02-LCMS8050方法編輯操作步驟V2

LCMS-8050方法編輯操作步驟打開實時分析窗口—鼠標左鍵單擊需要使用的儀器配置類型聯(lián)機成功后聽到“嘀”一聲，界面顯示如下，LC和MS應顯示為“Ready”3．新建文件存儲路徑點擊數(shù)據(jù)管理器窗口右上角的“SelectProject(Folder)”圖標（若數(shù)據(jù)管理器窗口沒有出現(xiàn)，請點擊工具欄中的“ToggleDataExploror”圖標）文件存儲路徑為樹狀結構，下圖藍色標記的文件夾即為選中的文件夾，若需要重新建立新的文件夾，可以先選擇路徑，再點擊下圖中“NewFolder”，新文件夾會自動建立在所選路徑下，文件夾名稱可根據(jù)項目要求自行輸入，復選框中“MethodFiles”、“ReportFormatFiles”、“BatchFiles”默認為選中狀態(tài)，表示將當前文件夾下的這些文件均復制到新建立的文件夾中，如果想建立完全空的文件夾，可以將復選框中的“√”去掉。請將上圖中selectproject和toggledataexploror標注互換請將上圖中selectproject和toggledataexploror標注互換4．創(chuàng)建新方法鼠標左鍵單擊“NewMethodFile”，單擊“Save”圖標，在彈出的對話框中輸入方法文件名，方法文件的保存路徑默認為當前文件夾，如果需要更換文件夾，“保存”在對應的下拉菜單中可以進行更改。5．MRM方法的建立定量工作一般采用MRM模式，對于目標化合物首先需要建立化合物的MRM分析方法。注：MRM參數(shù)與分離條件無關，優(yōu)化好的MRM方法可以在不同分析方法中使用。Q1/Q3掃描配制一定濃度（例如100μg/L）的目標化合物單標或者混標，通過自動進樣器進樣（例如1μL），采用FIA模式，進行Q1/Q3掃描尋找目標物質的母離子，可正負離子同時掃描，添加負離子掃描事件時，選中“Negative”，鼠標左鍵單擊Scan（-），即可自動添加負離子掃描事件。在掃描條件設置中根據(jù)目標化合物的分子量設置合適的“Startm/z”和“Endm/z”，同時“EventTime”設置為0.2sec，“Acq.Time”修改為0-0.5min掃描分析時“Interface”參數(shù)可采用默認參數(shù)，不需要修改分析時間“DataAcquisition”設置為0.5min“TimeProgram”不進行設置“Pump”部分選擇“Binarygradient”，“TotalFlow”0.4mL/min，“PumpBConc.”80%“ColumnOven”前的“√”去掉“Autosampler”將RinseType改為“off（FastLC）”將以上條件設置好后，保存方法，鼠標左鍵點擊快捷鍵“”，然后鼠標左鍵按“Download”鍵。單針/批處理進樣分析。數(shù)據(jù)結果查察看打開Postrun的“再解析”窗口，打開數(shù)據(jù)文件，使用“AverageSpectrum”工具，查看某段時間內的平均質譜圖，找到目標化合物的[M+H]+或者[M-H]-及加合離子信息，根據(jù)分析結果選擇合適的母離子。上圖中“上圖中“前提離子”改為“前體離子”使用軟件自動優(yōu)化產(chǎn)物離子及MRM參數(shù)鼠標左鍵單擊“OptimizationforMethod”，彈出的對話框中選擇“SearchproductionandoptimizeMRM”作為優(yōu)化方式，點擊“下一步”。在彈出的對話框中依次輸入“CompoundName”、“Precursorm/z”、“End(min)”、“Vial”、“Tray”、“InjVol.”等信息?！癈ompoundName”為目標化合物名稱“Precursorm/z”為目標化合物對應的前體離子“End(min)”設為0.5min“Vial”為樣品瓶放置的孔位“Tray”為樣品瓶放置的樣品架架號“InjVol.”為進樣體積，通常采用1.0μL前體離子和產(chǎn)物離子質量數(shù)“前體離子和產(chǎn)物離子質量數(shù)“校準”建議改為“優(yōu)化”。優(yōu)化結果的存儲路徑為“OutputFolder”中所顯示的文件夾，可對文件夾名字進行修改。其他條件采用默認即可，不必進行修改。可以同時進行多個化合物的優(yōu)化，只需要在列表中依次選中“Target”，編輯相應行的內容即可。完成以上編輯，鼠標左鍵點擊“Start”，開始MRM優(yōu)化過程。注：“采用這種方式完成一個化合物的MRM優(yōu)化需要5步，通常4分鐘內可以完成一個化合物的優(yōu)化，若時間過長，建議Stop整個優(yōu)化過程，檢查End(min)是否修改為0.5min（默認為10min）。產(chǎn)物離子掃描如果需要目標化合物的產(chǎn)物離子掃描圖，或者采用自動優(yōu)化模式優(yōu)化出來的離子對不滿意，需要進行目標化合物產(chǎn)物離子掃描，了解產(chǎn)物離子的碎裂情況，此時建議采用產(chǎn)物離子掃描。根據(jù)前體離子的正負性，選擇“ProductIonScan(+)”或“ProductIonScan(-)”。