分析化學(xué)高效液相色譜法

1、第十八章 高效液相色譜法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u經(jīng)典液相色譜法為基礎(chǔ)，經(jīng)典液相色譜法為基礎(chǔ)，u引入氣相色譜法的理論和實(shí)驗(yàn)技術(shù)，引入氣相色譜法的理論和實(shí)驗(yàn)技術(shù)，u高壓輸送流動(dòng)相，高壓輸送流動(dòng)相，u高效固定相及高靈敏度檢測(cè)器，高效固定相及高靈敏度檢測(cè)器，u現(xiàn)代液相色譜分析方法。現(xiàn)代液相色譜分析方法?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u顆粒極細(xì)（一般為顆粒極細(xì)（一般為1010 m m以下）、規(guī)則均勻的以下）、規(guī)則均勻的固定相，固定相，( (鍵合相鍵合相) )傳質(zhì)阻抗小，柱效高，分離傳質(zhì)阻抗小，柱效高，分離效率高；效率高；u高壓輸液泵輸送流動(dòng)相，流速快，

2、分析速度高壓輸液泵輸送流動(dòng)相，流速快，分析速度快；快；u高靈敏度檢測(cè)器，靈敏度大大提高。紫外檢測(cè)器高靈敏度檢測(cè)器，靈敏度大大提高。紫外檢測(cè)器最小檢測(cè)限可達(dá)最小檢測(cè)限可達(dá)1010 9 9g g，而熒光檢測(cè)器最小檢測(cè)限，而熒光檢測(cè)器最小檢測(cè)限可達(dá)可達(dá)1010 1212g g。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u不受試樣的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，應(yīng)不受試樣的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，應(yīng)用范圍廣；用范圍廣；u可選用各種溶劑作為流動(dòng)相，對(duì)分離的選可選用各種溶劑作為流動(dòng)相，對(duì)分離的選擇性有很大作用，選擇性高；擇性有很大作用，選擇性高；u一般在室溫條件下進(jìn)行分離，不需要高柱溫。一般在室溫條

3、件下進(jìn)行分離，不需要高柱溫。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法一、主要類(lèi)型主要類(lèi)型 四類(lèi)基本類(lèi)型色譜法四類(lèi)基本類(lèi)型色譜法 分配色譜法（分配色譜法（partition chromatographypartition chromatography）吸附色譜法（吸附色譜法（adsorption chromatographyadsorption chromatography）離子交換色譜法（離子交換色譜法（IECIEC）空間排阻色譜法（空間排阻色譜法（SECSEC）現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法第一節(jié) 高效液相色譜法的主要類(lèi)型和原理 一、主要類(lèi)型 四類(lèi)基本類(lèi)型

4、色譜法 分配色譜法（partition chromatography）吸附色譜法（adsorption chromatography）離子交換色譜法（IEC）空間排阻色譜法（SEC）化學(xué)鍵合相色譜法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法其他色譜類(lèi)型其他色譜類(lèi)型u親合色譜法親合色譜法（affinity chromatographyaffinity chromatography；ACAC）u手性色譜法手性色譜法（chiral chromatographychiral chromatography；CCCC）u膠束色譜法膠束色譜法（micellar chromatographymice

5、llar chromatography；MCMC）u電色譜法電色譜法（electrochromatographyelectrochromatography；ECEC）現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u以化學(xué)鍵合相為固定相的色譜法，簡(jiǎn)稱(chēng)鍵合相以化學(xué)鍵合相為固定相的色譜法，簡(jiǎn)稱(chēng)鍵合相色譜法色譜法(bonded phase chromatography(bonded phase chromatography；BPC)BPC)u化學(xué)鍵合相：采用化學(xué)反應(yīng)的方法將官能團(tuán)化學(xué)鍵合相：采用化學(xué)反應(yīng)的方法將官能團(tuán)鍵合在載體表面所形成的固定相鍵合在載體表面所形成的固定相 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八頁(yè)，共

