-獸藥殘留檢測技術(shù)--磺胺類課件

1、-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類第六章 獸藥殘留(cnli)檢測技術(shù)第五節(jié)第五節(jié) 磺胺類藥物殘留磺胺類藥物殘留(cnli)(cnli)的危害分的危害分析與檢測方法析與檢測方法 第一頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類一、概述一、概述(i sh)l磺胺類磺胺類(Slfonamides)藥物是獸醫(yī)上較常用的一類藥物是獸醫(yī)上較常用的一類合成抗感染藥物合成抗感染藥物,具有抗病原體范圍廣、化學性質(zhì)穩(wěn)定、具有抗病原體范圍廣、化學性質(zhì)穩(wěn)定、使用方便、易于生產(chǎn)等優(yōu)點。使用方便、易于生產(chǎn)等優(yōu)點。l磺胺藥種類繁多磺胺藥種類繁多,獸醫(yī)上常用的有獸醫(yī)上常用的有10余種余種(圖圖) 。l磺胺藥單獨使用磺胺藥單獨使用,病

2、原體易產(chǎn)生耐藥性病原體易產(chǎn)生耐藥性,與抗菌增效劑與抗菌增效劑如如TMP(甲氧芐啶甲氧芐啶)等聯(lián)用等聯(lián)用,抗菌范圍擴大抗菌范圍擴大,療效明顯增療效明顯增強強,用來治療畜禽腸道感染、乳腺炎、肺炎等疾病。用來治療畜禽腸道感染、乳腺炎、肺炎等疾病。l同時同時(tngsh)也被廣泛的用作飼料添加劑也被廣泛的用作飼料添加劑,用來增肥用來增肥 犢牛犢牛和豬。和豬。第二頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類危害危害(wihi)l這種藥物可以殘留在動物的體內(nèi)這種藥物可以殘留在動物的體內(nèi),人食用人食用(shyng)后對人體產(chǎn)生耐藥性后對人體產(chǎn)生耐藥性等副作用等副作用,尤其是致癌性物質(zhì)磺胺二甲嘧啶尤其是致癌性物

3、質(zhì)磺胺二甲嘧啶,能引起人的能引起人的再生障礙性再生障礙性貧血貧血,粒細胞缺乏癥粒細胞缺乏癥等疾病。等疾病。l再生障礙性貧血再生障礙性貧血:骨髓造血干細胞和骨髓造血干細胞和/或造血微環(huán)境損傷性血或造血微環(huán)境損傷性血液病。液病。l粒細胞缺乏癥粒細胞缺乏癥又叫白細胞減少癥又叫白細胞減少癥,本病多起病緩慢，慢性經(jīng)過，少本病多起病緩慢，慢性經(jīng)過，少數(shù)可無癥狀?；颊呖捎蓄^暈、乏力、頭痛、四肢無力、食欲不振、數(shù)可無癥狀?；颊呖捎蓄^暈、乏力、頭痛、四肢無力、食欲不振、低熱、失眠等；可有易感染傾向，如易患癤癰、肺炎、尿路感染，低熱、失眠等；可有易感染傾向，如易患癤癰、肺炎、尿路感染，甚至發(fā)生敗血癥等。甚至發(fā)生敗

4、血癥等。 第三頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類l根據(jù)腸道吸收的程度和臨床用途根據(jù)腸道吸收的程度和臨床用途,分為分為內(nèi)服難吸收內(nèi)服難吸收用于腸道感用于腸道感染的磺胺藥、染的磺胺藥、外用外用磺胺藥、磺胺藥、內(nèi)服易吸收內(nèi)服易吸收用于全身感染的磺胺藥三用于全身感染的磺胺藥三大類。大類。l除磺胺脒除磺胺脒(琥磺胺噻唑、酞磺胺噻唑現(xiàn)已少用琥磺胺噻唑、酞磺胺噻唑現(xiàn)已少用)用于腸道感染、用于腸道感染、磺胺嘧啶銀局部外用外磺胺嘧啶銀局部外用外,其他均用于全身性細菌感染其他均用于全身性細菌感染,某些品某些品種亦用于弓形體病、球蟲病和住白細胞原蟲病的治療。種亦用于弓形體病、球蟲病和住白細胞原蟲病的治療。l

5、不同的磺胺藥抗菌作用強度不同不同的磺胺藥抗菌作用強度不同,一般依次一般依次(yc)為磺胺為磺胺-6-甲氧嘧甲氧嘧啶啶(SMM)磺胺甲基異惡唑磺胺甲基異惡唑(SMZ) 磺胺異惡唑磺胺異惡唑(SIZ)磺胺嘧啶磺胺嘧啶(SD) 磺胺二甲氧嘧啶磺胺二甲氧嘧啶(SDM)磺胺對甲氧嘧啶磺胺對甲氧嘧啶(SMD) 磺胺二磺胺二甲嘧啶甲嘧啶(SM2) 磺胺鄰二甲氧嘧啶磺胺鄰二甲氧嘧啶(SDM)。第四頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類吸收吸收(xshu)后存在形式后存在形式l磺胺藥吸收后磺胺藥吸收后,一部分在血漿中保持游離狀態(tài)一部分在血漿中保持游離狀態(tài)(游離型游離型),一部分與血漿蛋白相結(jié)合一部分與血漿蛋

6、白相結(jié)合(結(jié)合型結(jié)合型),另一部分在肝臟另一部分在肝臟中高度乙?；兂芍懈叨纫阴；兂梢阴；前芬阴；前?。l游離型游離型具抗菌作用具抗菌作用,且能透過毛細血管進入各種體液和且能透過毛細血管進入各種體液和組織。組織。l結(jié)合型結(jié)合型無抗菌活性無抗菌活性,也不能透入體液或組織中也不能透入體液或組織中,但結(jié)但結(jié)合較疏松合較疏松(sh sn),能不斷分解出游離型磺胺。能不斷分解出游離型磺胺。l乙?；阴；腔前返闹饕x產(chǎn)物是磺胺的主要代謝產(chǎn)物,無抗菌活性。無抗菌活性。第五頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類體內(nèi)體內(nèi)(t ni)分布、代謝分布、代謝l磺胺藥在體內(nèi)分布相當廣泛。各種組織和體液均能到達。

7、以磺胺藥在體內(nèi)分布相當廣泛。各種組織和體液均能到達。以血血液液中含量中含量最高最高,肝、腎肝、腎次之次之,胸水、腹水、滑膜液、房水中濃度也胸水、腹水、滑膜液、房水中濃度也較高較高,并能并能透過胎盤透過胎盤(tipn)進入胎兒體內(nèi)。進入胎兒體內(nèi)。l磺胺藥在磺胺藥在神經(jīng)神經(jīng)、肌肉肌肉及及脂肪脂肪組織中的含量則組織中的含量則較低較低。l磺胺藥主要在肝臟代謝磺胺藥主要在肝臟代謝,代謝方式代謝方式有乙酰化、羥基化、結(jié)合等有乙?；⒘u基化、結(jié)合等,其中以其中以乙酰化為主乙?；癁橹?。l磺胺藥乙?；笫タ咕饔没前匪幰阴；笫タ咕饔?且在尿中的溶解度降低且在尿中的溶解度降低,易在腎小管易在腎小管析出結(jié)晶

