生物大分子的電子顯微鏡技術(shù)

1、會(huì)計(jì)學(xué)1生物大分子的電子顯微鏡技術(shù)生物大分子的電子顯微鏡技術(shù)DNA 雙鏈dsDNA、線性的， 超螺旋的，單鏈 ssDNARNA 單鏈 ssRNA 、線性的，三葉草形的 雙鏈dsRNA下相液下相液:0.050.25M醋酸銨水溶液或雙蒸水醋酸銨水溶液或雙蒸水甲酰銨法甲酰銨法:上相液組成上相液組成:Tris-Na3EDTA(PH8.5) 0.10.01M 核酸樣品核酸樣品 0.51ugml 細(xì)胞色素細(xì)胞色素C 0.050.1mgml 甲酰銨甲酰銨 4050%下相液下相液:0.1MTris0.01MNa3EDTA(PH8.5),20%甲酰銨甲酰銨.展層展層1.樣品溶液樣品溶液(上相溶上相溶液液)2.展

2、層液展層液(下相溶液下相溶液) 3.滑石粉滑石粉 4.載玻片載玻片 5.加樣器加樣器12345.沾網(wǎng)沾網(wǎng):將銅網(wǎng)的膜面朝下將銅網(wǎng)的膜面朝下,沾取液面上的樣品沾取液面上的樣品脫水與染色脫水與染色銅網(wǎng)以銅網(wǎng)以45角插入角插入無水乙醇片刻無水乙醇片刻,進(jìn)行進(jìn)行脫水脫水,以同樣方法在以同樣方法在2%PTA中染色中染色金屬投影金屬投影:在真空噴鍍儀中在真空噴鍍儀中對(duì)樣品進(jìn)行重金對(duì)樣品進(jìn)行重金屬旋轉(zhuǎn)投影屬旋轉(zhuǎn)投影.適合微量樣品的操作適合微量樣品的操作,單滴展單滴展開法的展層樣品液只需開法的展層樣品液只需510ul,操作方法與展層方法相同操作方法與展層方法相同,可可用用16孔酶標(biāo)板代用展層容器孔酶標(biāo)板代用展

3、層容器 病毒，噬菌體等含核酸的細(xì)胞器，不進(jìn)行提取核酸，病毒，噬菌體等含核酸的細(xì)胞器，不進(jìn)行提取核酸，利用展層上相利用展層上相液液（2M2M醋酸銨），下醋酸銨），下相相液液（0.2M醋酸銨醋酸銨或水溶液）或水溶液）鹽濃度的巨大差異，高鹽中的病毒遇到低滲鹽濃度的巨大差異，高鹽中的病毒遇到低滲溶液而破裂，核酸分子溶液而破裂，核酸分子釋放，并與細(xì)胞色素釋放，并與細(xì)胞色素CC結(jié)合，隨結(jié)合，隨著單分子層展開，因此，釋放與展層在一步完成著單分子層展開，因此，釋放與展層在一步完成從一種非洲蛙的卵母細(xì)胞核中提取的DNA的8個(gè)基因片段。雜交重復(fù)分子X174的DNA,長(zhǎng)度約1.8 m的環(huán)狀DNA(雙鏈DNA)病毒病

4、毒DNADNA在細(xì)菌中復(fù)制時(shí)，蛋白質(zhì)結(jié)在細(xì)菌中復(fù)制時(shí)，蛋白質(zhì)結(jié)合在病毒合在病毒DNADNA的特別部分，也就是的特別部分，也就是DNADNA復(fù)制的開始點(diǎn)。復(fù)制的開始點(diǎn)。能夠看到大腸桿菌染色體能夠看到大腸桿菌染色體的二個(gè)片段，下邊一個(gè)是的二個(gè)片段，下邊一個(gè)是活動(dòng)中的?？梢钥吹交顒?dòng)中的?？梢钥吹絤RNAmRNA的轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)的翻譯過的轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)的翻譯過程。程。基因上的RNA聚合酶雜交的雜交的DNADNA分子分子 二條二條DNADNA分子分子 經(jīng)過變性、退火處理形成缺失環(huán)和經(jīng)過變性、退火處理形成缺失環(huán)和 置換泡置換泡適合微量樣品的操作適合微量樣品的操作,單滴展單滴展開法的展層樣品液只需開法的展層樣品液只需510ul,操作方法與展層方法相同操作方法與展層方法相同,可可用用16孔酶標(biāo)板代用展層容器孔酶標(biāo)板代用展層容器X174的DNA,長(zhǎng)度約1.8 m的環(huán)狀DNA(雙鏈DNA)病毒病毒DNADNA在細(xì)菌中復(fù)制時(shí)，