液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)應(yīng)用

1、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)應(yīng)用電噴霧電離源電噴霧電離源 ESINeedle噴霧針噴霧針多層套管構(gòu)成多層套管構(gòu)成溶液溶液霧化氣（霧化氣（N2/Air）Nebulizing Gas干燥氣干燥氣Drying Gas（N2）加快溶劑揮發(fā)加快溶劑揮發(fā)電噴霧電離源電噴霧電離源 ESITaylor錐錐庫庫 侖侖 分分 裂裂Rayleigh穩(wěn)定限穩(wěn)定限形成正形成正/負氣相離子負氣相離子被吸入質(zhì)量分析器被吸入質(zhì)量分析器大氣壓化學(xué)電離源大氣壓化學(xué)電離源 APCINeedle噴霧針噴霧針（加熱）（加熱）Corona Needle電暈針電暈針reagent gas試劑氣試劑氣離子離子-分子反應(yīng)分子反應(yīng) 禁止高濃度待測樣品禁

2、止高濃度待測樣品 1ppm 禁止用洗滌劑清洗玻璃容器禁止用洗滌劑清洗玻璃容器 禁止用塑料容器裝有機溶劑禁止用塑料容器裝有機溶劑 禁止用不揮發(fā)性緩沖鹽禁止用不揮發(fā)性緩沖鹽 禁止高濃度有機緩沖鹽禁止高濃度有機緩沖鹽 10mM 禁止無機樣品進樣禁止無機樣品進樣 采用等度洗脫采用等度洗脫 采用甲醇作為流動相采用甲醇作為流動相 比例偏大比例偏大 采用小內(nèi)徑的色譜柱采用小內(nèi)徑的色譜柱 如如2.1mm2.1mm 除除MRM模式模式 不能超過不能超過4個通道個通道 一個色譜峰的數(shù)據(jù)點在一個色譜峰的數(shù)據(jù)點在15-2515-25個個 ESI廣泛適用廣泛適用 APCI APCI效果更佳效果更佳 正模式廣泛適用正模式

3、廣泛適用 負模式本底更低，信噪比更高負模式本底更低，信噪比更高影響分子量測定的因素v1）pH的影響：正離子方式的影響：正離子方式pH要低些，負離子方式要低些，負離子方式pH要高些，除對離子化有影響，還影響要高些，除對離子化有影響，還影響LC的峰形。的峰形。v2）氣流和溫度：水含量高及流量大時要相應(yīng)增加。）氣流和溫度：水含量高及流量大時要相應(yīng)增加。v3）溶劑和緩沖液流量：流速適當(dāng)高可以提高出峰的）溶劑和緩沖液流量：流速適當(dāng)高可以提高出峰的靈敏度。靈敏度。v4）溶劑和緩沖液的類型：通常正離子用甲醇好，負）溶劑和緩沖液的類型：通常正離子用甲醇好，負離子乙腈好些離子乙腈好些v5）選擇合適的液相色譜類型

4、：正相、反相、選擇合）選擇合適的液相色譜類型：正相、反相、選擇合適的色譜柱適的色譜柱v6）合適的電壓：）合適的電壓：DP電壓高時，樣品在源內(nèi)電壓高時，樣品在源內(nèi)分解或碎裂；高分解或碎裂；高DP電壓時會使多電荷離子比電壓時會使多電荷離子比例低，多聚體也減少例低，多聚體也減少v7）樣品結(jié)構(gòu)和性質(zhì)）樣品結(jié)構(gòu)和性質(zhì)v8）雜質(zhì)的影響：溶劑的純度、水的純凈程度）雜質(zhì)的影響：溶劑的純度、水的純凈程度等。當(dāng)成分復(fù)雜，雜質(zhì)太多時，競爭使被測等。當(dāng)成分復(fù)雜，雜質(zhì)太多時，競爭使被測物離子化不好，同時使物離子化不好，同時使LC分離不好分離不好v9）樣品濃度）樣品濃度分子量測定中的誤判分子量測定中的誤判v溶劑中的雜質(zhì)溶

