生化反應(yīng)曲線-基礎(chǔ)醫(yī)學-醫(yī)藥衛(wèi)生-專業(yè)課件

1、生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)資料生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)資料生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)課件生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)課件cobas 8000 模塊化組合分析系統(tǒng) 智能、高效、強勁cobas 8000 模塊化組合分析系統(tǒng) 物質(zhì)對光吸收的基本定律 Lambert- Beer定律 LambertBeer定律表達為: 當一束平行的單色光通過含有均勻吸光物質(zhì)的溶液時,溶液的吸光度(A)與溶液的濃度(C)和光透過液層厚度(L)的乘積成正比。物質(zhì)對光吸收的吸光系數(shù)（e）為常數(shù)。 其數(shù)學表達式：A = e*C*L I入射光透射光I0=-光吸收的基本定律=ligh

2、t detector物質(zhì)對光吸收的基本定律 Lambert- Beer定律 根據(jù)Lambert- Beer定律來計算待測物濃度如若吸光系數(shù) ( )未知，我們就需要采用定標曲線 來計算待測物的濃度。 濃度 (amount of substance)吸光度 (amount of color)40123456706050302010Calibrator/standard 標準品 (cfas)待測樣本Concx = Absx x Concs AbssConcx = 待測樣本濃度Concs = 標準品濃度 Absx = 樣本吸光度Abss = 標準品吸光度此值為定值根據(jù)Lambert- Beer定律來計

3、算待測物濃度濃度 (a Lambert-Beer 定律 適合于任何均勻非散射的介質(zhì) 生化比色分析特定蛋白透射比濁分析Lambert-Beer 定律分光光度法定量分析的依據(jù) Lambert-Beer 定律生化比色分析特定蛋白透射比濁Roche Hitachi PhotometerRoche Hitachi Photometer 當相應(yīng)的比色杯每一次通過光路系統(tǒng)時，光路系統(tǒng)會測量并記錄下相應(yīng)的吸光度光路系統(tǒng)可以測量后分光后12個波長的相應(yīng)吸光度。12 有效波長: 340, 376, 415, 450, 480, 505, 546, 570, 600, 660, 700, 800nm 多數(shù)檢測項目都

4、使用雙波長檢測方法。（可去除干擾物對檢測結(jié)果的影響）Reaction sequence 當相應(yīng)的比色杯每一次通過光路系統(tǒng)時，光生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)課件生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)課件儀器讀數(shù)的原理不同儀器每個循環(huán)周期的時間間隔Modular P 18秒Cobas c702 16秒Cobas C501 8秒Modular D 12秒C311 12秒反應(yīng)轉(zhuǎn)盤不停的周期旋轉(zhuǎn)當相應(yīng)的比色杯通過光路系統(tǒng)時，光路系統(tǒng)會測量并記錄下相應(yīng)的吸光度在不同的時間點加入相應(yīng)的反應(yīng)試劑儀器讀數(shù)的原理不同儀器每個循環(huán)周期的時間間隔反應(yīng)轉(zhuǎn)盤不停的周Reaction sequenceReacti

5、on sequenceInstrument cycleInstrument cycleEndpoint and rate (kinetic) assays自動生化分析常用的方法有:終點法（End Point Assays）：一般在整個反應(yīng)完成后再來檢測吸光度速率法（Rate assays） ：一般在反應(yīng)的過程中監(jiān)測吸光度的變化情況Endpoint and rate (kinetic) as終點分析法時間吸光度A 1tS+R1 基于 被測物質(zhì)在反應(yīng)過程中到達反應(yīng)終點或平衡點，根據(jù)該點吸光度的大小求出被測物濃度，稱為終點法。 終點法的計算： 從時間-吸光度曲線來看，到達反應(yīng)終點時，吸光度將不再變化

6、。在達到終點時任取一點進行測定，此時底物和產(chǎn)物的量都不再變化。吸光度A 1S+R1吸光度終點分析法時間吸光度A 1tS+R1 兩點終點法（2-point end）一點終點法 （1-point end）一點終點單試劑（1-point endpoint assay one reagent）一點終點雙試劑（1-point endpoint assay two reagents）三點終點法（3-point end）終點分析法（Endpoint assays）兩點終點法（2-point end）終點分析法（Endpoi兩點終點法 在被測物反應(yīng)或指示反應(yīng)尚未開始時，選擇第一個吸光度，在反應(yīng)到達終點或平衡時

7、選擇第二個吸光度，此兩點吸光度之差用于計算結(jié)果。兩點終點法 在被測物反應(yīng)或指示反應(yīng)尚未開始去除了樣本的本底采用兩個測量點 針對兩個或多個試劑的項目第一個讀數(shù)點一般選在添加最后一個試劑之前第二個讀數(shù)點一般選在加入最后一個試劑之后且已經(jīng)達到了反應(yīng)終點兩點終點法的特點C + D (顯色產(chǎn)物)+ B1 (試劑1) + B2 (試劑 2)A (樣本)Endpoint assays去除了樣本的本底兩點終點法的特點C + D (顯色產(chǎn)兩點終點法的反應(yīng)曲線Cobas c702Endpoint assaysSample+R1Mp1 abs before addition of R3Mp2 abs at reac