8、析出結(jié)晶,造成對泌尿道的損害。應注意同服碳酸氫鈉造成對泌尿道的損害。應注意同服碳酸氫鈉,并增加飲并增加飲水水,可減少或避免其對泌尿道的損害?？蓽p少或避免其對泌尿道的損害。l部分磺胺藥及代謝產(chǎn)物在部分磺胺藥及代謝產(chǎn)物在肝肝內(nèi)成為水溶性的內(nèi)成為水溶性的葡萄糖醛酸結(jié)合物葡萄糖醛酸結(jié)合物而失而失去活性。去活性。第六頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類排泄排泄(pixi)l內(nèi)服難吸收內(nèi)服難吸收的磺胺藥的磺胺藥,主要由主要由糞便糞便排出排出;l內(nèi)服易吸收內(nèi)服易吸收的磺胺藥主要通過的磺胺藥主要通過腎臟腎臟排泄排泄,通過腎小球濾過或腎小通過腎小球濾過或腎小管分泌到達腎小管腔內(nèi)的藥物管分泌到達腎小管腔內(nèi)的

9、藥物,有一部分被腎小管重吸收。有一部分被腎小管重吸收。重吸收少、排泄快的藥物如磺胺異惡唑在尿中濃度較高重吸收少、排泄快的藥物如磺胺異惡唑在尿中濃度較高,適用適用于治療泌尿道感染。主要由腎小管分泌于治療泌尿道感染。主要由腎小管分泌,重吸收多的藥物在尿中重吸收多的藥物在尿中濃度低濃度低,但在血中有效但在血中有效(yuxio)濃度維持時間較長濃度維持時間較長,多屬長效如多屬長效如SMZ、SMM等。等。l磺胺藥尚可經(jīng)腸液、膽汁分泌排出磺胺藥尚可經(jīng)腸液、膽汁分泌排出,也可由乳汁排泄也可由乳汁排泄,但量但量較少較少。第七頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類常見常見(chn jin)磺胺藥磺胺藥l磺胺

10、嘧啶磺胺嘧啶(m dn)l三甲氧芐啶三甲氧芐啶l磺胺二甲嘧啶磺胺二甲嘧啶l磺胺二甲氧嘧啶磺胺二甲氧嘧啶l磺胺喹惡啉磺胺喹惡啉l磺胺噻唑磺胺噻唑l巴喹普林巴喹普林第八頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類磺胺磺胺(hun n)嘧啶嘧啶l屬廣譜抑菌劑屬廣譜抑菌劑,用于各種動物敏感菌的全身感染用于各種動物敏感菌的全身感染(gnrn)。l內(nèi)服易吸收內(nèi)服易吸收,排泄較緩慢排泄較緩慢,血藥濃度易達到有效水平。血藥濃度易達到有效水平。l磺胺嘧啶與磺胺嘧啶與血漿蛋白的結(jié)合率低血漿蛋白的結(jié)合率低,腦脊液中的濃度比其他磺胺腦脊液中的濃度比其他磺胺藥高藥高,因此是磺胺類藥中治療腦部細菌性感染的首選藥。因此是磺胺

11、類藥中治療腦部細菌性感染的首選藥。l鰻魚內(nèi)服鰻魚內(nèi)服放射性標記磺胺嘧啶后放射性標記磺胺嘧啶后,以以膽膽和和皮皮中含量中含量最高最高,血液血液、肝肝和和腎腎次之次之。第九頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類磺胺磺胺(hun n)嘧啶嘧啶/甲氧芐啶甲氧芐啶l豬豬內(nèi)服磺胺嘧啶內(nèi)服磺胺嘧啶/甲氧芐啶后甲氧芐啶后,胃腸道吸收甲氧芐啶較磺胺嘧啶胃腸道吸收甲氧芐啶較磺胺嘧啶快快,但甲氧芐啶消除期較磺胺嘧啶消除期緩慢。休藥但甲氧芐啶消除期較磺胺嘧啶消除期緩慢。休藥1天甲氧芐啶殘?zhí)旒籽跗S啶殘留最高的靶組織為肝臟留最高的靶組織為肝臟(0.29g/kg),但磺胺嘧啶殘留最高的靶但磺胺嘧啶殘留最高的靶組織為腎臟

12、組織為腎臟(0.23mg/kg)。休藥休藥8天天所有組織均所有組織均檢測不出檢測不出磺胺嘧啶磺胺嘧啶和甲氧芐啶的和甲氧芐啶的殘留量殘留量。l在在8 的水溫的水溫,海水海水鱒魚鱒魚投喂混合魚料投喂混合魚料(添加磺胺嘧啶和甲氧芐啶添加磺胺嘧啶和甲氧芐啶)后后,開始時藥物消除很快開始時藥物消除很快,但到達某一殘留量時基本不再下降但到達某一殘留量時基本不再下降,即使即使休藥休藥90天天魚體內(nèi)的魚體內(nèi)的殘留量仍可被檢出殘留量仍可被檢出。因此。因此(ync),在在10以以上的水溫上的水溫,鱒魚用藥鱒魚用藥(磺胺嘧啶磺胺嘧啶/甲氧芐啶甲氧芐啶)后的休藥期應為后的休藥期應為60天天,在在10 以下的水溫不得使

13、用。以下的水溫不得使用。第十頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類三甲三甲(sn ji)氧芐啶氧芐啶l屬化學合成抗菌藥屬化學合成抗菌藥,曾稱曾稱“磺胺增效劑磺胺增效劑”。l抗菌譜與磺胺相近抗菌譜與磺胺相近,它能抑制二氫葉酸還原酶它能抑制二氫葉酸還原酶,而磺胺藥則抑制而磺胺藥則抑制二氫葉酸合成酶。二氫葉酸合成酶。兩者合用兩者合用,可使細菌的葉酸代謝受到雙重阻斷可使細菌的葉酸代謝受到雙重阻斷,因而可因而可大幅度提高抗菌活性大幅度提高抗菌活性(可增效數(shù)倍至數(shù)十倍可增效數(shù)倍至數(shù)十倍),并可減少抗并可減少抗菌菌株的出現(xiàn)。菌菌株的出現(xiàn)。l內(nèi)服吸收快而完全內(nèi)服吸收快而完全,體內(nèi)分布體內(nèi)分布(fnb)廣廣

14、,組織組織中濃度一般比中濃度一般比血血中中濃度濃度高高,肺肺、腎腎中濃度分別比中濃度分別比血血中濃度高中濃度高17倍和倍和10倍倍,膽汁膽汁中濃度分中濃度分別比血中濃度高別比血中濃度高2.5倍和倍和2倍。倍。第十一頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類三甲三甲(sn ji)氧芐啶氧芐啶l三甲氧芐啶以三甲氧芐啶以非離子形式非離子形式從從腎腎排出排出,24h排出內(nèi)服量的排出內(nèi)服量的40%60%。少量從膽汁排泄少量從膽汁排泄,其濃度比血濃度高。其濃度比血濃度高。l馬、水牛、黃牛、奶山羊和豬靜脈注射的消除半衰期分別為馬、水牛、黃牛、奶山羊和豬靜脈注射的消除半衰期分別為4.2h、3.4h、o.94h

