ELISA檢測方法參考模板

1、ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定，enzyme linked immunosorbent assay）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法?；驹恚菏箍乖蚩贵w結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的

2、底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺有無定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可極大地放大反應(yīng)效果，從而使測定方法達(dá)到很高的敏感度。雙抗夾心法夾心法常用于檢測大分子抗原，一般的操作步驟為:將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體；加入待測檢體，檢體中若含有待測的抗原，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)；洗去多余待測檢體，加入另一種對(duì)抗原專一的一次抗體，與待測抗原進(jìn)行鍵結(jié)；洗去多余未鍵結(jié)一次抗體，加入帶有酶的二次抗體，與一次抗體鍵結(jié)；洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果。間接法間接法常

3、用于檢測抗體，一般的操作步驟為：1 / 3將已知的抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余的抗原。加入待測檢體，檢體中若含有待測的一次抗體，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)。洗去多余待測檢體，加入帶有酶的二次抗體，與待測的一次抗體鍵結(jié)。洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酶底物使酶呈色，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評(píng)估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗體的含量。競爭法競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機(jī)制，一般用于檢測小分子抗原，其操作步驟為：將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體；加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)；加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)，由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié)，即所謂競爭法之由來。洗去檢體與帶有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，當(dāng)檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少，顯色也就越淺。注：當(dāng)需要偵