8、tion end兩點終點法的反應(yīng)曲線Cobas c702Endpoint 兩點讀數(shù)的時間點:第19點測量包含了樣本和試劑1的本底 sample + reagent 1 第 38點在加入所有試劑后，反應(yīng)達到終點 sample + reagent 1+ reagent 2兩點終點法的應(yīng)用參數(shù) Cobas c702測量的兩個讀數(shù)點方法類型總反應(yīng)時間（min）2Point Endpoint assay application settings兩點讀數(shù)的時間點:兩點終點法的應(yīng)用參數(shù) Cobas c7RF-II C4 C3 ASL CRPL IGG IGA IGM兩點終點法分析項目舉例Endpoint a

9、ssaysRF-II C4兩點終點法一點終點法A單試劑一點終點法例如:CHOL/TG. 在反應(yīng)到達終點，即在時間-吸光度曲線上吸光度不再改變時選擇一個終點吸光度值，用于計算結(jié)果。B雙試劑一點終點法Mg(雙試劑)一點終點法A單試劑一點終點法 在反應(yīng)到單試劑一點終點法的特點（1-point endpoint assay one reagent）不包含樣本的本底僅進行一個點的測量檢測項目舉例：甘油三酯（TG）Endpoint assaysA (樣本) C + D (顯色產(chǎn)物)+ B (試劑)單試劑一點終點法的特點（1-point endpoint a單試劑一點終點法的反應(yīng)曲線1-point endp

10、oint assay one reagentsEndpoint assays單試劑一點終點法的反應(yīng)曲線1-point endpoint 不包含樣本的本底僅進行一點測量應(yīng)用項目舉例： Magnesium不采用兩點終點法主要是樣本和R1體積相加仍180uL(最小反應(yīng)體積，無法測量）雙試劑一點終點法的特點（1-point endpoint assay two reagents）C + D (product)+ B1 (reagent 1) + B2 (reagent 2)A (sample)不包含樣本的本底雙試劑一點終點法的特點（1-point en1st entry: 方法類型2nd entry:

11、總分析時間3rd - 6th entry:測量點 一點終點法應(yīng)用參數(shù)（1 Point Endpoint assay）Utility - Application - Analyze一點終點法應(yīng)用參數(shù)（1 Point Endpoint ass TRIGL CHO 一點終點法分析項目舉例Endpoint assays TRIGL CHO一點例如,多項同測組合試劑盒,CHO與TG同一測定 即雙終點法,在一個通道內(nèi)一次進行兩項反應(yīng)相關(guān)的終點法測定.三點終點法例如,多項同測組合試劑盒,CHO與TG同一測定 上升 increasing 或 下降decreasing終點法反應(yīng)的方向（Reaction Dire

12、ction）上升 increasing 或 下降decreasing終點 速率法 吸光度tt2t1t3t4A1A2A3S+R時間A 1 利用線性反應(yīng)期，計算出單位時間的吸光度變化A/min，來計算酶的活性。單位時間的吸光度變化量是一致的 在酶促反應(yīng)過程中,在反應(yīng)速度恒定期(線性反應(yīng)期)來連續(xù)觀察和記錄一定反應(yīng)時間內(nèi)底物或代謝產(chǎn)物變化速度的化學方法. 速率法 吸光度tt2t1t3t4速率A法 （Rate A）兩點速率法（2-point Rate）速率法（Endpoint assays）速率A法 （Rate A）速率法（Endpoint assa 速率A法A 單試劑速率法例如:ACPAFUB 雙試

13、劑速率法 例如:ALTASTCK 在較長的反應(yīng)時間區(qū)段內(nèi),每隔一定時間讀取一次吸光度值,至少讀取4點,得到3個A,求出單位時間的反應(yīng)速率 A/min .通過最小二乘法（least squares method） 速率A法A 單試劑速率法B 雙試劑速率法Rate A assay Modular PReag. at R3 timingLast mp1st. mpSample Reag. at R1 timingRate assaysRate A assay Modular PReag. GOT/ASTGGTGPT/ ALT LipaseALPGLDHAmylaseLDHCHECKMB 速率A 法-

14、分析項目舉例EnzymesRate assaysGOT/ASTGGT速率A 法-分析項目舉例Enzymes 2點速率法 2點速率法尿素氮 指在時間-吸光度曲線上選擇兩個測光點，此兩點既非反應(yīng)初始吸光度亦非終點吸光度，這兩點的單位時間吸光度差值用于結(jié)果計算。 2點速率法 2點速率法尿素氮 2-point Rate assayRate assaysC + D (product)+ B1 (reagent 1) + B2 (reagent 2)A (sample)Enzyme2-point Rate assayRate assaysC采用一種或多種試劑檢測兩個測量點檢測固定的間隔時間內(nèi)兩點的吸光度變

15、化。 換算成 Abs/min參與計算在加入最后最后一個試劑之后進行吸光度檢測。兩點速率法的特點2-point Rate assayRate assays采用一種或多種試劑兩點速率法的特點2-point Rate 2-point Rate assay Modular PRate assays2-point Rate assay Modular PAmmoniaAcid phosphataseNon-prostatic phosphataseUrinary/CSF protein BicarbonateUreaRate assays2點速率 法-分析項目舉例AmmoniaRate assays2點

16、速率 法-分析項目Reaction Direction上升decreasing 或 下降increasingReaction Direction上升decreasing生化反應(yīng)曲線 生化反應(yīng)曲線 生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)課件生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)課件生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)課件生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)課件生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)課件生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)課件生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)課件生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)課件生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)課件生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)課件生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)課件生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)課件生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)課件生化反應(yīng)曲線_基礎(chǔ)醫(yī)學_醫(yī)藥衛(wèi)生_專業(yè)課件Thank you for your attentionRoche Diagnostics (Shanghai) Limited Shanghai 200031ChinaT