其他化學(xué)污染

1、3.3 食品中其他化學(xué)污染物的檢驗(yàn)3.3.1 食品中有害金屬鉛、砷、汞、鎘的檢驗(yàn) 一、食品中鉛的檢驗(yàn)鉛常溫下呈灰藍(lán)色固體，鉛的化合物主要有鉛的氧化物和鉛鹽，其中硝酸鉛在水中的溶解度最大。鉛鋅礦鉛銻化鉛顆粒鉛在自然界中的分布及用途廣泛。食品中鉛的來(lái)源主要有：1、植物通過(guò)根部直接吸收土壤中溶解狀態(tài)的鉛；2、食品在生產(chǎn)、加工、包裝、運(yùn)輸過(guò)程中接觸到的設(shè)備、工具、容器及包裝材料都可能含有鉛，在一定條件鉛逐漸會(huì)進(jìn)入食品中；3、工業(yè)“三廢”污染環(huán)境，從而污染食品。 鉛不是人體的必須元素，在體內(nèi)有積蓄作用，主要表現(xiàn)在對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、骨骼系統(tǒng)等終生性的傷害 。特別是鉛可嚴(yán)重影響嬰幼兒和少年兒

2、童的生長(zhǎng)發(fā)育和智力。 我國(guó)各類(lèi)食品鉛的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：乳類(lèi)(鮮) 0.05mg/L，皮蛋、茶葉、赤砂糖、干食用菌、銀耳2mg/L。 炸薯?xiàng)l、松花蛋和爆米花 等食品鉛含量高。(一)石墨爐原子吸收光譜法1.原理 樣品經(jīng)干灰化或酸消化后，注入石墨爐中，高溫原子化后吸收波長(zhǎng)283.3nm共振線，一定濃度范圍內(nèi)，吸光度值與鉛濃度呈正比，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。2.樣品處理 可以根據(jù)樣品和實(shí)驗(yàn)室條件，選擇：(1)壓力消解罐消解法 (2)干灰化法(3)過(guò)硫酸銨灰化法 (4)濕消化法GB/T 5009.12-2003 3.測(cè)定 (1)儀器條件 波長(zhǎng)283.3nm；狹縫0.2nm10nm;燈電流5mA7mA;干燥溫度120，

3、20s;灰化溫度450，15s20s;原子化溫度17002300，4s5s;背景校正為氘燈或賽曼效應(yīng)。(2)測(cè)定 取鉛標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液10.0ng/ml80.0ng/ml、經(jīng)消化處理的樣品液和試劑空白液各10ul分別注入石墨爐，側(cè)其吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出樣品中鉛含量。 4.注意事項(xiàng) 本法檢測(cè)限為5ug/kg。對(duì)于成分復(fù)雜、基體干擾嚴(yán)重的樣品，可注入適量基體改進(jìn)劑20g/L的磷酸銨溶液5ul10ul，以消除干擾。但在繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，也要加入與樣本等量的基體改進(jìn)劑。所有玻璃儀器都要用稀硝酸浸泡。(二)氫化物發(fā)生原子熒光光譜法 1.原理 樣品經(jīng)硝酸-高氯酸消化，在酸性介質(zhì)中，二價(jià)鉛離子與NaBH4或

4、KBH4反應(yīng)生成揮發(fā)性PbH4，PbH4隨載氣(氬氣)流進(jìn)入電熱石英管原子化器原子化，在特制鉛空心陰極燈照射下，基態(tài)鉛原子被激發(fā)，當(dāng)激發(fā)態(tài)鉛原子回到基態(tài)時(shí)，發(fā)射出特征波長(zhǎng)的熒光，其熒光強(qiáng)度與鉛含量成正比，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。 2.樣品處理 取適量樣品，加入硝酸-高氯酸混合酸，放置過(guò)夜。加熱消化至消化液呈淡黃色或無(wú)色。稍冷后加水，繼續(xù)加熱至消化液剩下0.5ml1.0ml為至。加入鹽酸和草酸，搖勻，加入鐵氰化鉀，用水定容。混勻，放30min后測(cè)定。同時(shí)做試劑空白。 3.測(cè)定(1)儀器條件(2)測(cè)定 先連續(xù)用標(biāo)準(zhǔn)零管進(jìn)樣，待讀數(shù)穩(wěn)定后，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)系列的測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再測(cè)定空白消化液及樣品消化液，計(jì)算