6、54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：u固定相的均一性和穩(wěn)定性好，在使用過(guò)程固定相的均一性和穩(wěn)定性好，在使用過(guò)程中不易流失，使用周期長(zhǎng)；中不易流失，使用周期長(zhǎng)；u柱效高；重現(xiàn)性好；柱效高；重現(xiàn)性好；u能使用的流動(dòng)相和鍵合相的種類(lèi)多，分離的能使用的流動(dòng)相和鍵合相的種類(lèi)多，分離的選擇性高選擇性高正相（正相（normal phasenormal phase，NPNP）和反相（）和反相（reversed reversed phasephase，RPRP）鍵合相色譜法）鍵合相色譜法：根據(jù)化學(xué)鍵合相與流動(dòng)相極性的相對(duì)強(qiáng)弱根據(jù)化學(xué)鍵合相與流動(dòng)相極性的相對(duì)強(qiáng)弱現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相

7、色譜法u固定相：固定相：極性鍵合相極性鍵合相如氰基（如氰基（CNCN）、氨基（）、氨基（NHNH2 2）或二羥基鍵）或二羥基鍵合硅膠。（經(jīng)典：水飽和的硅膠）合硅膠。（經(jīng)典：水飽和的硅膠） u流動(dòng)相：流動(dòng)相：非極性或弱極性溶劑加極性調(diào)整劑非極性或弱極性溶劑加極性調(diào)整劑如烷烴加醇類(lèi)。（與水不混溶的溶劑）如烷烴加醇類(lèi)。（與水不混溶的溶劑）u適用范圍：適用范圍：溶于有機(jī)溶劑的極性至中等極性的分溶于有機(jī)溶劑的極性至中等極性的分子型化合物子型化合物如一些在硅膠柱上分離的物質(zhì)如一些在硅膠柱上分離的物質(zhì)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u分離機(jī)制？ 分配：把有機(jī)鍵合層作為一個(gè)液膜看待，溶質(zhì)在

8、兩相的溶解 吸附：溶質(zhì)與鍵合極性基團(tuán)間的誘導(dǎo)、氫鍵和定向作用u分離選擇性：極性強(qiáng)的組分k大，后洗脫出柱。流動(dòng)相的極性增強(qiáng)，洗脫能力增加，使組分k減小，tR 減小?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十一頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u固定相固定相：非極性鍵合相：非極性鍵合相 如十八烷基硅烷（如十八烷基硅烷（C C1818，ODSODS）、辛烷基（）、辛烷基（C C8 8）鍵合）鍵合硅膠硅膠 u流動(dòng)相流動(dòng)相：水水為基礎(chǔ)溶劑，加入一定量與水混溶為基礎(chǔ)溶劑，加入一定量與水混溶的極性調(diào)整劑的極性調(diào)整劑 常用甲醇水、乙腈水等常用甲醇水、乙腈水等 應(yīng)用：最廣應(yīng)用：最廣 非極性至中等極性的組分，非極性至中等極性的組分，（還

9、有有機(jī)酸、堿及鹽等）（還有有機(jī)酸、堿及鹽等） 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十二頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法保留機(jī)制保留機(jī)制 疏溶劑疏溶劑 （solvophobic theorysolvophobic theory）溶質(zhì)的保留主要是溶質(zhì)分子與極性溶劑分子間的排斥力，促使溶質(zhì)分子與鍵合相的烴基發(fā)生疏水締合。不是溶質(zhì)分子與鍵合相間的色散力?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十三頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u保留行為的主要影響因素保留行為的主要影響因素1 1、溶質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)（極性）、溶質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)（極性） 極性越弱，疏水性越強(qiáng)，極性越弱，疏水性越強(qiáng)，k k越大，越大，t tR R也越大也越大。 同系物碳數(shù)越多，極性越弱

