結直腸癌中Cks1,P27Kip1和Skp2蛋白的表達

1、結直腸癌中Cks1,P27Kip1和Skp2蛋白的表趙勇，高建飛，章必成，杜光祖【關鍵詞】結直腸癌Cksl,P27KiplandSkp2proteinexpressionincolorectalcancerAbstractAIM:ToinvestigatetheexpressionofCkslproteinanditsrelationshipwiththeexpressionsofSkp2,P27Kiplandcolorectaltumorigenesis.METHODS:FlowcytometrywasusedtodetecttheexpressionsofCksl,Skp2andP27Ki

2、plin20normalcolorectalmucosas,20adenomasaswellas54colorectalcancers.RESULTS:TheexpressionsofCkslandSkp2graduallyincreasedintheorderofnormalmucosa,adenomatocolorectalcancer(P<,whiletheexpressionofP27Kiplgraduallydecreasedinthesameorder(P<.AstrongcorrelationwasfoundbetweentheexpressionsofCksland

3、Skp2(r=,P<andasignificantinverserelationwasalsoobservedbetweentheexpressionsofCkslorSkp2andofP27Kipl(r=,P<r=,P<respectively).TheexpressionofCkslwassignificantlyassociatedwiththelossoftumordifferentiation(P<,butnotwithlymphnodemetastasisandDukesstaging(P>.CONCLUSION:Ckslmayplayanimport

4、antroleinhumancolorectaltumorigenesis.CkslmaybeanessentialfactorinproteasomedependentdegradationofP27KiplregulatedbySkp2.Keywordscolorectalneoplasms;cyclinkinasesubunit1;Sphasekinaseprotein2;P27Kiplprotein;ubiquitin【摘要】目的：探討Cksl在結直腸癌發(fā)生及其在Skp2調劑P27Kipl降解進程中的作用.方式：應用流式細胞術測定正常結直腸黏膜、結直腸腺瘤和結直腸癌組織中Cksl,P2

5、7Kipl和SkP2蛋白的表達.結果：由正常結直腸黏膜、結直腸腺瘤到結直腸癌Cksl,Skp2表達呈上升趨勢(P,P27Kipl表達呈下降趨勢(P.結直腸癌中Cksl,Skp2表達與P27Kipl表達呈負相關(r=,P;r=,P；Cksl與Skp2呈正相關(r=,P).結論:Cksl可能參與了結直腸癌的發(fā)生；結直腸癌中Cksl可能參與了Skp2調劑P27Kipl泛素化降解進程.【關鍵詞】結直腸腫瘤；Cksl蛋白；SkP2蛋白；P27Kipl蛋白；泛素0引言許多惡性腫瘤中細胞周期性蛋白P27K1P1的表達是降低的，Fbox蛋白Sphasekinaseprotein2(Skp2)參與了P27Kip

6、l泛素化降解進程.Cyclinkinasesubunit1(Cksl)是高度保守的細胞周期調劑蛋白Sucl/Cks家族成員之一，只有結合Cksl后，才能識別P27Kipl進行泛素化蛋白降解1.而Cksl在腫瘤組織中尤其在結直腸癌組織中的表達及其與P27Kipl,Skp2間的關聯性罕有報導.咱們用流式細胞儀檢測了正常結直腸黏膜、結直腸腺瘤和結直腸癌中Cksl,P27Kipl和Skp2的表達.1材料和方式材料手術切除病理證明的結直腸癌標本54例，結直腸腺20例及正常結直腸黏膜20例.術前均未行放化療或免疫醫(yī)治.結直腸癌患者男29例，女25例，年齡2476(平均8)歲；DukesA期5例，B期22例

7、,C期18例,D期9例；有淋巴結轉移26例,無轉移28例.Cksl兔抗人mAb及Skp2鼠抗人mAb購自美國ZYMED公司，P27Kipl鼠抗人mAb購自丹麥DAKO公司.方式新鮮組織塊cmXcmXcm,PBS洗凈，機械破碎法制成單細胞懸液，mL加入兩只小試管，PBS液洗滌1次，離心，棄上清，試管內加入兔抗人Cksl(或P27Kipl,Skp2)熒光mAb10UL,對照管加入PBS,混勻，4c孵育30min,PBS洗滌1次，離心,清除多余未結合抗體后上機檢測.每1標本檢測1X105個細胞.Cksl(或P27Kipl,Skp2)陽性率=試管中Cksl(或P27Kipl,Skp2)陽性細胞數一陰性