5、出樣品中鉛含量。 4.說(shuō)明 (1)該法簡(jiǎn)便、快速、干擾少、靈敏高。檢出限為0.4ng/ml，線性范圍0500.0ng/ml。 (2)消化過(guò)程中，應(yīng)注意驅(qū)酸，以免影響測(cè)定。樣品消化后加入鹽酸是為了維持氫化反應(yīng)所需要的酸度。 (3)標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品消化液定容后搖勻，放置30min，使反應(yīng)完全，還原劑在測(cè)定時(shí)由氫化物發(fā)生裝置中加入，同時(shí)控制一定酸度和鐵氰化鉀濃度，以增大吸收信號(hào)，提高方法靈敏度。二、食品中砷的檢驗(yàn)砷是有金屬光澤的暗灰色固體，質(zhì)脆，單質(zhì)砷不溶于水。砷的化合物As2O3和AsH3，都是劇毒物質(zhì)。砷可以引起人的急慢性中毒。國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)確認(rèn)無(wú)機(jī)砷化合物可引起人類(lèi)肺癌和皮膚癌。食品中砷的衛(wèi)生

6、標(biāo)準(zhǔn)，干甲殼類(lèi)制品、干藻類(lèi)2mg/kg，鮮甲殼類(lèi)、其他海鮮產(chǎn)品1mg/kg，其他食品0.5mg/kg。(一) 氫化物發(fā)生原子熒光光度法 1.原理 樣品經(jīng)濕消化或干灰化后，加入硫脲使五價(jià)砷還原為三價(jià)砷，再加入硼氫化鉀使三價(jià)砷還原為砷化氫，由氬氣導(dǎo)入原子化器中，高溫下分解為原子態(tài)砷，在特制砷空心陰極燈的發(fā)射光激發(fā)下產(chǎn)生原子熒光，其熒光強(qiáng)度在固定條件下與被測(cè)溶液中砷的濃度成正比，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。GB/T 5009.11-2003 2.樣品處理(1)濕消化 取適量樣品，加入硝酸，硫酸，放置過(guò)夜，次日加熱消化，至完全，除盡氮氧化物，冷卻，加入硫脲，用水定容。同時(shí)做試劑空白。(2)干灰化法 取適量樣品，加

7、入硝酸鎂溶液混勻，低熱蒸干。將MgO蓋于其上，先炭化，再于550下灰化4h。冷卻，小心加入稀鹽酸，以中和MgO并溶解灰分。移入容量瓶中，加硫脲，另用稀硫酸分次洗滌坩堝后合并，定容。同時(shí)做試劑空白。 3.測(cè)定(1)儀器條件 光電倍增管電壓400V。測(cè)定方式：熒光強(qiáng)度或濃度直讀方式；讀數(shù)方式：峰面積；讀數(shù)延時(shí)1s，讀數(shù)時(shí)間15s；硼氫化鈉加入時(shí)間5s；加樣體積2ml。(2)測(cè)定 依次進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)系列，清洗進(jìn)樣器，再用“0”管調(diào)試，使讀數(shù)回零，再測(cè)試劑空白和樣品，記錄熒光強(qiáng)度?；谕夤怆娦?yīng)和二次電子發(fā)射效應(yīng)的電子真空器件。它利用二次電子發(fā)射使逸出的光電子倍增，獲得遠(yuǎn)高于光電管的靈敏度，能測(cè)量微弱的光信號(hào)

8、. 4. 說(shuō)明(1)本法靈敏度高，檢出限為2ng/ml,線性范圍為0200ng/ml；干擾少。(2)樣品濕消化時(shí)應(yīng)防止炭化，因碳可能把砷還原為元素態(tài)而造成損失。干灰化時(shí)，加入硝酸鎂加熱分解產(chǎn)生氧，可促進(jìn)灰化作用。氧化鎂除了保濕傳熱以外，還起著防止砷揮發(fā)損失的作用?；一皯?yīng)將MgO粉末仔細(xì)覆蓋全部樣品的表面。(3)此法測(cè)定結(jié)果為樣品中總砷的含量，也可用于樣品中無(wú)機(jī)砷含量的測(cè)定。(二) 銀鹽法 1.原理 樣品經(jīng)消化后，以KI和SnCl2將高價(jià)砷還原為三價(jià)砷，然后與鋅和酸反應(yīng)生成的產(chǎn)物氫化反應(yīng)生成砷化氫，經(jīng)銀鹽溶液吸收后，形成紅色膠體銀，于波長(zhǎng)520nm處測(cè)吸光度值，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。 H3AsO4