15、、1.43h和和2.5h。雞、鴨約。雞、鴨約2h。體內(nèi)代謝較少體內(nèi)代謝較少,代謝過程代謝過程包括氮氧化和羥基化包括氮氧化和羥基化,所有代謝物之和不超過總殘留的所有代謝物之和不超過總殘留的5%。l豬按規(guī)定劑量肌注豬按規(guī)定劑量肌注(j zh)后后310天天,組織中未檢出殘留量。連續(xù)組織中未檢出殘留量。連續(xù)飼喂飼喂10日劑量日劑量5mg/(kgd),休藥休藥3天只有一個肌肉樣品能檢測到殘?zhí)熘挥幸粋€肌肉樣品能檢測到殘留量留量34g/kg(方法檢測限方法檢測限15釅釅kg),休藥休藥5天有兩個皮天有兩個皮/脂肪樣品脂肪樣品的殘留量為的殘留量為31g/kg,休藥休藥10天為天為27g/kg。第十二頁，共五

16、十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類三甲三甲(sn ji)氧芐啶氧芐啶l魚體內(nèi)吸收和消除取決于水溫魚體內(nèi)吸收和消除取決于水溫。鱒魚喂服。鱒魚喂服20mg/kg,15 水溫、水溫、用藥后用藥后6h內(nèi)血漿中可以檢測到殘留量內(nèi)血漿中可以檢測到殘留量,但但7水溫、血漿中檢測不水溫、血漿中檢測不到殘留量到殘留量,即使延長即使延長(ynchng)到到12h也是如此。也是如此。魚體內(nèi)腎中殘留量最魚體內(nèi)腎中殘留量最高高,皮和血液次之皮和血液次之。血藥濃度是肌肉濃度的。血藥濃度是肌肉濃度的23倍。消除半衰期約倍。消除半衰期約24h。主要通過膽汁排泄主要通過膽汁排泄。l三文魚飼喂三文魚飼喂30mg/(kgd),連喂

17、連喂10日日,休藥休藥710天血漿中殘留量天血漿中殘留量約約12mg/kg,肌肉在喂服后立刻采樣測定肌肉在喂服后立刻采樣測定,測得平均殘留量測得平均殘留量10740g/kg,停藥停藥30天和天和40天肌肉中平均殘留量為天肌肉中平均殘留量為100g/kg和和10g/kg。第十三頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類磺胺磺胺(hun n)二甲嘧啶二甲嘧啶l近年來細菌對本品的耐藥性增高近年來細菌對本品的耐藥性增高,尤其是鏈球菌屬、奈瑟菌屬以及腸尤其是鏈球菌屬、奈瑟菌屬以及腸桿菌桿菌(gnjn)科細菌。主要用于巴氏桿菌科細菌。主要用于巴氏桿菌(gnjn)病、乳腺炎、子宮炎、病、乳腺炎、子宮炎、呼吸

18、道及消化道感染呼吸道及消化道感染,亦用以防治兔、禽球蟲病和豬弓形蟲病。亦用以防治兔、禽球蟲病和豬弓形蟲病。l內(nèi)服后吸收迅速而完全內(nèi)服后吸收迅速而完全,維持有效血藥濃度時間較長。維持有效血藥濃度時間較長。l磺胺二甲嘧啶在磺胺二甲嘧啶在牛體內(nèi)的代謝方式牛體內(nèi)的代謝方式有乙?；?、羥基化、結(jié)合等有乙酰化、羥基化、結(jié)合等,其中以其中以羥基化為主羥基化為主,其次為乙酰化其次為乙?；?代謝物代謝物為為6-羥甲基磺胺二甲嘧啶羥甲基磺胺二甲嘧啶和和N-乙乙?；前范奏奏；前范奏奏?。l血液血液和和奶奶中藥物濃度中藥物濃度最高最高,肌肉肌肉、腎腎和和肝肝次之次之。l肌肉、腎和肝中的肌肉、腎和肝中的N-乙?；前范?/p>

19、甲嘧啶濃度比母藥濃度低乙酰磺胺二甲嘧啶濃度比母藥濃度低,但但腎腎中的中的6-羥甲基磺胺二甲嘧啶羥甲基磺胺二甲嘧啶濃度濃度超過超過母藥濃度。母藥濃度。第十四頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類磺胺二甲磺胺二甲(r ji)嘧啶嘧啶l奶牛奶牛內(nèi)服或肌注后內(nèi)服或肌注后,奶中母藥殘留量內(nèi)服較肌注高奶中母藥殘留量內(nèi)服較肌注高,但殘留但殘留(cnli)消消除期基本相同。例如除期基本相同。例如,休藥休藥3天奶中的乳糖結(jié)合物和乙?；x物天奶中的乳糖結(jié)合物和乙?；x物均低于均低于10g/kg,休藥休藥4天奶中母藥殘留量均低于天奶中母藥殘留量均低于10g/kg。l豬體內(nèi)代謝主要以豬體內(nèi)代謝主要以乙?；阴?/p>

20、化為主為主,血漿和組織中血漿和組織中N-乙?；前范奏奏ひ阴；前范奏奏ごx代謝物濃度最高物濃度最高,其他代謝物其他代謝物(如磺胺二甲嘧啶如磺胺二甲嘧啶-寡糖綴和物、脫氨基磺寡糖綴和物、脫氨基磺胺二甲嘧啶等胺二甲嘧啶等)則次之。組織消除半衰期則次之。組織消除半衰期1014h,血漿消除半衰血漿消除半衰期期39天。休藥天。休藥18天血漿中殘留量接近允許限量值天血漿中殘留量接近允許限量值(0.1mg/kg)。l羊羊一次靜注一次靜注107mg/kg后后,體內(nèi)殘留消除很快體內(nèi)殘留消除很快,休藥休藥5天組織天組織(肉、肝、肉、肝、腎、脂肪腎、脂肪)中殘留量低于中殘留量低于0.1mg/kg。l魚魚體內(nèi)的代謝

21、物主要為體內(nèi)的代謝物主要為N-乙?；前范奏奏ひ阴；前范奏奏?少量為羥基化衍生物少量為羥基化衍生物和?；苌?。和?；苌铩５谑屙?，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類磺胺二甲磺胺二甲(r ji)氧嘧啶氧嘧啶l主要用于防治犢牛、雞、兔球蟲病主要用于防治犢牛、雞、兔球蟲病,亦用于防治雞傳染性鼻炎、亦用于防治雞傳染性鼻炎、禽霍亂、卡氏住白細胞原蟲病、豬狗的弓形體病及諾卡菌禽霍亂、卡氏住白細胞原蟲病、豬狗的弓形體病及諾卡菌病。病。l家禽家禽飼服后飼服后吸收快而排泄吸收快而排泄(pixi)慢慢,作用維持時間長。作用維持時間長。肝肝和和腎腎中中有有較高較高的的藥物濃度藥物濃度,血漿蛋白結(jié)合血

22、漿蛋白結(jié)合率為率為80%85%。l除腎臟外除腎臟外,其他組織中藥物濃度降低至其他組織中藥物濃度降低至0.1mg/kg或以下需休藥或以下需休藥8天。天。蛋雞蛋雞或或火雞火雞內(nèi)服后內(nèi)服后,蛋雞休藥蛋雞休藥6天、火雞休藥天、火雞休藥8天天,這樣組織殘留這樣組織殘留可低于允許限量值可低于允許限量值(0.1mg/kg)。l體內(nèi)乙?；实腕w內(nèi)乙?；实?代謝物代謝物N4-乙酰磺胺二甲嘧啶乙?；前范奏奏ぶ饕嬖谟谥饕嬖谟谘獫{血漿、組織組織和和糞糞中中,消除期約消除期約7天。天。第十六頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類磺胺磺胺(hun n)二甲氧嘧啶二甲氧嘧啶l蛋雞蛋雞飲服飲服1.0g/L/日或日

