公共場所微生物檢驗(yàn)作業(yè)指導(dǎo)書02-05

1、作業(yè)指導(dǎo)書編號：ZQCDC/ZY02第1頁共1頁公共場所毛巾、床上臥具微生物 檢驗(yàn)方法大腸菌群測定操作規(guī)程第1次修訂實(shí)施日期：2011年5月1日1、目的依據(jù)GB/ 2000公共場所茶具微生物檢驗(yàn)方法大腸菌群測定，熟練掌握此規(guī)程，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。2、適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了公共場所公用毛巾、床上臥具大腸菌群的測定方法。3、責(zé)任使操作者熟悉此并在具體樣品檢驗(yàn)中嚴(yán)格遵照操作，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。4、內(nèi)容：定義：大腸菌群指一群在37C、24h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、需氧和兼性厭癢的革蘭 氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來源于人畜糞便，故以次作為糞便污染指標(biāo)來評價公用毛巾、床 上臥具的衛(wèi)生質(zhì)量。儀器：見GB

2、/T 2000中第3章。培養(yǎng)基和試劑：見 GB/T 2000中第4章。檢驗(yàn)程序：見GB/T 2000中第5章。操作步驟采樣方法隨機(jī)法：隨機(jī)抽取清洗消毒后準(zhǔn)備使用的毛巾、床上臥具。涂抹法：用測定細(xì)菌總數(shù)時采集的樣品，無需重采。紙片法：用滅菌生理鹽水濕潤5cmx 5cm大腸菌群快速測定紙片兩 張，分別貼在毛巾、床上臥具規(guī)定部位和面積范圍內(nèi)，約 30s后取下，置于無 菌塑料袋內(nèi)。檢驗(yàn)方法發(fā)酵法4.5.2.用測定細(xì)菌總數(shù)剩余的檢樣，倒入雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)液中。置 36c 1C培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h。4.5.2.觀察是否產(chǎn)算、產(chǎn)氣，若有變黃和氣體產(chǎn)生，該管推測是檢驗(yàn)陽性。 如不產(chǎn)酸、產(chǎn)氣則為大腸菌群陰性。

3、4.5.2.自推測性檢驗(yàn)陽性管中取一接種環(huán)培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)種伊紅美藍(lán)瓊脂平板 上，置36c 1C培養(yǎng)箱培養(yǎng)1824h,然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏 染色和證實(shí)性試驗(yàn)。4.5.2.在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落 12個進(jìn)行染色鏡檢； 同時接種乳糖發(fā)酵管，只36c 1C培養(yǎng)24h。4.5.3紙片法將已采樣的紙片置36c 1C培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)1618 h ,觀察結(jié)果。結(jié)果報告見GB/ 2000中第7章。作業(yè)指導(dǎo)書編號：ZQCDC/ZY03第1頁共2頁公共場所浴盆、）拉（腳）盆微生物第1次修訂檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測定操作規(guī)程實(shí)施日期：2011年5月1日1、目的：公共場所浴盆、臉（腳）盆微生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總

4、數(shù)測定。2、適用范圍：本標(biāo)準(zhǔn)適用于公共場所浴盆、臉（腳）盆細(xì)菌總數(shù)的測定。3、責(zé)任：使操作者熟悉本規(guī)程，并在具體樣品檢驗(yàn)中嚴(yán)格遵照操作，確保檢測結(jié)果 準(zhǔn)確性。4 、內(nèi)容定義細(xì)菌總數(shù)：指公共場所浴盆、臉（腳）盆經(jīng)過采樣處理，在一定條件下培養(yǎng)后（培成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、PHO、需氧性質(zhì)等），25cm2表面上含菌落的總數(shù)。本方法規(guī)定的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果，只包括一群在營養(yǎng)瓊脂上 生長發(fā)育的嗜中溫性需氧菌落總數(shù)。細(xì)菌總數(shù)可作為判定公共場所浴盆、臉（腳）盆被污染程度的標(biāo)志，也可 以為公共場所浴盆、臉（腳）盆消毒效果的判定和評價提供依據(jù)。儀器見GB/ 2000中第四章4.3.1和試劑 營養(yǎng)瓊脂培見 GB