8、對照陽性細胞數/10000X100%.統計學處置：數據用x土s表示，采納SPSS統計分析軟件,3組間樣本比較應用方差分析，各組間兩兩比較采納SNKq查驗，相關性分析采納Spearman品級相關分析，P<為有顯著性不同.2結果從正常腸黏膜、結直腸腺瘤到結直腸癌組織Cksl,Skp2蛋白表達呈上升趨勢(P;而P27Kipl呈下降趨勢(PV,表1).結直腸癌組織中Cksl表達與癌組織分化程度相關，低分化者Cksl表達率明顯高于中、高分化者土)vs()和(土)，P,而與結直腸癌患者年齡、性別，淋巴結轉移和Dukes分期無關.結直腸癌組織中Cksl蛋白表達與Skp2蛋白呈正相關（秩相關系數片0.8

9、45,PO；與P27Kipl蛋白負相關（尸，P；結直腸癌組織中Skp2蛋白與P27Kipl蛋白負相關（l,PV.在54例結直腸癌中，21例Cksl,Skp2同時高表達，P27Kipl低表達，14例Cksl,Skp2同時低表達,P27Kipl高表達;但3例Skp2,P27Kipl同時高表達,Cksl低表達；2例Skp2,P27Kipl同時低表達,Cksl高表達.表ICksl,P27Kipl和Skp2在結直腸癌中的表達（略）腺瘤O20OOO土癌O543S3Ovs正常黏膜和腺瘤.3討論細胞周期調劑失控是腫瘤發(fā)生、進展的重要分子事件.作為細胞周期負性調劑因子的P27Kipl,其活性改變阻礙細胞周期進程

10、，進而阻礙細胞增殖，與腫瘤發(fā)生、進展緊密相關.泛素蛋白水解酶途徑調劑是P27Kipl蛋白降解的要緊機制.一些惡性實體瘤中P27Kipl常呈低表達，而SkP2高表達,P27Kipl的表達與SkP2負相關2-3.本研究顯示從正常腸黏膜、結直腸腺瘤到結直腸癌組織Skp2蛋白表達呈上升趨勢，P27Kipl呈下降趨勢；結直腸癌組織中Skp2蛋白與P27Kipl蛋白負相關.這一結果支持P27Kipl,Skp2參與了結直腸癌的發(fā)生及Skp2參與了P27Kipl泛素化降解進程的推論.但本實驗還發(fā)覺5例Skp2,P27Kipl同時高表達或Skp2,P27Kipl同時低表達.Dowen等4發(fā)覺50%的宮頸癌組織中

11、P27Kipl,SkP2同時高表達或低表達.Hara等5發(fā)此刻缺乏Skp2的胞質內,仍可檢測到P27Kipl的泛素化活動，說明細胞質內可能存在P27Kipl其他泛素化途徑.咱們發(fā)覺從正常結直腸黏膜、結直腸腺瘤到結直腸癌組織Cksl蛋白表達呈上升趨勢，結直腸癌中Cksl的表達與腫瘤分化程度相關，這說明Cksl可能參與了結直腸癌的發(fā)生，Cksl蛋白表達增多，使得結直腸癌細胞離開了原有的正常生長周期調控，細胞呈無控制生長狀態(tài)，Cksl表達越多，細胞分化程度越低，腫瘤惡性程度越高.同時咱們還發(fā)覺3例Skp2,P27Kipl同時高表達,Cksl低表達;2例Skp2,P27Kipl同時低表達，Cksl高表

12、達.盡管沒有統計學意義，但這也說明Cksl是P27Kipl降解所必需的.【參考文獻】1 SitryD,SeeligerMA,KoK,etal.ThreedifferentbindingsitesofCkslarerequiredforp27ubiquitinligationj.JBiolChem,2002,277(44):42233-42240.2 LimMS,AdamsonA,LinZ,etal.ExpressionofSkp2,ap27(Kipl)ubiquitinligase,inmalignantlymphoma:Correlationwithp27(Kipl)andproliferationindexj.Blood,2002,100(8):2950-2956.3 YokoiS,YasuiK,SaitoOharaF,etal.Anoveltargetgene,SKP2,withinthe5pl3ampliconthatisfrequentlydetectedinsmallcelllungcancersJ.AmJPathol,2002,161(1):207-216.4DowenSE,ScottA,MuknerjeeG,etal.OverexpressionofSkp2incarcinomaofthecervixdoesnotcorrelateinverselyw