9、+2KI+H2SO4 H3AsO3+I2+K2SO4+H2O I2+SnCl2+HCl HI+SnCl4H3AsO3 +3Zn+3H2SO4 AsH3+3ZnSO4+3H2OAsH3+6AgDDC 6Ag+3HDDC+As(DDC)3二乙氨基二硫代甲酸銀（二乙氨基二硫代甲酸銀（AgDDC)分光光度法分光光度法 As5+ As3+ AsH3 +2eHAgDDC紅色紅色膠體銀膠體銀510nm測(cè)吸光度測(cè)吸光度As5+ 2.樣品處理(1)濕消化法 稱適量樣品，加HNO3-HClO4-H2SO4消化完全，除盡氮氧化合物，定容。同時(shí)做試劑空白。(2)干灰化法 稱適量樣品于坩堝，加氧化鎂及硝酸鎂溶液，混勻，

10、浸泡4h，低溫蒸干。在550下灰化3h4h。冷卻，加水濕潤(rùn)、蒸干后，灰化2h。加稀鹽酸溶解殘?jiān)?，用水定容。同時(shí)做試劑空白。 3.測(cè)定 取一定量的樣品消化液和同樣量的試劑空白液及砷標(biāo)準(zhǔn)溶液，加水，加硫酸使酸度一致。如果是灰化法處理的消化液，加鹽酸使酸度一致。各加KI和酸性SnCl2，混勻，靜置。加鋅粒，立即塞上裝有乙酸鉛棉花的導(dǎo)氣管，并使導(dǎo)氣管尖端插入盛有銀鹽吸收液的離心管液面下，常溫下反應(yīng)45min。以零管調(diào)零，于520nm處測(cè)定吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中砷含量。 4.說(shuō)明(1)樣品濕消化時(shí)，若為含水分少的固體樣品應(yīng)粉碎過(guò)篩，混勻再稱量。若為蔬菜、水果或水產(chǎn)品，應(yīng)勻漿后再稱量。若為酒精

11、性或含二氧化碳飲料，應(yīng)先稱量，微火加熱去除乙醇或二氧化碳后再消化。(2)濕消化法處理樣品應(yīng)在消化后加水煮沸處理兩次，除去殘留的硝酸，以免影響反應(yīng)、顯色和測(cè)定，使結(jié)果產(chǎn)生誤差。(3)樣品中的硫化物在酸性溶液中形成H2S，隨AsH3一起揮發(fā)出來(lái)，進(jìn)入吸收液，與AgDDC反應(yīng)生成Ag2S沉淀，影響顯色和測(cè)定，所以在導(dǎo)氣管中裝入乙酸鉛棉花以消除其影響。(4)吸收液的組成為2.5g/L Ag-DDC，18ml/L三乙醇胺，三氯甲烷為溶劑。其中三乙醇胺的作用是中和反應(yīng)生成的HDDC，也是膠態(tài)銀的保護(hù)劑。(5)反應(yīng)后，有機(jī)溶劑可能揮發(fā)損失，應(yīng)取下離心管，用三氯甲烷補(bǔ)足至4ml。(6)吸收液為有機(jī)相，被還原的

12、單質(zhì)銀在其中呈紅色膠態(tài)分布，微量的水會(huì)使吸收液渾濁。因此，所有玻璃器皿必須干燥。(三) 硼氫化物還原光度法KBH4+3H2O+H+H3BO3+K+8HH+As3 + (As5+) AsH3AsH3+6AgNO3+2H2O6Ag0+HAsO2+6HNO3 400nm吸收吸收黃色膠態(tài)銀黃色膠態(tài)銀1 1、反應(yīng)管、反應(yīng)管2 2、U U形管（二甲基甲酰胺、形管（二甲基甲酰胺、乙醇胺、三乙醇胺）乙醇胺、三乙醇胺）3 3、脫胺管（硫酸鈉和硫、脫胺管（硫酸鈉和硫酸氫鉀酸氫鉀4 4、吸收管（硝酸、硝酸、吸收管（硝酸、硝酸銀、聚乙烯醇、乙醇）銀、聚乙烯醇、乙醇）3砷化氫發(fā)生與吸收裝置砷化氫發(fā)生與吸收裝置123三、