23、或0.5g/L/日日,連續(xù)連續(xù)5日日,蛋中有較高的殘留蛋中有較高的殘留,蛋清蛋清和蛋黃的最高殘留可達和蛋黃的最高殘留可達30mg/kg和和9mg/kg;殘留降至殘留降至0.1mg/kg,蛋蛋清需體藥清需體藥46天天,蛋黃需休藥蛋黃需休藥7天。天。l與奧美普林與奧美普林(ormethoprim)聯(lián)用聯(lián)用,三文魚三文魚用藥后用藥后38天天,兩種藥物在兩種藥物在血漿和組織中達到一個相對血漿和組織中達到一個相對(xingdu)穩(wěn)定的殘留量?；前范籽醴€(wěn)定的殘留量?；前范籽踵奏さ淖罡咂骄鶜埩袅苦奏さ淖罡咂骄鶜埩袅?血漿血漿14.3mg/kg、肌肉、肌肉17.7mg/kg、肝、肝7.4mg/kg、腎、腎

24、6.8mg/kg;消除半衰期消除半衰期:血漿血漿h、肌肉、肌肉19h、肝、肝62h、腎腎45h。l奧美普林的最高平均殘留量奧美普林的最高平均殘留量:血漿血漿1.5mg/kg、肌肉、肌肉3.7mg/kg、肝、肝9.1mg/kg、腎、腎166.0mg/kg;消除半衰期消除半衰期:血漿血漿63h、肌肉、肌肉143h、肝、肝95h、腎腎410h。第十七頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類磺胺磺胺(hun n)喹惡啉喹惡啉l別名磺胺喹沙啉別名磺胺喹沙啉,為類白色或淡黃色粉末為類白色或淡黃色粉末(fnm),無臭無臭,不溶于水不溶于水,溶于甲醇、乙醇溶于甲醇、乙醇,易溶于堿性溶液。易溶于堿性溶液。l磺

25、胺喹惡啉屬磺胺類藥兼有抗球蟲作用磺胺喹惡啉屬磺胺類藥兼有抗球蟲作用,廣泛用于養(yǎng)禽業(yè)廣泛用于養(yǎng)禽業(yè),治治療雞鴨的家禽霍亂及球蟲病。療雞鴨的家禽霍亂及球蟲病。l家禽家禽內(nèi)服后內(nèi)服后吸收迅速吸收迅速,但但排泄緩慢排泄緩慢,殘留在組織器官及雞蛋中時殘留在組織器官及雞蛋中時間長間長。l兔兔飼喂飼喂100mg/kg,一日兩次、連喂一日兩次、連喂5日日,肝和腎中殘留量較高肝和腎中殘留量較高,第第4天達峰值。休藥天達峰值。休藥78天天,肝、腎和血漿中的殘留量降到肝、腎和血漿中的殘留量降到0.1mg/kg。第十八頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類磺胺噻唑磺胺噻唑(hun n si zu)l抗菌作用比磺胺

26、嘧啶強抗菌作用比磺胺嘧啶強,能抑制細菌的二氫葉酸合成酶能抑制細菌的二氫葉酸合成酶,阻阻礙細菌的葉酸合成礙細菌的葉酸合成,抑制細菌生長和繁殖。抑制細菌生長和繁殖。l對溶血性鏈球菌、肺炎桿菌對溶血性鏈球菌、肺炎桿菌(gnjn)、淋球菌、葡萄球菌、腦、淋球菌、葡萄球菌、腦膜炎球菌、大腸桿菌膜炎球菌、大腸桿菌(gnjn)及痢疾桿菌及痢疾桿菌(gnjn)等有抗菌作用。等有抗菌作用。l用于敏感菌所致的肺炎、出血性敗血癥、子宮內(nèi)膜炎用于敏感菌所致的肺炎、出血性敗血癥、子宮內(nèi)膜炎及禽霍亂、雛白痢等。對感染創(chuàng)可外用其軟膏劑。同及禽霍亂、雛白痢等。對感染創(chuàng)可外用其軟膏劑。同時也被用作時也被用作飼料添加劑飼料添加劑

27、,增肥犢牛和豬。增肥犢牛和豬。第十九頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類磺胺噻唑磺胺噻唑(hun n si zu)l內(nèi)服吸收不完全內(nèi)服吸收不完全,馬、牛、豬、羊一次內(nèi)服馬、牛、豬、羊一次內(nèi)服0.1mg/kg,其血其血藥峰濃度僅為藥峰濃度僅為20mg/L。l其可溶性鈉鹽其可溶性鈉鹽肌肉注射后迅速吸收肌肉注射后迅速吸收。吸收后。吸收后排泄迅速排泄迅速,單單胃動物內(nèi)服后胃動物內(nèi)服后,在在12h內(nèi)經(jīng)腎排出約內(nèi)經(jīng)腎排出約50%,24h約約90%。其。其半半衰期短衰期短,不易維持有效血濃度。不易維持有效血濃度。l在體內(nèi)與血漿蛋白在體內(nèi)與血漿蛋白(dnbi)的的結(jié)合率結(jié)合率和和乙酰化程度乙酰化程度均均

28、較高較高,其乙其乙?；锶芙舛缺仍幍王；锶芙舛缺仍幍?易產(chǎn)生結(jié)晶尿而損害腎臟。易產(chǎn)生結(jié)晶尿而損害腎臟。第二十頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類巴喹普林巴喹普林l巴喹普林巴喹普林(BQP)是一種是一種新型動物專用的磺胺類藥物新型動物專用的磺胺類藥物,最早由美國最早由美國Wellcome Foundation 公司于公司于1989年創(chuàng)制年創(chuàng)制,1991年美國年美國Malhnd Rrodt公司將其與磺胺類藥物配成復方制劑上市。公司將其與磺胺類藥物配成復方制劑上市。lBQP抗菌譜與其他磺胺類藥相近抗菌譜與其他磺胺類藥相近,同時又是磺胺同時又是磺胺(hun n)等等抗菌藥抗菌藥物的增效劑物

29、的增效劑。主要用于牛的肺炎及腸炎、腐蹄病、臍部感。主要用于牛的肺炎及腸炎、腐蹄病、臍部感染、感染性外傷、感染性角膜結(jié)膜炎、非泌乳期牛的木舌染、感染性外傷、感染性角膜結(jié)膜炎、非泌乳期牛的木舌病和放線菌下頜腫塊病和放線菌下頜腫塊;豬胃及腸道感染、胸膜肺炎、乳腺炎、豬胃及腸道感染、胸膜肺炎、乳腺炎、子宮炎、無乳綜合癥等子宮炎、無乳綜合癥等;狗的泌尿系、呼吸系、胃腸道及皮膚狗的泌尿系、呼吸系、胃腸道及皮膚感染。感染。第二十一頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類巴喹普林巴喹普林l內(nèi)服生物利用度高且分布廣泛、體內(nèi)的消除半衰期內(nèi)服生物利用度高且分布廣泛、體內(nèi)的消除半衰期長。長。豬肌注豬肌注的休藥期為的

