安捷倫5975CGCMS使用與定量操作

1、文件名稱:作業(yè)指導書文件編號：RC/ZY/02-011版本：A/0標題:氣相色譜質譜聯用儀(GC-MS)操作規(guī)程頁碼：1/101目的從而確保儀器不受誤操為規(guī)范本化學檢測中心氣相色譜質譜聯用儀(GC-MS)的使用,作損壞和傷害實驗人員并得到可靠檢測數據，故制定本規(guī)程。2范圍本程序文件適用于本分析測試中心的美國Agilent7890A-5975G3設備參數m/z范圍10-1050amu靈敏度EI全掃描1pg八氟萘分辨率單位質量分辨掃描速度最高12,500amu/sec質量穩(wěn)定度0.1amu/48小時4操作程序4.1注意事項(1)老化柱子S/N400:1分段老化。按溫度從低到高分段，程序升溫老化。這

2、是最好的老化方法。如HP-5柱,5-6C/min至250C,反復數次；再升至280C,反復數次；接到MS上看基線情況。270C以后基線提高為正常。再老化到300C半小時。無論何種方式，載氣必須充足。進樣口用紅色或灰色隔墊，可減少隔墊流失。GC/MS接口處必須用vesper墊圈(5062-3508)。注意安裝方向(大的一端朝向質譜)。(4)新柱子安裝時無方向性,但一旦使用過，再不要改變方向。(5)保存柱子時注意將兩端密封好，避免水和空氣破壞柱子內涂層。4.2儀器配置4.2.1在操作系統(tǒng)桌面雙擊Config/配置圖標進入儀器配置界面4.2.2點擊所要配置的儀器4.2.3配置MSD及GC：在出現的畫

3、面中輸入儀器名稱、序列號等信息后，在質譜儀一欄中選擇MSD的型號，并輸入MSD的IP地址，選擇DC極性(標注于MSD側板的中部金屬上部)；同樣配文件名稱:作業(yè)指導書文件編號：RC/ZY/02-011版本：A/0標題：氣相色譜質譜聯用儀（GC-MS）操作規(guī)程頁碼：2/10置GC后點擊確定退出。配置完成后桌面上應出現“Instrument#1”和“Instrument#1DataAnalysis，啲圖標（名稱由配置時輸入的儀器名稱決定）。4.3開機4.3.1打開載氣鋼瓶（He）控制閥，設置分壓閥壓力至0.5Mpa4.3.2打開計算機，登錄進入WindowsXP（SP2）系統(tǒng)，初次開機時建議使用59

4、75的小鍵盤LCP輸入IP地址和子網掩碼，并使用新地址重啟，否則安裝并運行BootpService4.3.3打開7890GC、5975MSD電源（若MSD真空腔內已無負壓則應在打開MSD電源的同時用手向右側推真空腔的側板直至側面板被緊固地吸牢），等待儀器自檢完畢4.3.4在桌面雙擊“Instrument#1”圖標，進入MSD化學工作站4.3.5在InstrumentControl/儀器控制界面下，單擊View/視圖菜單，選擇TuneandVacuumControl/調諧及真空控制進入調諧與真空控制界面，在Vacuum/真空菜單中選擇VacuumStat真/空狀態(tài)，觀察真空泵運行狀態(tài)。4.3.6

5、如果儀器真空泵配置為分子渦輪泵，狀態(tài)顯示渦輪泵轉速oPumpSpeed/渦輪泵轉速應很快達到100Percent，否則，說明系統(tǒng)有漏氣，應檢查側板是否壓正、放空閥是否擰緊、柱子是否接好；（如果儀器為5975擴散泵配置，請咨詢現場工程師的講解.狀態(tài)顯示壓力Pressure應很快達到100mToor左右，否則，說明系統(tǒng)有漏氣，應進行上述檢查）。調諧調諧應在儀器至少開機2個小時后方可進行，若儀器長時間未開機或儀器為5975擴散泵配置，為得到好的調諧結果建議將此時間延長至4小時。1）首先確認打印機已連好并處于聯機狀態(tài)。2）在操作系統(tǒng)桌面雙擊Instrument#1圖標進入工作站系統(tǒng)。3）在上圖Inst