5、/ 2000 中4.3.2樣。采樣4.4.14.4.24.4.3兩側(cè)壁布點(diǎn)無菌生理鹽水：分裝125mL瓶供浴盆采樣，50mL瓶供臉（腳）盆采采樣必須在無菌操作下進(jìn)行，采樣用具應(yīng)高壓滅菌 121c 20分鐘。采樣部位，選擇在盆內(nèi)側(cè)壁二分之一至三分之一高度采樣。采樣布點(diǎn)，浴盆可在四壁及盆底呈梅花布點(diǎn)，臉（腳）盆可在相對04.4.4 米樣方法涂抹法：用侵有無菌生理鹽水的棉拭子在規(guī)格板（5 cmx5 cm） 內(nèi)來回均勻涂滿整個方格，并隨之轉(zhuǎn)動棉試子，剪去手接觸部位后，將涂抹浴 盆的5個棉試子一并放入125mL理鹽水燒瓶中，涂抹臉（腳）盆的 2個棉試子一并放入50 mL生理鹽水三角燒瓶中，充分振搖或在旋

6、渦振蕩器上振蕩 分鐘，每毫升的菌濃度相當(dāng)于1平方厘米的菌量。斑貼法：將5cmX 5cm無菌濾紙片放入滅菌平皿中，注入滅菌生理 鹽水1mL片（吸滿為止），以無菌操作將濾紙片貼到采樣部位，1分鐘后按序取 下，將貼浴盆的5片濾紙一并放入125,mL生理鹽1分鐘，每毫升的菌嘗試相當(dāng)于1平方厘米的菌量。檢驗(yàn)方法4.5.1 用1mL滅菌吸管吸取樣品 1mL,加到滅菌平皿內(nèi)、同樣再吸 1mL力口至U指導(dǎo)書編號：ZQCDC/ZY03第2頁共2頁公共場所浴盆、臉（腳）盆微生物 檢驗(yàn)方法必耐總數(shù)測定操作規(guī)程第1次修訂實(shí)施日期：2011年5月1日一平皿內(nèi)。如污染嚴(yán)重，可作10倍遞增稀釋，每遞增稀釋一次，換一支無菌吸

7、 客，每個稀釋度接種兩個平皿。稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時將冷卻至 46c的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（可放 置46c 1C水浴保溫）注入平皿約15mL并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。待瓊脂凝 周后，翻轉(zhuǎn)平板，置36C 1C溫箱內(nèi)培養(yǎng)48h.菌落計(jì)數(shù)方法見GB/ 2000中第8章。浴盆、臉（腳）的細(xì)菌數(shù)按式（1）計(jì)算： m=式中：m一細(xì)菌總數(shù)，cfu/25 m2;k 稀釋倍數(shù)；n 一平均菌落數(shù)；菌落計(jì)數(shù)的報告見GB/ 2000中的第9章。作業(yè)指導(dǎo)書編號：ZQCDC/ZY04第1頁共3頁公共場所茶具微生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌 總數(shù)測定操作規(guī)程第1次修訂實(shí)施日期：2011年5月1日1、目的：公共場所茶具微生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測定。

8、2 、適用范圍：本標(biāo)準(zhǔn)適用于公共場所茶具細(xì)菌總數(shù)的測定。3、責(zé)任：使操作者熟悉本規(guī)程，并在具體樣品檢驗(yàn)中嚴(yán)格遵照操作，確保檢測結(jié) 果準(zhǔn)確性。4 、內(nèi)容定義細(xì)菌總數(shù)：指公用茶具經(jīng)過采樣處理，在一定條件下培養(yǎng)后（培養(yǎng)基成 分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、PH值、需氧性質(zhì)等），1cm2表面上含菌落的總數(shù)。 本方法規(guī)定的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果，只包括一群在營養(yǎng)瓊脂上生長發(fā)育的嗜 中溫性需氧菌落總數(shù)。細(xì)菌總數(shù)可作為判定公用茶具被污染程度的標(biāo)志，也可以為公用茶具消 毒效果的判定和評價提供了依據(jù)。儀器高壓蒸汽滅菌器。干熱滅菌箱。培養(yǎng)箱：36c 1C。冰箱。電爐。天平。滅菌。滅菌平皿：直徑9cm.滅菌刻度吸管：1mL,1

9、0mL滅菌棉拭子。滅菌剪刀。放大鏡。PH計(jì)或精密PH式紙。培養(yǎng)基和試劑生理鹽水成分：氯化鈉蒸儲水 1000mL制法：將氯化鈉（）溶解于蒸儲水（1000mL中，分裝到試管內(nèi)，每 管10mL,121c20min高壓滅菌。營養(yǎng)瓊脂檢驗(yàn)程序細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)程序如下：作業(yè)指導(dǎo)書公共場所茶具微生物檢驗(yàn)萬法細(xì)菌總數(shù)測定操作規(guī)程編號：ZQCDC/ZY04第2頁共3頁第1次修訂實(shí)施日期：2011年5月1日將放有棉拭子的試管充分振搖。此液為 1: 10稀釋液。以無菌操作，吸取2ml檢樣，分別注入到兩塊滅菌平皿內(nèi)，每 皿1ml。如污染嚴(yán)重，可十倍遞增稀釋，即吸取 1ml加到9ml滅菌生理鹽水 中，混勻，此液為1: 10