30、休藥期為28天天,牛肌注牛肌注和和內(nèi)服內(nèi)服的休藥期分的休藥期分別為別為28天和天和21天。天。奶牛奶牛用藥后的棄乳期為用藥后的棄乳期為4天。主要天。主要經(jīng)經(jīng)膽汁和腎排泄膽汁和腎排泄。l豬豬、牛牛用藥后用藥后1442天天,肝肝、腎腎和和注射部位注射部位的母藥殘留的母藥殘留在總殘留中占在總殘留中占很低很低的百分比的百分比,同時同時肌肉肌肉(jru)和和脂肪脂肪的殘的殘留量低于檢測方法的測定限。留量低于檢測方法的測定限。豬皮中含相當高的母藥豬皮中含相當高的母藥殘留殘留,而且降解和消除都比?？於医到夂拖急扰？?殘留量相應亦低。殘留量相應亦低。第二十二頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類二、

31、樣品二、樣品(yngpn)處理處理l常用的磺胺類藥物常用的磺胺類藥物,除少數(shù)外除少數(shù)外,一般一般(ybn)具有以下的基本結(jié)構(gòu)具有以下的基本結(jié)構(gòu):磺酰胺基其化學性質(zhì)可從四部分結(jié)構(gòu)上表現(xiàn)其化學性質(zhì)可從四部分結(jié)構(gòu)上表現(xiàn)(bioxin)出來出來,即即:磺酰胺基磺酰胺基( SO2NHR)、芳伯氨基芳伯氨基( NH2)、芳環(huán)、芳環(huán)、N1及及N4上的取代基。上的取代基。(R=H),兩性化合物兩性化合物,可溶于酸或堿溶液?？扇苡谒峄驂A溶液?；酋０被幕酋０被乃嵝运嵝员憩F(xiàn)在表現(xiàn)在N1上上的活潑氫原子的活潑氫原子,其酸性的大小其酸性的大小取決于取決于N1上的取代基上的取代基R。R的吸電性越大的吸電性越大,則其酸

32、性越強。則其酸性越強。第二十三頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類化學性質(zhì)化學性質(zhì)(huxu xngzh)l本類藥物本類藥物水溶性較低水溶性較低,易溶于極性有機溶劑易溶于極性有機溶劑如乙醇、丙酮、乙如乙醇、丙酮、乙腈、氯仿和二氯甲烷腈、氯仿和二氯甲烷,難溶于非極性有機溶劑難溶于非極性有機溶劑。l由于磺胺藥具有酸堿兩性由于磺胺藥具有酸堿兩性,通過調(diào)節(jié)溶液的通過調(diào)節(jié)溶液的pH值值(pH79),可以可以使磺胺藥呈不同狀態(tài)使磺胺藥呈不同狀態(tài),即即中性分子中性分子還是還是離子分子離子分子,從而改變水相和從而改變水相和有機相的分配系數(shù)。有機相的分配系數(shù)。l例如例如,磺胺的中性分子磺胺的中性分子,在二

33、氯甲烷等有機溶劑中分配系數(shù)大在二氯甲烷等有機溶劑中分配系數(shù)大;離子態(tài)分子離子態(tài)分子,則水性溶液中分配系數(shù)大。則水性溶液中分配系數(shù)大。l生物樣品通過生物樣品通過多次液多次液-液萃取液萃取(cuq),可達到凈化的目的?？蛇_到凈化的目的。第二十四頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類1、提取、提取(tq)l液體樣品液體樣品(如牛奶如牛奶)可用水稀釋過濾后可用水稀釋過濾后,熒光直接檢測熒光直接檢測,亦可用水性亦可用水性緩沖液或氯化鈉溶液稀釋緩沖液或氯化鈉溶液稀釋,再進行凈化處理。再進行凈化處理。l蜂蜜樣品蜂蜜樣品可用水或水性緩沖液稀釋?？捎盟蛩跃彌_液稀釋。l組織樣品組織樣品(如肌肉、腎臟、肝臟

34、如肌肉、腎臟、肝臟)的預處理相對復雜些的預處理相對復雜些,一般采取一般采取均質(zhì)、液均質(zhì)、液-液萃取或固相萃取凈化等步驟。液萃取或固相萃取凈化等步驟。l液液-液萃取操作液萃取操作(cozu)煩瑣煩瑣,而蛋白沉淀后直接進樣而蛋白沉淀后直接進樣,雖操作簡便、雖操作簡便、并具有較高的回收率并具有較高的回收率,但對色譜柱的損害較為嚴重。但對色譜柱的損害較為嚴重。第二十五頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類溶劑溶劑(rngj)提取提取l溶劑提取溶劑提取時時,應盡可能使組織中應盡可能使組織中結(jié)合態(tài)結(jié)合態(tài)的殘留物溶解的殘留物溶解,并且除去并且除去大部分的蛋白質(zhì)。大部分的蛋白質(zhì)。l一般可采用酸性水溶液、乙

35、腈、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、一般可采用酸性水溶液、乙腈、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮或混合溶劑等丙酮或混合溶劑等極性溶劑極性溶劑進行提取。進行提取。l二氯甲烷中加入二氯甲烷中加入離子對試劑離子對試劑四丁基銨四丁基銨(pH10),對魚肉對魚肉(yru)和和動物組織的提取動物組織的提取,發(fā)現(xiàn)磺胺二甲氧嘧啶和奧美普林的提取率很高。發(fā)現(xiàn)磺胺二甲氧嘧啶和奧美普林的提取率很高。l另外另外,提取過程中加入提取過程中加入無水硫酸鈉無水硫酸鈉可脫去組織樣品中的水分可脫去組織樣品中的水分,有助于樣品的充分提取。有助于樣品的充分提取。第二十六頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類2、凈化、凈化(jnghu)

36、l初提取液中含大量的內(nèi)源性干擾雜質(zhì)初提取液中含大量的內(nèi)源性干擾雜質(zhì),在痕量分析時會干擾組分在痕量分析時會干擾組分的測定的測定,因此還需要凈化處理。因此還需要凈化處理。l凈化方法凈化方法有液有液-液萃取、固相萃取、基質(zhì)固相分散液萃取、固相萃取、基質(zhì)固相分散(fnsn)、在、在線痕量富集、液相色譜、在線透析和超臨界流體萃取等。線痕量富集、液相色譜、在線透析和超臨界流體萃取等。l有時為了獲得高的凈化效果有時為了獲得高的凈化效果,幾種方法相結(jié)合應用。幾種方法相結(jié)合應用。第二十七頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類液液-液萃取液萃取(cuq)l液液-液萃取液萃取盡管操作煩瑣、耗費溶劑盡管操作煩瑣、

37、耗費溶劑,但在所有凈化方法中應用最但在所有凈化方法中應用最廣。廣。l通過通過調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)樣液的樣液的pH值值,使磺胺類藥物有選擇性地在有機相與水使磺胺類藥物有選擇性地在有機相與水相之間進行分配。相之間進行分配。l例如例如,有機相提取液中的磺胺類藥物可以被強酸溶液或堿性有機相提取液中的磺胺類藥物可以被強酸溶液或堿性(jin xn)溶液抽提溶液抽提,若將水相提取液調(diào)節(jié)若將水相提取液調(diào)節(jié)pH至至5.15.6,可用二氯甲烷或乙可用二氯甲烷或乙酸乙酯進行再抽提。酸乙酯進行再抽提。l離子對提取法離子對提取法亦有應用亦有應用,例如例如,水相提取液調(diào)節(jié)水相提取液調(diào)節(jié)pH至至1011,加入加入四丁基銨離子對試劑四丁