5、劑中的雜質(zhì)v來自于塑料添加劑的峰來自于塑料添加劑的峰v樣品容器不干凈，常見表面活性劑的峰樣品容器不干凈，常見表面活性劑的峰v進樣系統(tǒng)污染進樣系統(tǒng)污染v樣品在源內(nèi)碎裂，形成碎片離子樣品在源內(nèi)碎裂，形成碎片離子分子量測定失敗的原因va）流動相不合適）流動相不合適vb）不揮發(fā)性鹽的影響）不揮發(fā)性鹽的影響vc）成分復(fù)雜，雜質(zhì)太多）成分復(fù)雜，雜質(zhì)太多vd) 樣品濃度不夠樣品濃度不夠ve）pH值不合適值不合適vf）樣品在源內(nèi)分解或碎裂）樣品在源內(nèi)分解或碎裂目標化合物分析目標化合物分析v（1）選擇離子監(jiān)測（）選擇離子監(jiān)測（SIM） SIM用于檢測已知或目標化合物，比全掃描用于檢測已知或目標化合物，比全掃描方

6、式能得到更高的靈敏度。這種數(shù)據(jù)采集方式能得到更高的靈敏度。這種數(shù)據(jù)采集的方式一般用在定量目標化合物之前，而的方式一般用在定量目標化合物之前，而且往往需要已知化合物的性質(zhì)。且往往需要已知化合物的性質(zhì)。 若幾種目標化合物用同樣的數(shù)據(jù)采集方式監(jiān)若幾種目標化合物用同樣的數(shù)據(jù)采集方式監(jiān)測，那么可以同時測定幾種離子。測，那么可以同時測定幾種離子。（2 2）母離子掃描）母離子掃描v母離子分析可用來鑒定和確認類型已知的化母離子分析可用來鑒定和確認類型已知的化合物，盡管它們的母離子的質(zhì)量可以不同，合物，盡管它們的母離子的質(zhì)量可以不同，但在分裂過程中會生成共同的子離子，這種但在分裂過程中會生成共同的子離子，這種掃

7、描功能在藥物代謝研究中十分重要。掃描功能在藥物代謝研究中十分重要。 (3) 中性丟失掃描中性丟失掃描 中性丟失掃描分析可用來鑒定和確認類型中性丟失掃描分析可用來鑒定和確認類型已知的化合物，例如新生兒遺傳疾病篩查已知的化合物，例如新生兒遺傳疾病篩查中某些檢測項目。也可以幫助進行未知物中某些檢測項目。也可以幫助進行未知物結(jié)構(gòu)判斷，例如有中性丟失結(jié)構(gòu)判斷，例如有中性丟失18Da的意味著的意味著-H2O，28-CO，30-HCOH，32-CH3OH，44-CO2等等。等等。三、三、LC-MS的應(yīng)用的應(yīng)用v醫(yī)藥學(xué)：藥物代謝、藥物動力學(xué)、雜質(zhì)分析、天然產(chǎn)物分析醫(yī)藥學(xué)：藥物代謝、藥物動力學(xué)、雜質(zhì)分析、天然產(chǎn)

8、物分析v生物化學(xué)：肽、蛋白質(zhì)、寡核苷酸、糖生物化學(xué)：肽、蛋白質(zhì)、寡核苷酸、糖v環(huán)境化學(xué)：農(nóng)藥和農(nóng)殘分析、有機污染物、土壤環(huán)境化學(xué)：農(nóng)藥和農(nóng)殘分析、有機污染物、土壤/食品食品/水分析水分析v臨床醫(yī)學(xué)：新生兒檢查、糖化血紅蛋白（糖尿?。⒀t蛋臨床醫(yī)學(xué)：新生兒檢查、糖化血紅蛋白（糖尿?。?、血紅蛋白變異、膽酸白變異、膽酸v食品科學(xué)：香料、添加物、包裝物、蛋白質(zhì)、致癌物食品科學(xué)：香料、添加物、包裝物、蛋白質(zhì)、致癌物v法醫(yī)學(xué)：濫用藥物、爆炸物、興奮劑檢測法醫(yī)學(xué)：濫用藥物、爆炸物、興奮劑檢測v獸醫(yī)學(xué)：興奮劑、磺胺類藥物、抗體獸醫(yī)學(xué)：興奮劑、磺胺類藥物、抗體v合成化學(xué)：有機金屬化合物、有機合成物合成化學(xué)：有

