藥物分析維生素類藥物的分析

1、精選課件第九章維生素類藥物的分析第九章維生素類藥物的分析The Analysis of Vitamines概概 述述 維生素是維持人體正常生理機能所必需的生物維生素是維持人體正常生理機能所必需的生物活性物質?；钚晕镔|。 如果人體缺少某種維生素，就會引起維生素缺如果人體缺少某種維生素，就會引起維生素缺乏癥，而影響人體的正常生理機能。乏癥，而影響人體的正常生理機能。 例如例如: VA 缺乏缺乏夜盲癥夜盲癥 VB1缺乏缺乏腳氣病腳氣病脂溶性：脂溶性： VA、VD、VE、VK等等B族（族（VB1、VB2等）、等）、VC 、煙酸、煙酸、 葉酸、泛酸等葉酸、泛酸等按溶解性分類按溶解性分類精選課件9.19.

2、1 維生素維生素A的分析的分析一、結構與性質一、結構與性質VA含有共軛多烯醇側鏈的環(huán)已稀含有共軛多烯醇側鏈的環(huán)已稀(有多種異構體有多種異構體)CH2OR654321987654321R=H VA醇醇 VA1R= COCH3 VA醋酸酯醋酸酯R= COC15H31 VA棕櫚酸酯棕櫚酸酯VA為油狀物為油狀物,存在于魚肝臟中存在于魚肝臟中,稱魚肝油稱魚肝油,不溶于水不溶于水. 有人工合成的有人工合成的. 精選課件國際單位國際單位IU=0.344微克維生素醋酸酯；微克維生素醋酸酯；IU0.300微克維生素醇微克維生素醇換算：換算：1g維生素醋酸酯相當于：維生素醋酸酯相當于：61 1029070000.

3、344/gIUg IU1g維生素醇相當于：維生素醇相當于：61 1033300000.300/gIUg IU精選課件CH2OHCH2OR654321987654321CH2VA1:VA2:(去氫去氫VA)VA3:(去水去水VA)精選課件二、鑒別試驗二、鑒別試驗1、三氯化銻反應、三氯化銻反應 VA在飽和無水三氯化銻的無醇三氯甲烷溶在飽和無水三氯化銻的無醇三氯甲烷溶液中顯藍色，漸變成紫紅色。（液中顯藍色，漸變成紫紅色。（P245）注意注意:在水中三氯化銻水解在水中三氯化銻水解,必須在絕對無水中進行必須在絕對無水中進行!2、紫外吸收光譜、紫外吸收光譜 VA的無水乙醇溶液在的無水乙醇溶液在326nm有

4、最大吸收。有最大吸收。VA(5個共軛雙鍵個共軛雙鍵)在鹽酸中加熱在鹽酸中加熱,生成生成6個共軛雙鍵的個共軛雙鍵的去水去水VA VA在在326nm有一個吸收峰有一個吸收峰 去水去水VA在在350-390nm有三個吸收峰（有三個吸收峰（P247）精選課件3、TLC： 確認醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯，確認醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯，例：例：VA和其標準品用環(huán)己烷溶解和其標準品用環(huán)己烷溶解 展開劑：環(huán)己烷展開劑：環(huán)己烷乙醚（乙醚（80：20） 板：硅膠板：硅膠G 顯色：磷鉬酸為顯色劑顯色：磷鉬酸為顯色劑 Rf： VA 醇醇 0. VA 醋酸酯醋酸酯 0.4 VA棕櫚酸酯棕櫚酸酯 0.7精選課件三含量測

5、定三含量測定維生素中含有稀釋用油和其它雜質，所測得的維生素中含有稀釋用油和其它雜質，所測得的吸光度不是維生素獨有的吸收對測定有影響。吸光度不是維生素獨有的吸收對測定有影響。即在三個波長處測得吸光度，進行校正后再計算。即在三個波長處測得吸光度，進行校正后再計算。稱為三點校正法稱為三點校正法原理：吸光度是維生素原理：吸光度是維生素A和雜質吸收之和，測得和雜質吸收之和，測得A值需校正。（最大吸收為值需校正。（最大吸收為328nm)紫外分光光度法三點校正法紫外分光光度法三點校正法精選課件測定測定波長波長吸光吸光度度吸光度比值吸光度比值吸光度比吸光度比值差值差計算計算值值規(guī)定規(guī)定值值300 0.555