6、rumentControl/儀器控制界面下，單擊View/視圖菜單，選擇TuneandVacuumControl/調諧及真空控制進入調諧與真空控制界面。4）單擊Tune/調諧菜單，選擇Autotune/自動調諧或Gainautotune/增益自動調諧，進行調諧，調諧結果自動打印。5）一般根據需要選擇所要進行的調諧，Autotune/自動調諧為最大靈敏度調諧，而Standardspectratu標準譜圖調諧為標準譜圖調諧，其與Autotune/自動調諧相比靈敏度稍低，但與譜庫中標準譜圖的匹配度更高，適合于譜庫檢索與定性，Gain文件名稱:作業(yè)指導書文件編號：RC/ZY/02-011版本：A/0標

7、題：氣相色譜質譜聯用儀（GC-MS）操作規(guī)程頁碼：3/10autotune/增益自動調諧可消除由于EM老化造成設定相對電壓時EM放大倍數變化的問題，從而保證信號的穩(wěn)定性。選定調諧后儀器將自動完成整個調諧過程（約35分鐘）并將調諧結果由打印機輸出。調諧文件會自動保存并覆蓋相應文件。如果要保存手動調諧中的參數如：修改燈絲1為燈絲2時注意要先將調諧文件保存。要手動保存或另存調諧參數，從file/文件中執(zhí)行操作。6）點擊view/視圖然后選擇instrumentcontrol/儀器控制返回到儀器控制界面。注意:自動調諧文件名為ATUNE.U標準譜圖調諧文件名為STUNE.U其余調諧方式有各自的文件名.

8、每次調諧之后如果不改名另存則會自動覆蓋上次相同方式的調諧文件.7890A配置編輯：點擊“Instrument/儀器”菜單，選擇“GCConfiguration./編輯GC軟配置”進入如圖所示畫面。在“Connection/連接”畫面下，輸入GCName：女口“GC7890”；可在Notes處輸入7890A的配置，如“7890GCwith5975CMSD”。點擊“GetGCConfiguration/獲得GC配置”按鈕獲取7890A的配置。ALS/自動液體進樣器配置設定點擊“Conjuration/配置”按鈕,點擊“ALS”子按鈕，輸入注射器的體積，如T0ul”；選擇溶劑清洗模式：如A，B。-若

9、無ALS,則無此內容。模塊配置設定點擊“Modules/模塊”按鈕進入下圖所示畫面，點擊下拉式箭頭，分別選擇進樣口、檢測器、PCM等的氣體類型。柱參數設定點擊“Columns/色譜柱”按鈕，進入柱參數設定畫面。點擊“1”處，進入“安裝色譜柱”畫面。如果要安裝的色譜柱不是Agilent或J&W的，請自行編輯添加，如果是，則點擊“使用清單替換”進入目錄。查找并選中型號匹配的色譜柱點擊“確定”鈕，則該柱被加到目錄中，并選中它，點擊“完成”返回到柱配置界面：接下來點擊該柱后面對應下拉式箭頭選擇連接的進樣口、檢測器及加熱類型。如：FrontInlet/前進樣口、FrontDetector/前檢測器、MS

10、D/真空、Oven/柱箱。同樣方法添加其它柱子。4.3.10其他項設定點擊“Miscellaneous/其他”進入其他項設定，如：選擇壓力單位：psi；輸文件名稱:作業(yè)指導書文件編號：RC/ZY/02-011版本：A/0標題：氣相色譜質譜聯用儀（GC-MS）操作規(guī)程頁碼：4/10入柱子的最大耐高溫：如：325C（19091S433柱）。將輔助加熱器類型配置為MSDTransferline/MSD傳輸線；若閥用于進樣或DEANSWITCH切割，在ValveType/閥類型區(qū)域選擇閥號，并選擇類型為“SwitchingValve/開關閥”，（儀器上有幾個閥就選幾個，與TimeTable配合使用進行