38、基銨離子對試劑,形成磺胺類離子對形成磺胺類離子對,可以被二氯甲烷提可以被二氯甲烷提取。取。l用用正己烷正己烷或或乙醚乙醚進行液進行液-液萃取液萃取,可以可以脫脂肪脫脂肪。第二十八頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類固相萃取固相萃取(cuq)l由于由于(yuy)甲氧芐啶常和其他磺胺藥物同時使用甲氧芐啶常和其他磺胺藥物同時使用,而它們具有不而它們具有不同的同的pKa和溶劑親和力和溶劑親和力,難以在給定的難以在給定的pH值和溶劑系統(tǒng)中同時值和溶劑系統(tǒng)中同時提取提取,宜采用宜采用固相萃取法固相萃取法(SPE)。l常用的常用的SPE柱柱,如如C18和和C8、硅膠柱、離子交換柱、硅膠柱、離子交換柱、

39、Florisil柱和堿柱和堿性氧化鋁柱等。性氧化鋁柱等。l該法操作較為簡便、并對生物樣品具有較高的該法操作較為簡便、并對生物樣品具有較高的“凈化凈化”能力能力,可提高可提高方法的提取回收率和精密度。亦可將幾種小柱串聯(lián)應用方法的提取回收率和精密度。亦可將幾種小柱串聯(lián)應用,可獲得可獲得更高的凈化效果。更高的凈化效果。l基質(zhì)固相分散法基質(zhì)固相分散法目前只使用目前只使用C18吸附劑吸附劑,該方法簡便、提取率和該方法簡便、提取率和凈化能力均高凈化能力均高,已應用于魚肉、牛肉、豬肉和牛奶樣品的預處理。已應用于魚肉、牛肉、豬肉和牛奶樣品的預處理。第二十九頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類柱切換柱切換

40、(qi hun)技術(shù)技術(shù)l在線痕量富集技術(shù)在線痕量富集技術(shù)可分離可分離/凈化牛奶凈化牛奶(ni ni)樣品中樣品中9種磺胺類種磺胺類藥物：藥物：l磺胺類藥物在預富集柱磺胺類藥物在預富集柱RP-C18(10m)中被保留濃縮中被保留濃縮,干擾雜干擾雜質(zhì)用淋洗劑洗去后質(zhì)用淋洗劑洗去后,預柱中的磺胺類藥物再用洗脫液洗脫預柱中的磺胺類藥物再用洗脫液洗脫,進入分析柱中分離。進入分析柱中分離。l有研究者將有研究者將TSK凝膠滲透柱和凝膠滲透柱和PLRP-S預富集柱串聯(lián)使用預富集柱串聯(lián)使用,用于凈化豬組織中的磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲惡唑和甲氧芐用于凈化豬組織中的磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲惡唑和甲氧芐啶。啶。第三十頁

41、，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類在線在線(zi xin)透析透析l采取采取在線透析、富集的方法在線透析、富集的方法,可測定動物源食品可測定動物源食品(肌肉、肌肉、牛奶和蛋牛奶和蛋)中的中的13種磺胺類藥物：種磺胺類藥物：l利用纖維素膜選擇性滲過分析物利用纖維素膜選擇性滲過分析物,到達預富集柱到達預富集柱(C18、XAD-2或或XAD-4),干擾干擾(gnro)雜質(zhì)用淋洗劑洗去雜質(zhì)用淋洗劑洗去,濃縮濃縮后的分析物被洗脫后后的分析物被洗脫后,進入分析柱分離。進入分析柱分離。第三十一頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類超臨界流體超臨界流體(lit)萃取萃取l超臨界流體萃取法超臨界流體萃

42、取法被用于豬腎臟被用于豬腎臟(shnzng)樣品中甲氧芐啶樣品中甲氧芐啶和和3種類固醇激素的提取分離。種類固醇激素的提取分離。lCO2提取時提取時,分析物被保留在柱的進樣端分析物被保留在柱的進樣端,大部分內(nèi)源性大部分內(nèi)源性干擾物被洗去后干擾物被洗去后,分析物和一些極性干擾物用加入改分析物和一些極性干擾物用加入改性劑的性劑的CO2洗脫。洗脫。第三十二頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類三、分析方法三、分析方法l生物生物(shngw)樣品中磺胺類藥物的分析樣品中磺胺類藥物的分析,光譜法光譜法(分光光度分光光度法、熒光光譜法法、熒光光譜法)和和色譜法色譜法（薄層色譜、氣相色譜、液（薄層色譜、氣

43、相色譜、液相色譜、超臨界流體色譜）具有靈敏、快速、方便等相色譜、超臨界流體色譜）具有靈敏、快速、方便等優(yōu)點。優(yōu)點。l例如：分光光度法測定牛組織中的磺胺甲嘧啶，蜂蜜例如：分光光度法測定牛組織中的磺胺甲嘧啶，蜂蜜中的磺胺噻唑，奶中的乙酰磺胺、中的磺胺噻唑，奶中的乙?；前?、 N-乙?；前范奏滓阴；前范奏奏?；啶；l薄層色譜法測定動物組織、豬肝、奶中的磺胺甲嘧薄層色譜法測定動物組織、豬肝、奶中的磺胺甲嘧啶，蜂蜜中的磺胺噻唑。啶，蜂蜜中的磺胺噻唑。第三十三頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類1、光譜法、光譜法l光譜法主要用于樣品中光譜法主要用于樣品中個別磺胺類藥物個別磺胺類藥物的分析的分析,最常

44、用的方法最常用的方法為為重氮化重氮化-偶合反應分光光度法偶合反應分光光度法。l無無N4取代基的磺胺類藥物取代基的磺胺類藥物,或或N4為酰氨基的磺胺類藥物為酰氨基的磺胺類藥物,經(jīng)水經(jīng)水解解,在在酸性介質(zhì)酸性介質(zhì)中經(jīng)中經(jīng)重氮化重氮化后后,可在可在堿性堿性中與酚類中與酚類(如如-萘酚、麝萘酚、麝香草酚香草酚)偶合偶合,在在中性中性中與變色酸偶合中與變色酸偶合,或在或在弱酸性弱酸性中與胺類偶中與胺類偶合呈色合呈色,于空白校正下于空白校正下,在一定波長處測其吸收度。與標準品在一定波長處測其吸收度。與標準品對照對照,即可測定其含量。即可測定其含量。l最常應用的是酸性偶合試劑最常應用的是酸性偶合試劑,如如N

45、-(1-萘基萘基)乙二胺乙二胺(Bratton Marshall方法方法),測定波長隨組分的不同測定波長隨組分的不同(b tn)略有不同略有不同(b tn),一般一般為為540545nm,已應用于牛組織和奶中的磺胺二甲嘧啶檢測、蜂已應用于牛組織和奶中的磺胺二甲嘧啶檢測、蜂蜜中的磺胺噻唑檢測。蜜中的磺胺噻唑檢測。第三十四頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類l也有應用也有應用1-(-二乙氨基二乙氨基-乙基乙基-氨基氨基)萘萘,優(yōu)點為偶合形成的偶氮染料優(yōu)點為偶合形成的偶氮染料是水溶性的是水溶性的,且其吸收系數(shù)也較大。這兩種偶合試劑遇亞硝酸都且其吸收系數(shù)也較大。這兩種偶合試劑遇亞硝酸都能變色能變