10、，同系物碳數(shù)越多，極性越弱，k k越大；越大； 引入極性取代基，降低疏水性，引入極性取代基，降低疏水性，k k值變小。值變小。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十四頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法2 2、固定相、固定相 鍵合烷基的疏水性隨鍵合烷基的疏水性隨碳鏈的延長(zhǎng)碳鏈的延長(zhǎng)而增而增 加，溶質(zhì)的加，溶質(zhì)的k k也增大。也增大。 硅膠表面硅膠表面鍵合烷基的濃度越大鍵合烷基的濃度越大，則溶則溶 質(zhì)的質(zhì)的k k越大越大。 反相鍵合相色譜法u保留行為的主要影響因素現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十五頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u保留行為的主要影響因素保留行為的主要影響因素3 3、流動(dòng)相、流動(dòng)相 極性越強(qiáng)，洗脫能力越弱，使溶質(zhì)

11、的極性越強(qiáng)，洗脫能力越弱，使溶質(zhì)的k k越大越大 溶劑種類(lèi)溶劑種類(lèi)：水為弱溶劑，醇為強(qiáng)溶劑：水為弱溶劑，醇為強(qiáng)溶劑 溶劑溶劑比例比例：水的比例增加，使：水的比例增加，使k k增大增大 中性鹽的中性鹽的加入加入：使中性溶質(zhì)的：使中性溶質(zhì)的k k增大增大 pHpH：影響弱：影響弱酸、弱減的離解酸、弱減的離解 流動(dòng)相的流動(dòng)相的pHpH降低，弱酸降低，弱酸k k增大，增大，t tR R增大；增大； 弱堿弱堿k k變小。變小?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十六頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u離子抑制色譜法（離子抑制色譜法（ion suppression ion suppression chromatography

12、chromatography；ISC ISC ）u用少量弱酸、弱堿或緩沖溶液，調(diào)節(jié)流動(dòng)相的用少量弱酸、弱堿或緩沖溶液，調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pHpH，抑制有機(jī)弱酸、弱堿的離解，增加疏水締合作抑制有機(jī)弱酸、弱堿的離解，增加疏水締合作用，使用，使k k變大。變大。u適用于適用于3p3pK Ka7a7的弱酸、的弱酸、7p7pK Ka8a8的弱堿的弱堿現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十七頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法 把離子對(duì)試劑加入到含水流動(dòng)相中，組把離子對(duì)試劑加入到含水流動(dòng)相中，組分離子在流動(dòng)相中與離子對(duì)試劑的反離分離子在流動(dòng)相中與離子對(duì)試劑的反離子（子（counter ioncounter ion）生成）生成中性離子

13、對(duì)中性離子對(duì)，增，增加溶質(zhì)與非極性固定相的作用，使加溶質(zhì)與非極性固定相的作用，使k k增加，增加，改善分離效果。改善分離效果。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十八頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法離子對(duì)模型離子對(duì)模型33+()+3s3(+固定相+()+B)+B + H+BHRSO NaRSO + Na+BHRSORSO)BH離子對(duì)mB+AB AmA(smBAmmmsmsBAAABABBABEK流動(dòng)相通式現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十九頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法影響容量因子的因素影響容量因子的因素離子對(duì)試劑的種類(lèi)和濃度離子對(duì)試劑的種類(lèi)和濃度：碳鏈長(zhǎng)度增加，溶：碳鏈長(zhǎng)度增加，溶質(zhì)的質(zhì)的k k增大；在一定范圍內(nèi)試劑的