11、閥進樣/切換）。點擊“Ok”退出配置畫面并保存方法。數據采集方法編輯開始編輯完整方法從“Method/方法”菜單中選擇“EditEntireMethod/編輯完整方法”項，選中除“DataAnalysis/數據分析”外的三項，點擊“OK/確定”，進入下一畫面。編輯關于該方法的注釋：點擊“OK/確定”進樣器選擇如果未使用自動液體進樣器7683B，則在“SelectInjectionSource/Location/進樣方式”畫面中選擇“Manual/手動”，使用則選擇“GCALS”。點擊“Ok/確定”，進入下一畫面。柱模式設定進入柱模式設定畫面，點擊T”處進行柱1設定，然后選中“On/打開”左邊方

12、框；選擇控制模式，“flow/流速”或“pressure/壓力”。如：選擇“flow/流速”，輸入1.0,點“Apply/應用”,則設定的流速為1.0ml/min。進樣器參數設定進入進樣器參數設定畫面。點擊“FrontInjector/前進樣器”或“BackInjector/后進樣器”按鈕，進入參數設定畫面。選中進樣體積（如1ul）Prelnj進樣前，Postlnj-進樣后;Volume（ul）一清洗的體積；SampleWash用樣品洗針次數；SolventAWash溶劑A洗針的次數；SolventBWash溶劑B洗針的次數；Pumps趕氣泡抽吸的次數,5-6次左右即可。閥參數設定點擊“”圖標

13、，進入閥設定畫面。若儀器安裝有閥而且該閥用于進樣或DeanSwitch切換，應在儀器配置界面將“Type類型”配置為SwitchingValve/開關閥”，在此方法編輯界面將初始狀態(tài)設為：Off。（儀器上有幾個閥就選幾個，與TimeTable配合使用進行閥進樣）。分流不分流進樣口參數設定進入進樣口設定畫面。點擊“SSL-Front/SSL-前”或“SSL-Back/SSL-后”按鈕進入毛細柱進樣口設定畫面。點擊“Mode/模式”右方的下拉式箭頭,選擇進樣方式為不分流方式文件名稱:作業(yè)指導書文件編號：RC/ZY/02-011版本：A/0標題：氣相色譜質譜聯用儀（GC-MS）操作規(guī)程頁碼：5/10

14、“Splitless/不分流”或“Split/分流”。在空白框內輸入進樣口的溫度（如250C），然后選中左邊的所有方框；選擇“SeptumPurgeFlowMode/隔墊吹掃流量模式”為Standard/標準”，并輸入隔墊吹掃流量：女如3ml/min。對于特殊應用亦可選擇“Switched/可切換的”，進行關閉。在“PurgeFlowtoSplitVent/分流出口吹掃流量”下邊的空白框內輸入吹掃流量（如0.75min后60ml/min）,選擇分流方式，則要輸入分流比或分流流量。柱溫箱溫度參數設定進入柱溫參數設定。在空白表框內輸入溫度，選中“OvenTempOn/柱箱溫度為開”左邊的方框；Ra

15、mp-升溫階次；C/min一升溫速率；Holdmin一保持的時間；輸入柱子的平衡時間（如1min）；下為一程序升溫的例子：75C（0.5min）20C/min190C（0min）AUX參數設定進行輔助參數設定。在輔組加熱區(qū)設定質譜的接口溫度如280C時間表設定點擊“”圖標，進入時間表參數設定，在“Time/時間”下方的空白處輸入時間（如O.Olmin）,點擊“Eventtype/事件類型”下方的下拉式箭頭，選中事件（如，閥）；點擊“Position/位置”下方的下拉式箭頭，選中事件的位號（如閥1）；點擊“Setpoint/設定值”下方的下拉式箭頭，選中事件的狀態(tài)（如打開）。輸入完一行，依此輸入