13、食品中汞的檢驗(yàn) 汞，Hg，俗稱水銀，是唯一在常溫下呈銀白色液態(tài)的金屬，不溶于水、稀硫酸和鹽酸，能溶于熱硫酸和硝酸，在空氣中不易被氧化，常溫下有揮發(fā)性。 各種形態(tài)的汞均有毒。無(wú)機(jī)汞不容易吸收，毒性較小。單質(zhì)汞易被呼吸道吸收，烷基汞易被腸道吸收，毒性大。汞在體內(nèi)易蓄積，蓄積部位主要在腦、肝和腎內(nèi)。汞的毒性主要是損害細(xì)胞內(nèi)酶系統(tǒng)和蛋白質(zhì)的巰基，引起急性或慢性中毒。甲基汞還可通過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒體內(nèi)，影響胎兒生長(zhǎng)和發(fā)育。 我國(guó)食品中汞的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：魚(yú)及水產(chǎn)品0.3mg/kg，肉、蛋、油0.5mg/kg，成品糧 0.002mg/kg，牛乳及乳制品、蔬菜、水果等0.01mg/kg (一) 原子熒光光譜法1.原理

14、 樣品經(jīng)消化后，在酸性介質(zhì)中，溶液中Hg2+被KBH4還原成原子汞，有載氣帶入原子化器，在汞空心陰極燈照射下，基態(tài)汞原子被激發(fā)至激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)不穩(wěn)定，回到基態(tài)時(shí)，發(fā)射出具有特征波長(zhǎng)的熒光，其熒光強(qiáng)度與溶液中汞離子濃度成正比，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。GB/T 5009.17-2003 2.樣品處理 (1)高溫消解法 稱取適量樣品置于PTFE內(nèi)罐中，加硝酸浸泡過(guò)夜。加H2O2，密封后，置干燥箱中，120恒溫3h，至消化完全。用稀硝酸定容。(2)微波消化法 稱取適量樣品于消化罐中，加入硝酸和H2O2，蓋好安全閥后，放入微波爐中，根據(jù)不同種類(lèi)樣品，設(shè)置最佳消化條件，至消化完全。冷卻后用稀硝酸定容。3.測(cè)定(1

15、) 儀器條件 (2)測(cè)定4.說(shuō)明(1) 本法檢出限0.15ug/kg,線性范圍060ug/L。通常低濃度標(biāo)準(zhǔn)系列為010ug/L,用于一般樣品的測(cè)定。高濃度標(biāo)準(zhǔn)系列為060ug/L，適用于水產(chǎn)品或海產(chǎn)品等樣品的測(cè)定，但標(biāo)準(zhǔn)溶液都要用(1+9)硝酸稀釋至25ml。(2) 硼氫化鉀濃度為5g/L，最好現(xiàn)用現(xiàn)配。放置時(shí)間長(zhǎng)，還原能力下降，導(dǎo)致方法靈敏度下降。(3) 氣溫高時(shí)，測(cè)定信號(hào)不穩(wěn)定，應(yīng)控制實(shí)驗(yàn)室溫度。(二)冷原子吸收光譜法 1.原理 樣品經(jīng)消化后，在強(qiáng)酸性介質(zhì)中，汞離子被SnCl2還原成原子汞。原子汞在載氣帶動(dòng)下，進(jìn)入測(cè)汞儀，吸收253.7nm波長(zhǎng)的共振線，一定范圍內(nèi)吸收值與汞濃度呈正比，標(biāo)

16、準(zhǔn)曲線法定量。1、方法原理冷原子吸收測(cè)汞儀冷原子吸收測(cè)汞儀工作流程工作流程N(yùn)2或空氣或空氣還還原原瓶瓶分分子子篩篩吸收池吸收池汞燈汞燈光電倍增管光電倍增管放大器放大器指示表指示表記錄儀記錄儀流量計(jì)流量計(jì)脫汞阱脫汞阱抽氣泵抽氣泵253.7nm 2.樣品處理 稱取適量樣品，加V2O5粉末、硝酸，振搖，放置4h。加濃H2SO4，混勻，在140砂浴上加熱消化。冷卻后加KMnO4溶液，靜置4h，滴加NH2OHHCl使紫色褪去，用水稀釋至刻度。 3.測(cè)定 取10.0ml樣品消化溶液于汞蒸氣發(fā)生器內(nèi)，加SnCl2，通凈化載氣，使汞蒸氣經(jīng)過(guò)裝有CaCl2的干燥器后，再進(jìn)入測(cè)汞儀，讀取最大讀數(shù)。同樣測(cè)定試劑空白