14、濃度升高，溶增大；在一定范圍內(nèi)試劑的濃度升高，溶質(zhì)的質(zhì)的k k增大增大 流動(dòng)相的流動(dòng)相的pHpH：有利于組分和離子對(duì)試劑離子化：有利于組分和離子對(duì)試劑離子化時(shí)（離子對(duì)的形成），組分的時(shí)（離子對(duì)的形成），組分的k k值最大值最大固定相固定相 、流動(dòng)相性質(zhì)、流動(dòng)相性質(zhì)（同一般（同一般RP-HPLCRP-HPLC）。）。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u適用范圍適用范圍：有機(jī)酸、堿、鹽，離子型和非離子型化合：有機(jī)酸、堿、鹽，離子型和非離子型化合物的混合物。物的混合物。u分析酸類(lèi)或帶負(fù)電荷物質(zhì)分析酸類(lèi)或帶負(fù)電荷物質(zhì)：用季銨鹽，如四丁基銨：用季銨鹽，如四丁基銨磷酸鹽（磷酸鹽（TB

15、ATBA）和溴化十六烷基三甲基銨（）和溴化十六烷基三甲基銨（CTABCTAB）等。）等。u分析堿類(lèi)或帶正電荷的物質(zhì)分析堿類(lèi)或帶正電荷的物質(zhì)：用烷基磺酸鹽或硫酸：用烷基磺酸鹽或硫酸鹽，如正戊烷基磺酸鈉（鹽，如正戊烷基磺酸鈉（PICBPICB5 5）、正己烷基磺酸鈉）、正己烷基磺酸鈉（PICBPICB6 6）。）?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十一頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十二頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u固定相應(yīng)符合下列要求固定相應(yīng)符合下列要求：顆粒細(xì)且均勻；顆粒細(xì)且均勻；傳質(zhì)快；傳質(zhì)快；機(jī)械強(qiáng)度高，能耐高壓；機(jī)械強(qiáng)度高，能耐高壓；化學(xué)穩(wěn)定性好，不與流動(dòng)相發(fā)生化學(xué)化學(xué)穩(wěn)定性好

16、，不與流動(dòng)相發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。反應(yīng)?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十三頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法（一）鍵合相的種類(lèi)（一）鍵合相的種類(lèi) 非極性鍵合相非極性鍵合相 ：非極性烴基，如非極性烴基，如C C1818C C8 8C C1 1與苯基等鍵合在硅膠表面；與苯基等鍵合在硅膠表面；用于反相色譜；用于反相色譜；長(zhǎng)鏈烷基可使溶質(zhì)的長(zhǎng)鏈烷基可使溶質(zhì)的k k增大，選擇性改善，載樣量提高，增大，選擇性改善，載樣量提高，穩(wěn)定性更好。穩(wěn)定性更好?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十四頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法 鍵合相的種類(lèi)鍵合相的種類(lèi)u弱極性鍵合相：弱極性鍵合相： 醚基和二羥基等鍵合相醚基和二羥基等鍵合相用于反相或正相色譜用于反

17、相或正相色譜u極性鍵合相：極性鍵合相：常用氨基常用氨基氰基鍵合相（氰乙硅烷基氰基鍵合相（氰乙硅烷基Si(CHSi(CH2 2) )2 2CN)CN)鍵合硅膠鍵合硅膠一般用于正相色譜一般用于正相色譜 u特殊用途的鍵合相特殊用途的鍵合相現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十五頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u鍵合反應(yīng)鍵合反應(yīng) 硅氧烷（硅氧烷（SiSiO OSiSiC C）型：氯硅烷與硅）型：氯硅烷與硅膠進(jìn)行膠進(jìn)行硅烷化反應(yīng)硅烷化反應(yīng) 如：YWGC18H37，無(wú)定形硅膠YWG上鍵合了十八硅烷基；Spherisorb ODS，球形硅膠Spherisorb 上鍵合了ODS。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十六頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高