6、316 0.907 (326) 328 1.000 (329) 340 0.811 360 0.299 精選課件方法方法:(1)分別測分別測300、316、328、340、360nm吸光度，吸光度，求出各波長吸光度與求出各波長吸光度與328nm吸光度比值，吸光度比值，各比值與各比值與P249表中數(shù)據(jù)對比；表中數(shù)據(jù)對比；(2)若比值不超過若比值不超過0.02可直接用測得可直接用測得A值；值；(3)若比值超出若比值超出0.02則則A需校正：需校正： A（校正）（校正）=3.52(2A328-A316-A340)(4)計算：計算：1%1100cmAECLA:吸光度吸光度;C:濃度濃度(g/mL);L

7、:溶液厚度溶液厚度(cm);精選課件求效價：每求效價：每g供試呂中所含維生素供試呂中所含維生素A的國際單位的國際單位1%1/1900cmIU gE求百分含量：求百分含量：1900%100%100A D WWL標示量標示量A：吸光度（校正后的吸光度）：吸光度（校正后的吸光度）D：稀釋倍數(shù)；：稀釋倍數(shù)；1900：以環(huán)已烷為溶劑時的換算因子；：以環(huán)已烷為溶劑時的換算因子；L：比色池厚度；：比色池厚度；W：取樣量；：取樣量；精選課件9.29.2維生素維生素B1的分析的分析一、化學結構與性質一、化學結構與性質維生素維生素B1:氨基嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過亞甲基連接成的氨基嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過亞甲基連接成的季銨類

8、化合物季銨類化合物. 白色結晶白色結晶,溶于水溶于水,顯酸性顯酸性.學名學名: 氯化氯化4-甲基甲基-3-（2-甲基甲基-4-氨基氨基-5-嘧啶基）嘧啶基）甲基甲基-5-（2-羥乙基）噻唑的鹽酸鹽羥乙基）噻唑的鹽酸鹽 俗名俗名:鹽酸硫胺鹽酸硫胺精選課件二二. 鑒別試驗鑒別試驗1. 硫色素熒光反應：硫色素熒光反應： 維生素維生素B1在堿性溶液中，與鐵氰化鉀氧化成硫色在堿性溶液中，與鐵氰化鉀氧化成硫色素，在正丁醇中顯藍色熒光素，在正丁醇中顯藍色熒光VB1專屬反應，用于鑒別和含量測定。專屬反應，用于鑒別和含量測定。精選課件 2、沉淀反應、沉淀反應： 碘化汞鉀碘化汞鉀-淡黃色沉淀淡黃色沉淀 碘碘-紅色

9、沉淀紅色沉淀VB1 硅鎢酸硅鎢酸-白色沉淀白色沉淀 苦味酸苦味酸-扇形白色結晶扇形白色結晶 精選課件三三. 含量測定含量測定1、非水溶液滴定法、非水溶液滴定法：（：（Ch.P收錄）收錄） VB1分子中含有已成鹽的伯胺和季銨基團，在非分子中含有已成鹽的伯胺和季銨基團，在非水溶液中，在醋酸汞存在下，均可被高氯酸滴定。水溶液中，在醋酸汞存在下，均可被高氯酸滴定。溶劑：冰醋酸溶劑：冰醋酸 / 醋酸汞醋酸汞 指示劑：喹哪定紅指示劑：喹哪定紅- 亞甲藍混合指示液亞甲藍混合指示液 滴定劑：高氯酸（滴定劑：高氯酸（0.1mol/L) 終點：天藍色終點：天藍色 摩爾比：摩爾比：VB1：高氯酸：高氯酸=1：2 V

10、B1摩爾質量摩爾質量=337.27 滴定度滴定度T=0.1(1/2) 337.27=16.86mg/ml精選課件2、紫外、紫外UV（中國藥典）（中國藥典）VB1片：方法與片劑含量測定相同片：方法與片劑含量測定相同(246nm)VB1注射液：與液劑相同。（注射液：與液劑相同。（246nm)1%1100%100cmA D WEW標示量1%1%100%100cmA DEV標示量標示量精選課件9.39.3 維生素維生素C的分析的分析一、化學結構一、化學結構 OCOHHCH2OHOOHOH123456*1、 具有內酯結構。具有內酯結構。 堿性下可水解。堿性下可水解。2、 具有烯二醇基。具有烯二醇基。 還