46、色,所以所以,經(jīng)重氮化后經(jīng)重氮化后,應以氨基磺酸鹽將剩余的亞硝酸分應以氨基磺酸鹽將剩余的亞硝酸分解除去解除去(ch q)。l光譜法選擇性差光譜法選擇性差,但可作為一種但可作為一種篩選法篩選法應用應用,如牛奶中磺胺醋酰和如牛奶中磺胺醋酰和磺胺脒啶的篩選測定。磺胺脒啶的篩選測定。第三十五頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類2、薄層、薄層(bo cn)色譜法色譜法l薄層色譜薄層色譜(TLC)經(jīng)常作為樣品篩選方法。經(jīng)常作為樣品篩選方法。l經(jīng)薄層色譜分離后的磺胺類藥物經(jīng)薄層色譜分離后的磺胺類藥物(yow),可按兩種方法進行定量分可按兩種方法進行定量分析：析：洗脫定量法洗脫定量法和和薄層掃描定量法薄

47、層掃描定量法。l洗脫定量法：洗脫定量法：從板上洗脫后從板上洗脫后,可按分光光度法可按分光光度法,或與熒光胺、或與熒光胺、對二甲氨基苯甲醛反應后的比色法對二甲氨基苯甲醛反應后的比色法,或重氮化或重氮化-偶合后的比色法偶合后的比色法進行。其中進行。其中,以以重氮化重氮化-偶合法偶合法最好。最好。l但與實際相比但與實際相比,測得值尚低測得值尚低5%15%。結(jié)果偏低的主要原因是。結(jié)果偏低的主要原因是薄層色譜條件不穩(wěn)定薄層色譜條件不穩(wěn)定,吸附劑可能部分損失。板上洗脫后重氮化吸附劑可能部分損失。板上洗脫后重氮化-偶合法如下偶合法如下:第三十六頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類l刮下的薄層用刮下的薄

48、層用1mol/L HCl 10mL提取提取,所得提取液先所得提取液先加加0.1%NaNO2液液1mL,5min后后,再加再加0.5%氨基磺酸銨氨基磺酸銨液液1mL,強烈振搖后強烈振搖后,加入加入0.1% N, N-乙基乙基-N (1-萘基萘基)乙二胺草酸鹽溶液乙二胺草酸鹽溶液1mL,10min后后,用用3cm的吸收池的吸收池,以以同法所得的試劑空白同法所得的試劑空白(kngbi)為對照為對照,于于546mm處處(SMP、SIZ、ST的的max)或或542nm處處為為SM2 、SPZ(磺胺苯磺胺苯吡唑）的吡唑）的max進行測定。進行測定。第三十七頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類薄層掃描

49、薄層掃描(somio)定量法定量法l薄層掃描法（薄層掃描法（TLCS）系指用一定波長的光照射在薄層板上，對?。┫抵赣靡欢úㄩL的光照射在薄層板上，對薄層色譜中有紫外或可見吸收的斑點或經(jīng)照射能激發(fā)產(chǎn)生熒光的斑點進層色譜中有紫外或可見吸收的斑點或經(jīng)照射能激發(fā)產(chǎn)生熒光的斑點進行掃描，將掃描得到的圖譜及積分值用于藥品的質(zhì)量檢查的方法。行掃描，將掃描得到的圖譜及積分值用于藥品的質(zhì)量檢查的方法。l隨著制板、點樣、展開等操作的儀器化及儀器性能的改進，薄隨著制板、點樣、展開等操作的儀器化及儀器性能的改進，薄層掃描法檢測的靈敏度，結(jié)果的精密度與準確度均大大提高。層掃描法檢測的靈敏度，結(jié)果的精密度與準確度均大大提高

50、。l與高效液相色譜法相比，具有多通道效應，可同時平行分離分析多個與高效液相色譜法相比，具有多通道效應，可同時平行分離分析多個樣品；流動相用量少且選擇范圍寬、更換方便；固定樣品；流動相用量少且選擇范圍寬、更換方便；固定(gdng)相為一次相為一次性使用，對樣品的預處理要求不高等優(yōu)點。性使用，對樣品的預處理要求不高等優(yōu)點。 第三十八頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類l應用應用TLC紫外分光光度法進行磺胺類藥物定量分析時紫外分光光度法進行磺胺類藥物定量分析時,有有7%11%的損失。的損失。l如用無黏合劑的硅膠如用無黏合劑的硅膠,以以0.1mol/L NaOH調(diào)糊制板調(diào)糊制板,可可以獲得較好的

51、回收率。以獲得較好的回收率。lTLC的優(yōu)點是設(shè)備簡單、可以同時在多塊板上點樣的優(yōu)點是設(shè)備簡單、可以同時在多塊板上點樣,處處理大量樣品時間短理大量樣品時間短,適合飼料、組織、體液樣品的適合飼料、組織、體液樣品的篩選篩選(shixun)分析。分析。第三十九頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類3、氣相色譜法、氣相色譜法l氣相色譜法氣相色譜法(GC)具有高的靈敏度和選擇性具有高的靈敏度和選擇性,但由于磺胺類藥物但由于磺胺類藥物難難揮發(fā)揮發(fā), 測定測定(cdng)時需要時需要衍生化衍生化。l一般用一般用重氮甲烷重氮甲烷甲基化甲基化,或甲基化后再用或甲基化后再用N-甲基甲基-N-三甲基硅烷基三甲基硅

52、烷基三氟乙酰胺三氟乙酰胺(MSTFA)進行進行硅烷化硅烷化或或N-甲基雙甲基雙(三氟乙酰三氟乙酰胺胺)(MBTFA)乙?；阴；?以增加揮發(fā)性以增加揮發(fā)性,改善色譜特性改善色譜特性(熱穩(wěn)定性、降熱穩(wěn)定性、降低極性低極性),氫火焰離子化檢測器氫火焰離子化檢測器測定。測定。l除了甲基化外除了甲基化外,也可利用也可利用水解法水解法將磺胺類藥物水解成相應的將磺胺類藥物水解成相應的揮發(fā)性揮發(fā)性胺類胺類,繼之以繼之以GC法測定法測定,l也可與適宜的也可與適宜的鹵化試劑鹵化試劑反應反應,生成相應的生成相應的衍生物衍生物,如三氟乙?；蛉缛阴；蚱叻□；苌锏绕叻□；苌锏?以以電子捕獲檢測器電子

53、捕獲檢測器測定。測定。第四十頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類GC分離分離(fnl)柱柱l磺胺類藥物的分離柱可用磺胺類藥物的分離柱可用填充柱填充柱和和石英毛細管柱石英毛細管柱,通常通常毛細管柱毛細管柱(DB-5)分離效果更好。分離效果更好。l樣品確證樣品確證(qu zhn)分析時分析時,一般用一般用質(zhì)譜檢測器質(zhì)譜檢測器測定測定,離子源離子源采用采用化學電離化學電離和和電子轟擊電子轟擊接口。接口。l多數(shù)磺胺類藥物含有多數(shù)磺胺類藥物含有對氨基苯磺?；鶎Π被交酋；Y(jié)構(gòu)部分結(jié)構(gòu)部分,它們它們的結(jié)構(gòu)差異只是的結(jié)構(gòu)差異只是N1取代基取代基的不同的不同,所以本類藥物的質(zhì)所以本類藥物的質(zhì)譜有許多共有