18、效液相色譜法u鍵合相的性質(zhì)鍵合相的性質(zhì)含碳量：含碳的百分?jǐn)?shù)含碳量：含碳的百分?jǐn)?shù) 覆蓋度覆蓋度 ：已反應(yīng)的硅醇基數(shù)目占硅膠表面硅醇：已反應(yīng)的硅醇基數(shù)目占硅膠表面硅醇基總數(shù)的比例基總數(shù)的比例 封尾（封尾（end-cappingend-capping）：在鍵合反應(yīng)后，用三）：在鍵合反應(yīng)后，用三甲基氯硅烷等進(jìn)行鈍化處理，減少殘余硅醇基。甲基氯硅烷等進(jìn)行鈍化處理，減少殘余硅醇基。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十七頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u鍵合相的特點(diǎn)鍵合相的特點(diǎn)使用過(guò)程中不流失；使用過(guò)程中不流失；化學(xué)穩(wěn)定性好；化學(xué)穩(wěn)定性好；適于梯度洗脫；適于梯度洗脫；載樣量大載樣量大 u注意注意：流動(dòng)相的流動(dòng)相的pHp

19、H一般應(yīng)在一般應(yīng)在3-83-8，否則會(huì)引起硅膠，否則會(huì)引起硅膠溶解；溶解；( (也有適用寬也有適用寬pHpH范圍的鍵合相范圍的鍵合相) )。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十八頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u對(duì)流動(dòng)相的要求：對(duì)流動(dòng)相的要求：與固定相不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。與固定相不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。對(duì)試樣有適宜的溶解度。使對(duì)試樣有適宜的溶解度。使k k在在1 11010范圍內(nèi)，范圍內(nèi)，與檢測(cè)器相適應(yīng)。例如用紫外檢測(cè)器時(shí)，選用與檢測(cè)器相適應(yīng)。例如用紫外檢測(cè)器時(shí)，選用截止波長(zhǎng)小于檢測(cè)波長(zhǎng)的溶劑。截止波長(zhǎng)小于檢測(cè)波長(zhǎng)的溶劑。純度高，粘度小。低粘度流動(dòng)相如甲醇純度高，粘度小。低粘度流動(dòng)相如甲醇乙腈等乙腈等可以降低柱壓，提

20、高柱效?？梢越档椭鶋海岣咧?。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十九頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法（一）（一）流動(dòng)相對(duì)分離的影響流動(dòng)相對(duì)分離的影響n n由色譜柱（固定相）性能決定，由色譜柱（固定相）性能決定，主要受溶劑種類(lèi)的影響，主要受溶劑種類(lèi)的影響，k k受溶劑配比的影響。受溶劑配比的影響。 2211-4nkkR現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法（二）流動(dòng)相的強(qiáng)度和選擇性（二）流動(dòng)相的強(qiáng)度和選擇性u(píng)溶劑的極性（強(qiáng)度）溶劑的極性（強(qiáng)度）正相色譜：溶劑極性越強(qiáng)，洗脫能力越強(qiáng)正相色譜：溶劑極性越強(qiáng)，洗脫能力越強(qiáng) 反相色譜：極性弱的溶劑洗脫能力強(qiáng)反相色譜：極性弱的溶劑洗脫能力強(qiáng) u溶劑的

21、選擇性溶劑的選擇性不同種類(lèi)的溶劑，分子間的作用力不同，故不同種類(lèi)的溶劑，分子間的作用力不同，故選擇性不同選擇性不同 u混合溶劑混合溶劑（二元或多元流動(dòng)相）（二元或多元流動(dòng)相）現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十一頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u（一）一）HPLCHPLC中的速率理論中的速率理論渦流擴(kuò)散渦流擴(kuò)散A A=2=2ddp p 球形、小粒度、均勻（球形、小粒度、均勻（RSDRSD5%5%）固定相，）固定相，勻漿高壓填充，以降低勻漿高壓填充，以降低A A?？v向擴(kuò)散縱向擴(kuò)散=2=2DDm m 可以忽略可以忽略。 因?yàn)橐驗(yàn)镈 Dl l很小，室溫操作，且很小，室溫操作，且U U大于大于U U最佳最佳，現(xiàn)在學(xué)