16、多行。點擊“OK/確定”鈕。信號參數設定進入信號參數設定畫面。點擊“SignalSource/信號源”下方下拉式箭頭，選擇“FrontSignal/前部信號”，本例中為FID；點擊“DataRate/MinPeakWidth/數據采集頻率/最小峰寬”下方的下拉式箭頭，選擇數據采集數率（如5HZ），選擇“SaveData/保存”，存儲所有的數據。進行配置瀏覽。點擊“OK/確定”，進入下一畫面。若GC包含有其他檢測器且正在使用,在是否需要實時繪圖所使用的信號“Display/顯示”前打鉤，然后點擊“OK/確定”，如果沒有GC檢測器，直接按“OK/確定”跳過此畫面。選擇所需的質譜調諧文件，然后點擊“

17、OK/確定”編輯掃描方式質譜參數編輯溶劑延遲時間以保護燈絲，調整倍增器電壓模式（共有三種模式：絕對值，相對值和增益因子），選擇要是用的數據采集模式，如掃描（Scan）、選擇離子（Sim）等。文件名稱:作業(yè)指導書文件編號：RC/ZY/02-011版本：A/0標題：氣相色譜質譜聯用儀（GC-MS）操作規(guī)程頁碼：6/10點擊“ScanParameters/掃描參數”編輯掃描參數根據分析需要設置掃描質量范圍。如果對樣品不很熟悉不必分組：設置溶劑延遲時間選擇采集模式調整倍增器電壓根據分析需要設置閾值和采樣速率，閾值的值會影響到基線，設得過大，可能看不到基線甚至有時候看不到分子離子等較低的碎片離子，過小則

18、基線太雜，采樣率通常根據掃描范圍來定，使Scans/Sec的值達到3左右為好。設置實時繪圖參數然后點擊“Close/關閉”完成掃描參數設定。編輯SIM質譜參數編輯SIM方式參數點擊“SIMParameters/SIM參數”編輯選擇離子參數編輯SIM參數：停留時間（dwelltime）和分辨率參數適用于組里的每一個離子。在Dwell列中輸入的時間是消耗在選擇離子的采樣時間。它的缺省值是100毫秒。它適用于在一般毛細管GC峰中選擇2-3個離子的情況。如果多于3個離子，使用短一點的時間（如30或50毫秒），編輯完SIM參數后，在“EditSIMParams”畫面點擊“OK”加入組加入所選離子采集數據

19、從Method/方法菜單下點擊RunMethod/運行方法來運行一個方法。若儀器配有自動進樣器設定進樣瓶號點擊“OKandrunmethod”則將自動完成數據的采集若為手動進樣則依提示在GC面板上先按“PreRun”鍵，待儀器準備好后進樣的同時按GC面板上的“Start”鍵，以完成數據的采集。依次輸入文件名；操作者；樣品名等相關信息。注意1：當工作站詢問是否取消溶劑延遲時,回答NO或不選擇。如果回答YES則質譜開始采集，容易損壞燈絲。數據分析要想進行譜庫檢索您首先要購買并安裝好商業(yè)譜庫（如NIST05譜庫）或已建立好自己的用戶譜庫。雙擊桌面上文件名稱:作業(yè)指導書文件編號：RC/ZY/02-01