編輯產(chǎn)物離子掃描范圍，定義“Startm/z”和“Endm/z”，一般設置50~稍大于母離子質荷比輸入母離子信息“PrecursorIonm/z”，根據(jù)Q1/Q3Scan的結果輸入合適的母離子“CollisionEnergyEngrgy”可從-10.0V開始（注：碰撞能量正離子為負值，負離子為正值）“EventTime”設為0.2sec其他部分條件設置見2）部分，此處不再重復將此事件復制，添加到MS的事件表格中添加多個ProductIonScan數(shù)據(jù)每個事件中“CollisionEnergy”以5V遞增，考察到-50V數(shù)據(jù)結果察看打開Postrun的“再解析”窗口，打開數(shù)據(jù)文件，鼠標左鍵單擊色譜圖，在相應的“SpectrumView”窗口查看質譜圖信息。如果為多Event分析，會出現(xiàn)多張產(chǎn)物離子質譜圖信息，通常選擇前體離子為最大產(chǎn)物離子豐度1/10的質譜圖作為典型產(chǎn)物離子分布圖。從產(chǎn)物離子質譜圖中可以獲得豐度較高的碎片離子，作為進一步MRM優(yōu)化的基礎。使用指定離子對優(yōu)化的方式進行MRM優(yōu)化添加MRM方法，將指定優(yōu)化的前體離子和產(chǎn)物離子輸入表格中，修改Acq.Time0-0.5min注：推薦一個化合物一個Event，一個Event下可以對應這個化合物的定量、定性離子對DwellTime不能為0，可以用任意數(shù)字CE值不需要修改一定要修改Acq.Time為0-0.5min（默認為0-10min），否則會使得優(yōu)化時間大大增加鼠標左鍵點擊助手欄“OptimizationforMethod”，在彈出的對話框中選擇第二種優(yōu)化方式“OptimizeMRMevent”，點擊“下一步”在彈出的對話框中依次輸入“Vial”、“Tray”、“InjVol.”等信息。“Vial”為樣品瓶放置的孔位“Tray”為樣品瓶放置的樣品架架號“InjVol.”為進樣體積，通常采用1.0優(yōu)化結果的存儲路徑為“OutputFolder”中所顯示的文件夾，可對文件夾名字進行修改。其他條件采用默認即可，不必進行修改?？梢酝瑫r進行多個化合物的優(yōu)化，只需要在列表中依次選中“Target”，編輯相應行的內容即可。完成以上編輯，鼠標左鍵點擊“Start”，開始MRM優(yōu)化過程。注：“采用這種方式完成一個化合物的MRM優(yōu)化需要4步，通常4分鐘內可以完成一個化合物的優(yōu)化，若時間過長，建議Stop整個優(yōu)化過程，檢查方法中是否修改為0.5min（默認為10min）。6.液質方法建立1）參考之前的步驟建立新方法2）將第5步優(yōu)化好的MRM方法加載到建立好的方法文件中找到MRM方法文件所在的文件夾，選中所有需要的MRM方法文件將Acq.Time修改為分析一個樣品所需的時間，例如0-10min?？梢灾恍薷囊粋€Event采集時間，鼠標右鍵調出菜單，選擇“Setsamemeasurementtime”。3）Interface參數(shù)設置如果分析時靈敏度可以滿足要求，可以使用默認條件；若需要提高靈敏度，可以對離子源參數(shù)進行優(yōu)化。4）采集時長設置液相條件設置Pump選項卡欄條件設置液相色譜的初始條件在Pump選項卡一欄中設置二元高壓系統(tǒng)選擇“Binarygradient”，設置“TotalFlow”、初始濃度“PumpBConc.”、最高壓力限“Maximum”、最低壓力限“Minimum”注：PumpBCurve如果采用線性梯度，請采用默認值0如果為UHPLC系統(tǒng)，請設置壓縮系數(shù)，鼠標左鍵點擊“CompressibilitySettings”，在彈出的對話框中選擇流動相對應的類型。梯度時間程序設置在表格中輸入時間程序注：初始條件即0.00minBConc.設置已經(jīng)在Pump中設定，時間程序中無法輸入0.00min的命令；時間程序編寫時不需要嚴格按照時間先前后順序編寫；不要刪除ControllerStop命令，否則程序會報錯。柱溫設定將“ColumnOven”前的復選框選中，在“OvenTemperature”中設置柱溫。注：“Temperature”90℃（CTO-20A/20AC，CTO-30AS），“Temperature”160℃（CTO-30A）表示柱溫箱的最高溫度，可設置為色譜柱的最高使用溫度進而保護色譜柱?？刂破髂J為“Poweron”，不作修改。自動進樣器設置如果分析時出現(xiàn)樣品架找不到，可以使用“DetectRack”自動識別，系統(tǒng)會根據(jù)樣品架類型自動識別；如果還是找不到，檢查樣品架是否推到位。NeedleStroke為進樣針扎入樣品瓶的深度，默認52mm，建議不作修改；ControlVialNeedleStroke為0號架進樣針扎入的深度，默認52mm；SamplingSpeed為吸樣速度，5.0μL/sec，建議不作修改，如果樣品粘度較大，可以適當改??；CoolerTemperature對于有制冷功能的自動進樣器可以設置自動進樣器冷卻溫度MeasuringLinePurgeVolume為定量環(huán)排氣體積，默認100μL，建議不作修改自動進樣器型號為SIL-30AC時：洗針方式默認采用“Externalonly”，表示進行進樣針外壁清洗，清洗液默認為R0路；清洗速度35μL/sec為最大速度，清洗體積默認500μL，可根據(jù)實驗需要調整，最大為2000μL；DipTime為進樣針在進樣口停留的時間，最長為60sec，根據(jù)實驗需要調整；“Rinepump”默認為“Rinseportonly”，表示只使用R0路清洗液對進樣針外壁進行清洗；如果化合物殘留嚴重，SIL-30AC支持使用R3路清洗液作為強洗溶劑對針外壁進行清洗，建議使用“R