17、。取汞標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液按樣品消化液的操作，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出樣品中汞含量。 4.方法說(shuō)明(1)本法最低檢出限為10ug/kg。(2)所有玻璃儀器都要用稀硝酸浸泡。(3)消化時(shí)要除盡殘留的氮氧化物，以免對(duì)測(cè)定有嚴(yán)重干擾，使結(jié)果偏高。(4)測(cè)汞儀中的氣路和光路，要保持干燥、光亮、平滑，無(wú)水氣凝集。否則應(yīng)分段拆下，用無(wú)汞水煮，烘干備用。(5)從汞蒸氣發(fā)生瓶至測(cè)汞儀的連接管不宜過(guò)長(zhǎng)，且宜用不吸附汞的聚氯乙烯塑料管。從汞蒸氣發(fā)生瓶出來(lái)的汞蒸氣，通常帶有水分，必須經(jīng)干燥后才能進(jìn)入儀器檢測(cè)。否則，會(huì)被帶入儀器光路，影響檢測(cè)。(6)V2O5消化法通常適用于水產(chǎn)品、蔬菜、水果等樣品的處理。3.3.2 食品中苯并(a

18、)芘的檢驗(yàn) 苯并(a)芘（B(a)P）熔點(diǎn)179，沸點(diǎn)496 510 ，常溫下為黃色結(jié)晶。水中溶解度小，表面活性劑可增加其在水中的溶解度，易溶于環(huán)己烷、甲苯、二甲苯、己烷和丙酮中。在堿性介質(zhì)中穩(wěn)定，酸性介質(zhì)中不穩(wěn)定。苯并(a)芘3，4苯并芘對(duì)食品安全性的影響食品中3，4苯并(a)芘的污染 食品中的3，4苯并(a)芘主要來(lái)自兩方面：食品加工過(guò)程和環(huán)境污染。 （1）食品加工過(guò)程中3，4苯并(a)芘的污染 熏制過(guò)程產(chǎn)生的煙是進(jìn)入食品的致癌性烴類(lèi)的主要來(lái)源，當(dāng)碳?xì)浠衔镌?00-1000供氧不足的條件下燃燒能生成3，4苯并(a)芘。 在烘烤時(shí)溫度較高，食品中的脂類(lèi)、膽固醇、蛋白質(zhì)、碳水化合物發(fā)生熱解，

19、經(jīng)過(guò)環(huán)化和聚合就形成了大量的多環(huán)芳烴，其中以3，4苯并(a)芘為最多。 加工過(guò)程中使用含3，4苯并(a)芘的容器、管道、沒(méi)備、機(jī)械運(yùn)輸材料、包裝材料以及含多環(huán)芳烴的液態(tài)石蠟涂漬的包裝紙等均會(huì)對(duì)食品造成3，4苯并(a)芘的污染。 （2）環(huán)境中3，4苯并(a)芘的污染 3，4苯并(a)芘在自然界廣泛存在。人類(lèi)的社會(huì)活動(dòng)造成大量的環(huán)境污染，如工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、交通運(yùn)輸和日常生活中大量使用的煤炭、石油、汽油、木柴等燃料，以及柏油路上晾糧食、油料種子等，均能使食品受到3，4苯并(a)芘污染。 2、攝入3，4苯并(a)芘對(duì)人體的危害 苯并(a)芘可通過(guò)皮膚、呼吸道、消化道被人體吸收，誘發(fā)皮膚癌、肺癌、直腸癌、胃