22、習(xí)的是第三十二頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u傳質(zhì)阻抗u固定相傳質(zhì)阻抗CS可以忽略 ，因df極小u流動(dòng)相傳質(zhì)阻抗Cm u要求： dp小，Dm大m2PmmDdC現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十三頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u靜態(tài)流動(dòng)相傳質(zhì)阻抗靜態(tài)流動(dòng)相傳質(zhì)阻抗：u由于部分流動(dòng)相在固定相微孔內(nèi)的滯留由于部分流動(dòng)相在固定相微孔內(nèi)的滯留u靜態(tài)流動(dòng)相傳質(zhì)阻抗系數(shù)靜態(tài)流動(dòng)相傳質(zhì)阻抗系數(shù)C Csmsm uC Csm sm ddp p2 2， C Csm sm 1 1/D/Dm m，而，而D Dm mTT/ / u要求要求: : 固定相固定相d dp p2 2、 流動(dòng)相流動(dòng)相都小都小現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十四頁(yè)，共

23、54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法H H = =A A + + C Cm mu u + + C Csmsmu u 原因原因：化學(xué)鍵合相，液體流動(dòng)相：化學(xué)鍵合相，液體流動(dòng)相結(jié)果結(jié)果：HPLCHPLC的實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)該是：小粒的實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)該是：小粒度、均勻的球形化學(xué)鍵合相；低粘度度、均勻的球形化學(xué)鍵合相；低粘度流動(dòng)相，流速不宜過(guò)快；柱溫適當(dāng)。流動(dòng)相，流速不宜過(guò)快；柱溫適當(dāng)。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十五頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u固定相固定相極性鍵合相如氰基、氨基鍵合相等極性鍵合相如氰基、氨基鍵合相等u流動(dòng)相流動(dòng)相烷烴加適量極性調(diào)節(jié)劑烷烴加適量極性調(diào)節(jié)劑現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十六頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相

24、色譜法u固定相固定相非極性鍵合相如非極性鍵合相如ODSODSu流動(dòng)相流動(dòng)相以水為基礎(chǔ)溶劑，加入甲醇、以水為基礎(chǔ)溶劑，加入甲醇、 乙腈等極性調(diào)節(jié)劑乙腈等極性調(diào)節(jié)劑弱酸、弱堿或緩沖鹽作為離子抑制劑弱酸、弱堿或緩沖鹽作為離子抑制劑加入加入0.1%0.1%1%1%的醋酸鹽、磷酸鹽可減的醋酸鹽、磷酸鹽可減少殘余硅醇基的作用少殘余硅醇基的作用 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十七頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u固定相固定相 盡可能選擇表面覆蓋度高且疏盡可能選擇表面覆蓋度高且疏水性強(qiáng)的非極性鍵合相，水性強(qiáng)的非極性鍵合相，u離子對(duì)試劑離子對(duì)試劑 離子對(duì)試劑所帶的電荷離子對(duì)試劑所帶的電荷應(yīng)與試樣離子的電荷相反應(yīng)與試樣離子

25、的電荷相反 u流動(dòng)相流動(dòng)相pHpH使試樣組分與離子對(duì)試劑全部使試樣組分與離子對(duì)試劑全部離子化離子化u有機(jī)溶劑及其濃度有機(jī)溶劑及其濃度 同一般同一般HPLCHPLC 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十八頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u組成組成輸液系統(tǒng)輸液系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)色譜柱系統(tǒng)色譜柱系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng)數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng) 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十九頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u高壓輸液泵高壓輸液泵恒流泵：在輸送流動(dòng)相過(guò)程中流量恒定。恒流泵：在輸送流動(dòng)相過(guò)程中流量恒定。常用柱塞往復(fù)泵常用柱塞往復(fù)泵雙泵：為了克服流量的脈動(dòng)。雙泵：為了克服流量的脈動(dòng)。 有串聯(lián)式和并聯(lián)式有串聯(lián)式和并聯(lián)式現(xiàn)在