11、原性，能夠被氧化成去氫還原性，能夠被氧化成去氫抗壞血酸?？箟难?。3、結構與糖類相似，具有糖性質。結構與糖類相似，具有糖性質。 溶于水，酸性，旋光性。溶于水，酸性，旋光性。精選課件OO HOH OHCC H2O HHO HOO HO HCHOO HC H2O HHOO HOH OHCC H2O HHH OOO HO HCHOC H2O HH OHD(-)-異抗壞血酸L(+)-異抗壞血酸L(+)-抗壞血酸D(-)-抗壞血酸4、具有、具有4種光學異構體。其中生理活性最強的是種光學異構體。其中生理活性最強的是L（+）-抗壞血酸抗壞血酸精選課件 二、鑒別試驗二、鑒別試驗 1、硝酸銀反應（中國藥典）、硝

12、酸銀反應（中國藥典） 烯二醇基具有還原性，可被硝酸銀氧化成去烯二醇基具有還原性，可被硝酸銀氧化成去氫抗血酸，同時生成黑色的銀。氫抗血酸，同時生成黑色的銀。OHOH OOO（黑色）AgAgNOVC32、與、與2，6-二氯靛酚（染料）反應二氯靛酚（染料）反應 VC被還原為無色的酚亞胺被還原為無色的酚亞胺精選課件3. 糖的性質糖的性質 VC的結構很象糖結構，具有糖的性質的結構很象糖結構，具有糖的性質VC + 三氯化醋酸或鹽酸三氯化醋酸或鹽酸-水解水解-脫羧脫羧-戊糖戊糖-失水失水-糠醛糠醛-（加吡咯，加熱）（加吡咯，加熱）-藍色藍色4、紫外分光光度法（英國藥典）、紫外分光光度法（英國藥典）VC在鹽酸

13、溶液中，在鹽酸溶液中，243nm最大吸收。最大吸收。精選課件OCOHHCH2OHOOHOHHI2OC OHHCH2OHOOOHI2三三含量測定含量測定 1. 碘量法（碘量法（Ch.P收錄）收錄）VC在醋酸條件下，被碘定量氧化。在醋酸條件下，被碘定量氧化。 加入淀粉指示劑，藍色不褪為碘過量（加入淀粉指示劑，藍色不褪為碘過量（30S內）。內）。由消耗碘量計算含量。由消耗碘量計算含量。精選課件 操作：（操作：（P265） 樣品 新沸放冷的水，稀HAc 淀粉 0.1mol/L 碘 終點顏色：無色終點顏色：無色藍色藍色 1ml 0.1mol/L碘液，碘液，1ml 8.806mg C6H8O6加入新沸放冷

14、的水為了減少水中溶解氧的影響。加入新沸放冷的水為了減少水中溶解氧的影響。酸性：使酸性：使VC在空氣中氧化速度減慢。在空氣中氧化速度減慢。VC注射液中常加有亞硫酸鹽如注射液中常加有亞硫酸鹽如NaHSO3作為抗氧劑作為抗氧劑.精選課件OCOHHCH2OHOOHOHO HC lC lNO HOC OHHCH2OHOOOO HC lC lN HO H終點的顏色是溶液由無色變?yōu)榧t色。終點的顏色是溶液由無色變?yōu)榧t色。氧化型（紅色）氧化型（紅色）還原型（無色）還原型（無色）+2、 2,6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法 酸性下直接用酸性下直接用2,6-二氯靛酚滴定，用滴定劑二氯靛酚滴定，用滴定劑自身的顏色變化

15、指示終點，不需要另外的指示劑。自身的顏色變化指示終點，不需要另外的指示劑。精選課件3、高效液相色譜法、高效液相色譜法 HPLC P276 精選課件9.4 9.4 維生素維生素D D VD VD是一類抗佝僂病維生素的總稱是一類抗佝僂病維生素的總稱, ,有片劑有片劑, ,注射劑注射劑, ,膠囊等膠囊等. .一、結構（一、結構（P268P268） 開環(huán)麥角甾烯醇，又稱麥角骨化酸。開環(huán)麥角甾烯醇，又稱麥角骨化酸。VD2VD2，VD3VD3 無色針狀結晶，旋光性，不溶于水。無色針狀結晶，旋光性，不溶于水。精選課件二、鑒別試驗二、鑒別試驗1、顯色反應、顯色反應 2、維生素、維生素D2和和D3的區(qū)分的區(qū)分精