9、機金屬化合物、有機合成物v有機化學(xué)：表面活性劑、染料有機化學(xué)：表面活性劑、染料ONNHNNHOONNHNNHONCOOHONNOHH3CH值 m/z 應(yīng)的是所選所選擇的兩個峰 x,x1n1nM x nnMx21211314+tR=17.67min的色譜峰，一級質(zhì)譜數(shù)據(jù)的色譜峰，一級質(zhì)譜數(shù)據(jù)(ESI，MS其為含量最大的峰，結(jié)合杯莧甾酮其為含量最大的峰，結(jié)合杯莧甾酮(分分子量為子量為520.3)是川牛膝的主要成分，推測該離子峰為杯莧甾酮分子加合一個甲酸根后是川牛膝的主要成分，推測該離子峰為杯莧甾酮分子加合一個甲酸根后形成的準分離子峰形成的準分離子峰M+HCOO-。又其二級碎片圖中有。又其二級碎片圖

10、中有m/z=519.2，其應(yīng)為杯莧甾酮分，其應(yīng)為杯莧甾酮分子失去一個質(zhì)子形成的碎片離子峰子失去一個質(zhì)子形成的碎片離子峰M-H-。有。有m/z=501.4，這應(yīng)是由于甾酮類物質(zhì)中，這應(yīng)是由于甾酮類物質(zhì)中含有較多的羥基，其施加碰撞能后以水分子的形式失去而形成碎片離子峰含有較多的羥基，其施加碰撞能后以水分子的形式失去而形成碎片離子峰M-H-H2O-。再結(jié)合其它的碎片離子與杯莧甾酮的結(jié)構(gòu)相符，因此推斷該化合物為杯莧甾酮。再結(jié)合其它的碎片離子與杯莧甾酮的結(jié)構(gòu)相符，因此推斷該化合物為杯莧甾酮。tR=16.22min的色譜峰，一級質(zhì)譜數(shù)據(jù)的色譜峰，一級質(zhì)譜數(shù)據(jù),結(jié)合川牛膝中成分結(jié)合川牛膝中成分b-b-胡羅卜

11、苷的分子量胡羅卜苷的分子量(576.2)推推測其是測其是b b-胡羅卜苷分子失去一個質(zhì)子而形成的準分子離子峰胡羅卜苷分子失去一個質(zhì)子而形成的準分子離子峰M-H-。再結(jié)合。再結(jié)合b b-胡羅卜胡羅卜苷的結(jié)構(gòu)中含有羥基以及其二級質(zhì)譜的碎片離子苷的結(jié)構(gòu)中含有羥基以及其二級質(zhì)譜的碎片離子531.2M-H-H2O-, 513.0M-H-2H2O-, 431.1、341.0、233.2，與，與b-b-胡羅卜苷的結(jié)構(gòu)相符，因此推斷該化合物為胡羅卜苷的結(jié)構(gòu)相符，因此推斷該化合物為b-b-胡羅卜苷。胡羅卜苷。通過對樣品進行分子離子峰的掃描發(fā)現(xiàn)通過對樣品進行分子離子峰的掃描發(fā)現(xiàn)M-H-的峰中有一個的峰中有一個很強的很強的407，根據(jù)樣品處理過程以及對復(fù)方各單味藥材的研，根據(jù)