54、的特征峰譜有許多共有的特征峰,如如m/z 56、l40、108、92、65和和39等碎片離子峰。等碎片離子峰。第四十一頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類4、超臨界色譜法、超臨界色譜法lRamsey等用超臨界流體色譜法測定豬腎組織中的甲氧等用超臨界流體色譜法測定豬腎組織中的甲氧芐啶和三種類固醇激素芐啶和三種類固醇激素,分析柱為分析柱為Spherisorb 5氨基氨基(nj)鍵合柱鍵合柱,含甲醇的含甲醇的CO2作流動相作流動相,熱噴霧電離串聯(lián)質(zhì)譜熱噴霧電離串聯(lián)質(zhì)譜檢測器測定檢測器測定,檢測限約檢測限約10mg/kg,對于組織和奶中對于組織和奶中g(shù)/kg級殘留量的檢測級殘留量的檢測,靈敏度不

55、夠。靈敏度不夠。第四十二頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類5、高效、高效(o xio)液相色譜法液相色譜法l20世紀世紀80年代以來年代以來,普遍采用普遍采用反相色譜法反相色譜法,使用使用C18、C8和苯基柱和苯基柱,尤以尤以C18應用最廣應用最廣,以甲醇以甲醇(或乙腈或乙腈)-水水(含醋酸或偏磷酸含醋酸或偏磷酸)系統(tǒng)為流動系統(tǒng)為流動相相,可分離檢測數(shù)種磺胺類藥物及其代謝物可分離檢測數(shù)種磺胺類藥物及其代謝物,樣品可用甲醇或堿性緩樣品可用甲醇或堿性緩沖液溶解制備。沖液溶解制備。l流動相流動相中加入適量戊磺酸、己磺酸和辛磺酸離子對試劑中加入適量戊磺酸、己磺酸和辛磺酸離子對試劑,可以改變磺可

56、以改變磺胺類藥物的保留時間和改善峰形。胺類藥物的保留時間和改善峰形。lHPLC的的洗脫方式洗脫方式,一般采用等度洗脫一般采用等度洗脫,若需同時檢測數(shù)種磺胺若需同時檢測數(shù)種磺胺類藥物或多種代謝物類藥物或多種代謝物,可采用梯度洗脫可采用梯度洗脫,通過改變流動相流速通過改變流動相流速(li s)或或配比配比,實現(xiàn)在較短的時間內(nèi)對生物樣品中混合組分或代謝物的實現(xiàn)在較短的時間內(nèi)對生物樣品中混合組分或代謝物的分離。分離。第四十三頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類l由于甲氧芐啶分子結(jié)構(gòu)中不含磺酰胺結(jié)構(gòu)由于甲氧芐啶分子結(jié)構(gòu)中不含磺酰胺結(jié)構(gòu),其堿性較其他其堿性較其他(qt)磺胺類藥物強磺胺類藥物強,在在

57、HPLC分離檢測時分離檢測時,在在ODS柱上會產(chǎn)生一定的柱上會產(chǎn)生一定的拖尾現(xiàn)象拖尾現(xiàn)象,可采用反相離子對色譜法可采用反相離子對色譜法,以十二烷基磺酸或四丁基以十二烷基磺酸或四丁基銨鹽作為反離子銨鹽作為反離子,也可使用掃尾劑三乙胺改善其拖尾現(xiàn)象。但也可使用掃尾劑三乙胺改善其拖尾現(xiàn)象。但離子對色譜法對色譜柱有一定的損害作用離子對色譜法對色譜柱有一定的損害作用,應予注意。應予注意。第四十四頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類l有些用通常的有些用通常的HPLC法難以分離的磺胺類藥物法難以分離的磺胺類藥物,使用使用-環(huán)糊精化學環(huán)糊精化學鍵合固定相很容易達到鍵合固定相很容易達到(d do)分離。分

58、離。l其分離原理其分離原理,是基于當磺胺藥物分子接近或透入到是基于當磺胺藥物分子接近或透入到-環(huán)糊精疏水腔內(nèi)環(huán)糊精疏水腔內(nèi)時可形成包合物時可形成包合物,改變了磺胺類藥物分子的某些理化性質(zhì)。包合改變了磺胺類藥物分子的某些理化性質(zhì)。包合物的穩(wěn)定性與磺胺類藥物分子和物的穩(wěn)定性與磺胺類藥物分子和-環(huán)糊精分子的大小有關(guān)環(huán)糊精分子的大小有關(guān),與與-環(huán)糊精作用強的磺胺類藥物洗脫較難環(huán)糊精作用強的磺胺類藥物洗脫較難,有較長的保留時間有較長的保留時間;與與-環(huán)糊精環(huán)糊精作用弱的磺胺類藥物洗脫容易作用弱的磺胺類藥物洗脫容易,有較短的保留時間有較短的保留時間,據(jù)此據(jù)此,可將磺胺類可將磺胺類藥物分離。藥物分離。l本法

59、選擇的流動相為磷酸鹽緩沖液本法選擇的流動相為磷酸鹽緩沖液(pH7.0)-甲醇甲醇(85+15),可分離可分離7種種磺胺類藥物的混合物。磺胺類藥物的混合物。第四十五頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類紫外檢測器紫外檢測器l磺胺類藥物在磺胺類藥物在250290nm波長區(qū)間有強的紫外吸收波長區(qū)間有強的紫外吸收,因此因此HPLC的在線檢測的在線檢測,一般采用紫外檢測一般采用紫外檢測。l為提高檢測靈敏度為提高檢測靈敏度,可使用可使用(shyng)對二甲氨基苯甲醛對二甲氨基苯甲醛(DMAB) 柱后衍生化柱后衍生化,于于450nm處紫外處紫外-可見光檢測可見光檢測,已應用于蛋、奶已應用于蛋、奶和肌肉組

60、織中和肌肉組織中13種磺胺類藥物的測定種磺胺類藥物的測定,以及動物組織中以及動物組織中6種磺胺類藥物的測定。種磺胺類藥物的測定。第四十六頁，共五十七頁。-獸藥殘留檢測技術(shù)-磺胺類熒光熒光(ynggung)檢測器檢測器l磺胺類藥物本身具有磺胺類藥物本身具有弱的熒光弱的熒光特性特性,但熒光檢測時還需要但熒光檢測時還需要(xyo)熒光衍生化熒光衍生化。l常用的熒光衍生劑有常用的熒光衍生劑有鄰苯二甲醛鄰苯二甲醛(OPA)、熒胺熒胺和和巰基乙醇巰基乙醇等。等。l磺胺類藥物與磺胺類藥物與OPA或其衍生物或其衍生物(如如4-羥基羥基-鄰苯二甲醛鄰苯二甲醛)在酸在酸性介質(zhì)中反應呈現(xiàn)藍色熒光性介質(zhì)中反應呈現(xiàn)藍色