16、選課件三、含量測定三、含量測定 高效液相色譜法，藥典收錄。高效液相色譜法，藥典收錄。精選課件OCH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3H3COCH3CO1458名稱：消旋名稱：消旋-生育酚醋酸酯（生育酚醋酸酯（ -異構體生理活性異構體生理活性最強）最強）母核：苯駢二氫吡喃衍生物，苯環(huán)上有一乙?；哪负耍罕今壎溥拎苌?，苯環(huán)上有一乙?；姆恿u基酚羥基側鏈：脂肪烷烴側鏈：脂肪烷烴性質：不溶于水，油狀，微黃色液體。性質：不溶于水，油狀，微黃色液體。9.5 維生素維生素E（稱為生育酚）（稱為生育酚）一、結構：苯并二氫吡喃醇衍生物，一、結構：苯并二氫吡喃醇衍生物，精選課件二、鑒別試驗二、鑒別試驗1

17、、硝酸反應：（藥典收錄）、硝酸反應：（藥典收錄）VE在硝酸條件下在硝酸條件下,水解生水解生成生育酚成生育酚.生育酚被硝酸氧化為鄰醌結構的生育紅生育酚被硝酸氧化為鄰醌結構的生育紅. VE + HNO3 -水解生成生育酚水解生成生育酚-生育紅（橙紅色）生育紅（橙紅色）2、水解后氧化反應：、水解后氧化反應： VE在堿性條件下水解，得在堿性條件下水解，得生育酚，在聯(lián)吡啶生育酚，在聯(lián)吡啶和三氯化鐵試液的作用下，反應產生血紅色配離子和三氯化鐵試液的作用下，反應產生血紅色配離子。VE+KOH 生育酚（加入三氯化鐵）生育酚（加入三氯化鐵）-生育醌生育醌 + 鐵配合物鐵配合物 （血紅色）精選課件3、UV吸收：吸

18、收：VE的的0.01%無水乙醇液：無水乙醇液： max=284nmmin=254nm4、紅外光譜（中國藥典）、紅外光譜（中國藥典）三、雜質檢查三、雜質檢查檢查游離生育酚檢查游離生育酚: ChP2005: ChP2005鈰量法：用鈰量法：用Ce(SOCe(SO4 4) )2 2(0.01mol/L)(0.01mol/L)滴定，滴定， 指示劑：二苯胺指示劑：二苯胺終點：亮黃終點：亮黃灰紫灰紫 消耗消耗Ce(SOCe(SO4 4) )2 2液不得超過液不得超過1.0ml1.0ml。精選課件 1、鈰量法（中國藥典）、鈰量法（中國藥典）原理：原理：VE用硫酸加熱回流，水解成生育酚，用硫酸用硫酸加熱回流，

19、水解成生育酚，用硫酸鈰定量地氧化為對一生育醌，過量的硫酸鈰氧化二鈰定量地氧化為對一生育醌，過量的硫酸鈰氧化二苯胺指示劑而指示滴定終點。苯胺指示劑而指示滴定終點。 終點：亮黃終點：亮黃灰紫灰紫 ，需作空白試驗。，需作空白試驗。四、含量測定四、含量測定2、氣相色譜法：、氣相色譜法：Chp20053、高效液相色譜法、高效液相色譜法 日本藥局方（日本藥局方（JP13）精選課件練習題：維生素練習題：維生素AD膠丸中維生素膠丸中維生素A的含量測定的含量測定已知：平均膠丸重為已知：平均膠丸重為0.0815g維生素維生素A的標示量為的標示量為10000IU/丸丸取樣：取樣：ml25ml2ml100g1279. 0精選課件%1cm1E首先要求樣品的首先要求樣品的 。精選課件計算吸收度比值和吸收度比值差。（填于上表）計算吸收度比值和吸收度比值差。（填于上表）655. 0)534. 0584. 0652. 02(52. 3A328（校正）%5 .0100652.0652.0655.0由此可知，應該用測得的由此可知，應該用測得的328nm處的吸收度計算。處的吸收度計算。然后計算校正吸收度與未校正吸收度相差的百分數(shù)然后計算校正吸收度與