26、學(xué)習(xí)的是第四十頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法輸液泵應(yīng)具備的性能：輸液泵應(yīng)具備的性能：u流量精度高且穩(wěn)定流量精度高且穩(wěn)定u流量范圍寬流量范圍寬u能在高壓下連續(xù)工作能在高壓下連續(xù)工作u液缸容積小液缸容積小u密封性能好，耐腐蝕密封性能好，耐腐蝕 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十一頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法輸液泵操作注意事項(xiàng)：輸液泵操作注意事項(xiàng)：u防止固體微粒進(jìn)入泵體防止固體微粒進(jìn)入泵體u流動(dòng)相不應(yīng)含有腐蝕性物質(zhì)流動(dòng)相不應(yīng)含有腐蝕性物質(zhì)u防止溶劑瓶?jī)?nèi)的流動(dòng)相被用完防止溶劑瓶?jī)?nèi)的流動(dòng)相被用完u不超過(guò)規(guī)定的最高壓力不超過(guò)規(guī)定的最高壓力u流動(dòng)相一般應(yīng)該先脫氣流動(dòng)相一般應(yīng)該先脫氣現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十二頁(yè)，共5

27、4頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u進(jìn)樣器進(jìn)樣器進(jìn)樣閥（六通閥）、自動(dòng)進(jìn)樣裝置進(jìn)樣閥（六通閥）、自動(dòng)進(jìn)樣裝置u色譜柱色譜柱（columncolumn） 由柱管和固定相組成由柱管和固定相組成分析柱、制備柱分析柱、制備柱 性能評(píng)價(jià)性能評(píng)價(jià) H H、n n、f fs s、k k和和的重復(fù)性，或的重復(fù)性，或R R。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十三頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u（一）檢測(cè)器（一）檢測(cè)器(detector)(detector)的主要性能的主要性能要求要求： 靈靈敏度（敏度（sensitivitysensitivity）高（檢測(cè)限低）噪音）高（檢測(cè)限低）噪音（noisenoise）低）低 線性范線性

28、范圍（圍（linear rangelinear range）寬）寬 重復(fù)性重復(fù)性（repeatabilityrepeatability）好）好 適用范圍適用范圍廣（通用型、專(zhuān)屬型）廣（通用型、專(zhuān)屬型） 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十四頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u檢測(cè)原理： 朗伯比爾 (Lambert-Beer) 定律，響應(yīng)信號(hào)（吸光度）與濃度成正比A=Clu特點(diǎn)： 靈敏度較高（10-610-9 g/ml），噪音低，線性范圍寬，穩(wěn)定性好，適于梯度，不破壞樣品，應(yīng)用廣（分析、制備）?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十五頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u局限局限：只能檢測(cè)有紫外吸收的物質(zhì)，流動(dòng)只能檢測(cè)有紫外吸收的

29、物質(zhì)，流動(dòng)相的截止波長(zhǎng)應(yīng)小于檢測(cè)波長(zhǎng)。相的截止波長(zhǎng)應(yīng)小于檢測(cè)波長(zhǎng)。 u專(zhuān)屬型、濃度型檢測(cè)器專(zhuān)屬型、濃度型檢測(cè)器現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十六頁(yè)，共54頁(yè)第十八章 高效液相色譜法u固定波長(zhǎng)檢測(cè)器固定波長(zhǎng)檢測(cè)器 ：254nm254nmu可變波長(zhǎng)檢測(cè)器：可變波長(zhǎng)檢測(cè)器：光源：氘燈（和鎢燈），光源：氘燈（和鎢燈）， 200200400400（800800）nmnm， 單色器，單色器，流通池（試樣），光電管流通池（試樣），光電管光路系統(tǒng)和紫外分光光度計(jì)相似光路系統(tǒng)和紫外分光光度計(jì)相似 u光電二極管陣列檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器 (photodiode array detector(photodiode array detector； PDAD)PDAD)：一系列光電二極管，一個(gè)二極管對(duì)應(yīng)接受光譜上約一系列光電二極管，一個(gè)