20、癌和膀胱癌等，并可透過(guò)胎盤(pán)屏障，對(duì)子代造成傷害，長(zhǎng)期呼吸含有苯并(a)芘的空氣，飲用或食用被其污染的水和食物，會(huì)造成慢性中毒。 3、允許量標(biāo)準(zhǔn) 各國(guó)都制訂了相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)，但有所不同，我國(guó)的見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)GB710494。我國(guó)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定肉制品、糧食中B(a)P5ug/kg。4、減少食品3，4苯并(a)芘污染的措施 （1）確保食品原料的安全 （2）改進(jìn)食物加工過(guò)程的方法 （3）減少來(lái)自大氣、水、土壤等的3，4苯并(a)芘污染 （4）加強(qiáng)監(jiān)督和管理 （5）采用合適的食用方式 熒光分光光度法檢測(cè)B(a)P 1.原理 樣品用有機(jī)溶劑提取，皂化后，經(jīng)液-液分配或色譜柱凈化，然后在乙?；癁V紙上分離。 B(a)P在紫

21、外線照射下，呈藍(lán)紫色熒光斑點(diǎn)。將濾紙上有B(a)P的部分剪下，用溶劑浸出，再用熒光分光光度計(jì)測(cè)定熒光強(qiáng)度，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。GB/T 5009.27-2003 2.樣品處理(1)提取 分為糧食及糕點(diǎn)等水分少的食品，以及植物油樣。(2)凈化 將樣品環(huán)己烷提取液轉(zhuǎn)入裝有硅鎂吸附劑的層析柱中，條件流速為1ml/min，用苯洗脫，此時(shí)應(yīng)在紫外燈下觀察，以藍(lán)紫色熒光物質(zhì)完全洗下為止。收集苯液于5060 水浴上減壓濃縮至0.1ml0.5ml(注意不要蒸干)。(3)分離 將一定量的濃縮液和20ul的B(a)P標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(1ug/ml)，點(diǎn)于乙?；癁V紙上。用乙醇-二氯甲烷(2:1)展開(kāi)劑展開(kāi)，取出晾干。 在波長(zhǎng)

22、365nm或254nm紫外燈下觀察，剪下標(biāo)準(zhǔn)B(a)P及與其同一位置的樣品的藍(lán)紫色斑點(diǎn)置于比色管，加入定量的苯，加蓋，在5060 水浴中振搖、浸泡15min。 3 測(cè)定 將樣品及表征斑點(diǎn)的苯浸出液用熒光分光光度計(jì)，以365nm為激發(fā)光波長(zhǎng)，以365nm460nm波長(zhǎng)進(jìn)行熒光掃描，所得樣液的熒光光譜與標(biāo)準(zhǔn)B(a)P的熒光光譜比較定性。 與試樣分析的同時(shí)做試劑空白，包括處理試樣所用的全部試劑同樣操作，分別讀取試樣、標(biāo)準(zhǔn)及試劑空白于波長(zhǎng)406nm、411nm、401nm處的熒光強(qiáng)度，按基線法計(jì)算所得的數(shù)值，定量計(jì)算出熒光強(qiáng)度。 F=F406-(F401+F411)/2 4.結(jié)果計(jì)算12VV21m10

23、00)(xFFFS5.說(shuō)明(1) 本法最低檢出限為0.1ug/kg。不同樣品中的回收率各不相同，平均回收率為76%83%(2) 實(shí)驗(yàn)所用的有機(jī)試劑，需重蒸餾，以除去可能存在的熒光物質(zhì)，脫脂棉要用二氯甲烷回流4h以上。 B(a)P標(biāo)準(zhǔn)溶液用重蒸苯配制。(3) 乙?；癁V紙的要求：1.應(yīng)該用潔白、無(wú)褶皺的中速層析濾紙，并剪成方條狀，否則展開(kāi)時(shí)易變形或展開(kāi)速度太慢。2.用乙?；噭┙菥鶆?，結(jié)合酸不低于26%，浸泡不均勻會(huì)影響分離效果和靈敏度。3.制好后將B(a)P標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)在紙上，展開(kāi)后Rf值應(yīng)在0.1以下較好。(4) 皂化液一定要趁熱倒入分液漏斗，放冷后頁(yè)面會(huì)凝結(jié)一層脂肪，可能將B(a)P凝結(jié)，不易洗