20、1版本：A/0標題：氣相色譜質譜聯用儀（GC-MS）操作規(guī)程頁碼：7/10的“Instrument#1DataAnalysis”圖標，打開MSD的DataAnalysis4.3.21調入數據文件選擇所要處理的數據文件，然后點擊“0K/確定”，本底扣除。執(zhí)行本底扣除操作。經過扣除本底的文件以原文件名保存在DATA/BSB文件夾中。在希望扣除本底的區(qū)域，按住鼠標右鍵拖拽或雙擊右鍵，上述為整體扣除背景，如果想扣除單點背景，則可使用工作站的譜圖相減功能，即按下面方式得到化合物的質譜圖后，在右鍵雙擊峰。附近基線的位置得到本底的質譜圖，然后在菜單Spectrum下選擇Subtract即可得到扣除本底后該化

21、合物的質譜圖。用鼠標右鍵在目標化合物TIC譜圖區(qū)域內拖拽可得到該化合物在所選時間范圍內的平均質譜圖，右鍵雙擊則得到單點的質譜圖。選擇譜庫：在Spectrum菜單下選擇SelectLibrary。按“Browse/瀏覽”在Database目錄下選擇所需的譜庫，選中譜庫名后點擊OK/確定”。在所示的總離子流圖的峰位置雙擊右鍵得到該保留時間的質譜圖。在得到的質譜圖區(qū)域任意位置雙擊鼠標右鍵，即可得到該譜圖在所選譜庫中的檢索結果將結構式加注在質譜圖上。在上圖選擇合適的檢索結果，單擊“Done/完成”，然后在質譜圖的目標位置按住鼠標右鍵拖拽一個矩形即可將該化合物的結構式加注到譜圖上。4.3.22百分比報告

22、在Method方法下調入采集此數據的方法然后積分。通過點擊“AutoIntegrate/自動積分”或“Integrate/積分”得到積分結果，如果對自動積分的結果不滿意，可以到Chromatogram/色譜圖菜單選擇“MsSignalIntegrationParameters/質譜信號積分參數”更改積分參數，然后選擇“Integrate/積分”，直到得到滿意的積分結果。選擇百分比報告：要想得到好的積分結果，積分參數的優(yōu)化非常重要。如threshold（斜率靈敏度）就直接影響到一個峰的積分起始位置。4.4外標法定量調出要制定的標準曲線中最高濃度的數據，右鍵雙擊要定量的峰，選擇合適的目標離子文件名

23、稱:作業(yè)指導書文件編號：RC/ZY/02-011版本：A/0標題：氣相色譜質譜聯用儀（GC-MS）操作規(guī)程頁碼：8/10和參考離子（或參考文獻、標準等選?。?。使用EIC功能提取目標離子和參考離子。優(yōu)化積分參數，確保目標離子和參考離子都能夠得到好的積分：設定定量參數：點擊“Calibrate/校正”菜單，選擇第一項“Setupquantitation/設置定量”進入定量設置界面。為定量曲線取個名字，并選擇合適的曲線類型等，點擊確定進入下一界面。點擊“insertabove/插入上方”進行定量離子的編輯?？捎米箧I畫框的方式將要定量的第一個峰放大，然后右鍵雙擊得到質譜圖。在“name”框中輸入該化合

24、物的名稱，然后將鼠標移至目標離子，左右鍵同時點擊將其選取到定量表中，使用同樣方法選取參考離子點擊“Save”完成對該化合物的編輯，同時進入另一個化合物的編輯。等所有化合物設定完成后，點擊Exit退出編輯界面：再次點擊Exit，在彈出的對話框上選擇“Yes/是”進行定量校正。輸入該校正點化合物的濃度，在level欄里面輸入T”，點擊“DoUpdate”完成第一個點的校正，彈出的對話框顯示的是校正過的各化合物的曲線等信息，如果有的化合物濃度不一致，在此可修改。相對于第一個校正點來說，后面的校正點的加入就簡單得多了，點擊0K并選擇Save退出校正界面。調出第二個校正點的數據，在“Calibrate/校正”菜單下選擇“Update/升級”，在彈出的對話框中選擇“Updateonelevel/升級一個級別,，在選擇Yes進入第二個級別的校正，只要輸入該級