10、0稀釋液。每個稀釋度做兩塊平皿。將已融化冷至45 c左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約 15ml,并立即旋搖平皿。冷凝后放 36c 1C培養(yǎng)基培養(yǎng)48h.菌落計(jì)數(shù)方法作平皿菌落計(jì)數(shù)時，可用肉眼直接觀察，必要時用放大鏡檢查為防遺漏， 在記下平皿的菌落數(shù)后，求出同一稀釋度各平皿生長的平均菌落數(shù)。若平皿 中有連成片狀的菌落，該平皿不宜計(jì)數(shù)；若片狀菌不到平皿中的一半，而其 余一半中菌落分布均勻，則可將此半個平皿菌落計(jì)數(shù)后乘以2,所得結(jié)果代表全皿菌落數(shù)。實(shí)際公用茶具菌落數(shù)，按式（1）計(jì)算:a=50式中：a細(xì)菌總數(shù)，cfu/cm 2b一平均菌落數(shù)c稀釋倍數(shù)。菌落計(jì)數(shù)的報告4.7.1選擇平均菌落在3030

11、0之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報告作業(yè)指導(dǎo)書編號：ZQCDC/ZY05第1頁共2頁公共場所毛巾、床上臥具微 生物檢驗(yàn)方法名哺總數(shù)測定第1次修訂實(shí)施日期：2011年5月1日1、目的依據(jù)GB/2000公共場所毛巾、床上臥具微生物檢驗(yàn)方法大腸菌 群測定，熟練掌握此規(guī)程，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。2、運(yùn)用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了公共場所毛巾、床上臥具大腸菌群的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了公共場所公用毛巾、床上臥具大腸菌群的測定方法。3、責(zé)任使操作者熟悉此規(guī)程，并在具體樣品檢驗(yàn)中嚴(yán)格遵照操作，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。4、內(nèi)容定義細(xì)菌總數(shù)：指被檢物品經(jīng)過采樣處理，在一定條件下培養(yǎng)后(培養(yǎng)基成分、 培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、PH值、需氧

12、性質(zhì)等)，25cm2表面上含菌落的總數(shù)。本方 法規(guī)定的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果，只包括一群在營養(yǎng)瓊脂上生長發(fā)育的嗜中溫性 需氧菌落總數(shù)。細(xì)菌總數(shù)可作為判定公用毛巾、 床上臥具被污染程度的標(biāo)志，檢測細(xì)菌總 數(shù)，公用毛巾、床上臥具消毒效果的判定和評價提供依據(jù)。儀器見GB/中第4章培養(yǎng)基和試劑見GB/中第5章檢驗(yàn)程序見GB/2000中第6章操作步驟米樣方法隨機(jī)抽取清洗消毒后準(zhǔn)備使用的毛巾、床上臥具用滅菌生理鹽水濕潤棉試子，在毛巾、枕巾對折后兩面的各面各 2.5cm2(5cmX 5cm)面積范圍；床單、被單在上下兩部各25cm面積范圍內(nèi)有順序地來回涂抹，用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸的部分，將棉試子放入10mL生

13、理鹽水內(nèi)，4h內(nèi)送檢。檢驗(yàn)方法將放有棉試子的試管充分振搖。此液為 1: 10以無菌操作，吸取2mL檢樣，分別注入到兩塊滅菌平皿內(nèi)，每皿1mL.如污染嚴(yán)重，可十倍遞增稀釋，即吸取 1mLi口到9mL滅菌生理鹽水中，混 勻，此液為1: 100稀釋液。每個稀釋度做兩塊平皿。4.3.2.3將已融化冷至 45c左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約15mL,并立即旋搖平皿。冷凝后放入 36C 1C培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h.作業(yè)指導(dǎo)書編號：ZQCDC/ZY05第2頁共2頁公共場所毛巾、床上臥具微生物 檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測定第1次修訂實(shí)施日期：2011年5月1日菌落計(jì)數(shù)方法作平皿菌落計(jì)數(shù)時,可用肉眼直接觀察，必要時用放大鏡檢 查以防遺漏，在記下各平皿的菌落數(shù)后，求出同一稀釋度各平皿生長的平均菌 落數(shù)。若平皿中有連成片狀的菌落，該平皿不宜計(jì)