24、凈，造成損失。3.3.3 食品中黃曲霉毒素及其分析方法 (一)理化性質(zhì) 黃曲霉毒素(aflatoxin, 簡(jiǎn)寫(xiě)為AFT)是黃曲霉菌和寄生曲霉菌的代謝產(chǎn)物，是一類(lèi)化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)相近的化合物，目前已分離鑒定出20種以上，其共同特征是均含有二呋喃環(huán)和香豆素(氧雜萘鄰?fù)?。黃曲霉素分為B族(薄層色譜板上發(fā)藍(lán)色熒光)和G族(薄層色譜板上發(fā)綠色熒光)。B1B2G1G2黃曲霉毒素 是真菌毒素的重要代表之一，是由黃曲霉、是真菌毒素的重要代表之一，是由黃曲霉、寄生曲霉和集峰曲霉產(chǎn)生的一組結(jié)構(gòu)類(lèi)似，寄生曲霉和集峰曲霉產(chǎn)生的一組結(jié)構(gòu)類(lèi)似，對(duì)肝臟劇毒，并有致畸、致突變和致癌作用對(duì)肝臟劇毒，并有致畸、致突變和致癌作用的

25、天然污染物。已發(fā)現(xiàn)的天然污染物。已發(fā)現(xiàn)AFAF的衍生物有的衍生物有2020多種多種，其中，被國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)列為，其中，被國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)列為I I級(jí)致癌劑級(jí)致癌劑的的AFB1AFB1毒性最大，低劑量長(zhǎng)期攝入或大劑量毒性最大，低劑量長(zhǎng)期攝入或大劑量一次暴露均可引發(fā)多種動(dòng)物肝臟發(fā)生癌變或一次暴露均可引發(fā)多種動(dòng)物肝臟發(fā)生癌變或急性中毒。急性中毒。 國(guó)際上以黃曲霉毒素、苯并毒性國(guó)際上以黃曲霉毒素、苯并毒性作用作為作用作為1010，000000，別的物質(zhì)與之相比。，別的物質(zhì)與之相比。黃曲霉毒素 原發(fā)性肝細(xì)胞癌在美國(guó)及西歐一些國(guó)家原發(fā)性肝細(xì)胞癌在美國(guó)及西歐一些國(guó)家非常罕見(jiàn)，卻是非洲及東南亞地區(qū)常見(jiàn)非常罕

26、見(jiàn)，卻是非洲及東南亞地區(qū)常見(jiàn)的惡性腫瘤。在我國(guó)，原發(fā)性肝細(xì)胞癌的惡性腫瘤。在我國(guó)，原發(fā)性肝細(xì)胞癌年發(fā)病人數(shù)為年發(fā)病人數(shù)為110200110200人，占世界總病例人，占世界總病例數(shù)的數(shù)的45%45%。其地理分布資料顯示，高發(fā)。其地理分布資料顯示，高發(fā)區(qū)位于江蘇、浙江、福建、廣東及廣西區(qū)位于江蘇、浙江、福建、廣東及廣西等氣候條件適于黃曲霉生長(zhǎng)繁殖、具有等氣候條件適于黃曲霉生長(zhǎng)繁殖、具有亞熱帶氣候特點(diǎn)的東南沿海岸線。亞熱帶氣候特點(diǎn)的東南沿海岸線。 黃曲霉毒素 迄今為止，該病的病因尚未明了，迄今為止，該病的病因尚未明了， 其發(fā)病與其發(fā)病與多種因素有關(guān)，其中膳食暴露多種因素有關(guān)，其中膳食暴露AFB1AF

27、B1作為一重作為一重要的危險(xiǎn)因子已引起世界的廣泛注意。來(lái)自要的危險(xiǎn)因子已引起世界的廣泛注意。來(lái)自中國(guó)、肯尼亞、莫桑比克、瑞典、泰國(guó)及菲中國(guó)、肯尼亞、莫桑比克、瑞典、泰國(guó)及菲律賓的研究結(jié)果表明，膳食低劑量長(zhǎng)期暴露律賓的研究結(jié)果表明，膳食低劑量長(zhǎng)期暴露A AFB1FB1與人類(lèi)原發(fā)性肝細(xì)胞癌呈正的劑量反應(yīng)關(guān)與人類(lèi)原發(fā)性肝細(xì)胞癌呈正的劑量反應(yīng)關(guān)系。與城區(qū)相比，該病的發(fā)生在以谷物為膳系。與城區(qū)相比，該病的發(fā)生在以谷物為膳食主要來(lái)源的農(nóng)村更為常見(jiàn)，且有年輕化的食主要來(lái)源的農(nóng)村更為常見(jiàn)，且有年輕化的趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅居民的身體健康。趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅居民的身體健康。 黃曲霉毒素 AFB1AFB1對(duì)熱非常穩(wěn)定對(duì)熱非常

