)合到蛋白，然后帶有熒光素的二抗再結(jié)合至一抗。通過二抗的結(jié)合，能將信號進展放大，因此能在一定程度上提高檢測的靈敏度，但是隨之帶來的高背景也降低了檢測的特異性。近年來，隨著熒光素和熒光檢測技術(shù)的不斷進步，熒光檢測的靈敏度已經(jīng)接近同位素檢測的水平，直接標記的熒光抗體逐漸取代間接標記抗體。這些標記了熒光素的抗體直接結(jié)合至抗原，大大提高了檢測的特異性，使檢測的結(jié)果更加準確可靠。熒光檢測技術(shù)的開展，使得免疫熒光技術(shù)在

7、傳染病診斷上有廣泛的用途，如在細菌、病毒、螺旋體感染的疾病，檢查IgM抗體，做為近期接觸抗原的標志。利用單克隆熒光直接標記抗體鑒定淋巴細胞的亞類。通過流式細胞儀，針對細胞外表不同抗原，可以同時使用多種不同的熒光抗體，對同一細胞進展多標記染色。2放射免疫檢測專業(yè)資料整理WORD格式放射免疫檢測技術(shù)是目前靈敏度最高的檢測技術(shù)，利用放射性同素標記抗原或抗體，與相應抗體或抗原結(jié)合后，通過測定抗原抗體結(jié)合物的放射性檢測結(jié)果。放射性同位素具有pg 級的靈敏度，且利用反復曝光的方法可對痕量物質(zhì)進展定量檢測。但放射性同位素對人體的損傷也限制了該方法的使用。733酶聯(lián)免疫吸附試驗 ELISA 酶聯(lián)免疫檢測是目前

8、應用最廣泛的免疫檢測方法。該方法是將二抗標記上酶，抗原抗體反響的特異性與酶催化底物的作用結(jié)合起來，根據(jù)酶作用底物后的顯色顏色變化來判斷試驗結(jié)果，其敏感度可達ng 水平。常見用于標記的酶有辣根過氧化物酶 (HRP) 、堿性磷酸酶 AP 等。由于酶聯(lián)免疫法無需特殊的儀器，檢測簡單，因此被廣泛應用于疾病檢測。常用的方法有間接法、夾心法以及BAS ELISA 。間接法是先將待測的蛋白抱被在孔板內(nèi)，然后依次參加一抗、標記了酶的二抗和底物顯色，通過儀器例如酶標儀定量檢測抗原。這種方法操作簡單但由于高背景而特異性較差。目前已逐漸被夾心法取代。夾心法利用二種一抗對目標抗原進展捕獲和固定，在確保靈敏度的同時大大提高了反響的特異性。近年來，抗原的定量檢測技術(shù)也不斷推陳出新。近年來，在夾心法 ELISA 的根底上，開發(fā)了多抗原檢測試劑盒，能同時檢測微量液相樣本中多個抗原含量。這項技術(shù)的應用大大縮短了診斷的時間，提高診斷的可靠性和及時