28、穩(wěn)定, 268-269, 268-269方可破方可破壞壞, , 故一般烹調(diào)溫度不破壞其毒性。某故一般烹調(diào)溫度不破壞其毒性。某些化學(xué)試劑如些化學(xué)試劑如5%5%次氯酸鈉和丙酮可使次氯酸鈉和丙酮可使AFAFB1B1完全分解，因此在實(shí)驗(yàn)室中用此方法完全分解，因此在實(shí)驗(yàn)室中用此方法對(duì)接觸過(guò)對(duì)接觸過(guò)AFB1AFB1的器皿作解毒處理。但在的器皿作解毒處理。但在紫外線照射可使之分解。紫外線照射可使之分解。 黃曲霉毒素 AFB1AFB1和和AFB2AFB2在紫外光下可產(chǎn)生藍(lán)紫色熒光在紫外光下可產(chǎn)生藍(lán)紫色熒光, AFG1, AFG1和和AFG2AFG2則產(chǎn)生黃綠色熒光，該特性則產(chǎn)生黃綠色熒光，該特性是檢測(cè)糧油食品

29、中黃曲霉毒素的重要依據(jù)是檢測(cè)糧油食品中黃曲霉毒素的重要依據(jù)。 黃曲霉毒素 AFAF分子中的二呋喃環(huán)是產(chǎn)生毒性的重要分子中的二呋喃環(huán)是產(chǎn)生毒性的重要結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，而香豆素可能與致癌作用有結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，而香豆素可能與致癌作用有關(guān)，關(guān)，AFAF的毒性、致突變及致癌作用由強(qiáng)的毒性、致突變及致癌作用由強(qiáng)到弱的順序依次為到弱的順序依次為AFB1AFB1 AFG1AFG1 AFM1AFM1 AFBAFB2 2 AFG2AFG2。 薄層色譜法檢測(cè)AFTB1 1.原理 樣品中AFTB1經(jīng)甲醇-水溶液提取后，濃縮、定容、點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，經(jīng)展開(kāi)分離后，在波長(zhǎng)365nm紫外光下觀察藍(lán)紫色熒光，根據(jù)其在薄層板上顯示熒光比

30、較來(lái)確定含量。 2.樣品處理 樣品經(jīng)正己烷(或石油醚)和甲醇-水溶液振蕩提取，樣品中油脂、色素等雜質(zhì)進(jìn)入正己烷層，而AFTB1和水溶性雜質(zhì)留在甲醇-水層。用三氯甲烷反提取甲醇-水層，由于AFTB1更易溶解于三氯甲烷，從而進(jìn)入三氯甲烷層，雜質(zhì)留在水層。將三氯甲烷層通過(guò)盛有無(wú)水硫酸鈉的慢速定量濾紙過(guò)濾于蒸發(fā)皿中，水浴通風(fēng)揮干，冷卻后，用苯-乙腈混合液溶解殘?jiān)鼽c(diǎn)樣液。 3.測(cè)定 (1) 定性 定性判斷是否含有AFTB1 (2) 定量 根據(jù)定性判斷結(jié)果進(jìn)一步定量判斷是否符合國(guó)家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。基本原理： 用含已知濃度被測(cè)物的試樣進(jìn)行分析，目視確定能被可靠地檢測(cè)出的被測(cè)物的濃度與最低限量濃度之間的對(duì)比。類(lèi)似檢測(cè)最低檢測(cè)限的：酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISAELISA） 抗原：抗原是指進(jìn)入人或動(dòng)物機(jī)體后，可刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應(yīng)答，從而引起動(dòng)物產(chǎn)生抗體或形成致敏淋巴細(xì)胞，并能和抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性反應(yīng)的物質(zhì)。 抗體：是由抗原刺激動(dòng)物的免疫系統(tǒng)后，由免疫系統(tǒng)產(chǎn)生分泌的能和相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。 抗原抗體的基本特性：a、反應(yīng)的特異性；b、反應(yīng)的等比例性ELISA方法 ELISA屬于標(biāo)記免疫學(xué)技術(shù)的一種，19