人教選修一21微生物的實驗室培養(yǎng)課件第一課時2

課題1微生物的實驗室培養(yǎng)第一課時專題2:微生物的培養(yǎng)與應用課題1微生物的實驗室培養(yǎng)專題2:微生物的培養(yǎng)與應用到目前為止，幾十項Nobel生理學和醫(yī)學獎，化學獎都與微生物學有關到目前為止，微生物包括哪五類：病毒細菌放線菌真菌原生動物原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物基礎知識微生物包括哪五類：病毒原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物的類群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌單細胞的動植物如草履蟲、單細胞藻類等微生物包含了除植物界和動物界以外的所有生物無細胞結構真核細胞細菌、藍藻、放線菌原核細胞特點：結構都相當簡單,個體多數十分微小.通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細胞結構.且體內一般不含有葉綠素.不能進行光合作用.微生物的類群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌單細胞的細菌的外形與大小細菌：單細胞不分枝的原核微生物。細菌細胞微小而透明，通常用適當染料染色后顯微鏡觀察圖1-1常見的三種細菌典型形態(tài)A.球菌

B.桿菌C.弧菌細菌的外形與大小細菌：單細胞不分枝的原核微生物。圖1-1細菌細胞由外向里依次有鞭毛、菌（纖）毛、莢膜、細胞壁、細胞膜、細胞質，細胞質中又有液泡、儲存性顆粒、核質等。細菌的構造圖1-3細菌的結構細菌細胞由外向里依次有鞭毛、菌（纖）毛、莢膜、細胞壁、細胞膜*細胞壁結構特點：堅韌且有彈性細胞壁有哪些功能？①固定細胞外形；

②保護細胞免受外力的損傷；

③阻攔大分子物質進人細胞；④使細胞具有致病性及對噬菌體的敏感性。傷寒桿菌細胞壁中含毒素*細胞壁結構特點：堅韌且有彈性②保護細胞免受外力的損傷芽孢有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。例如，有的細菌的芽孢，煮沸3小時以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風飄散。當環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細菌.芽孢有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓菌落：單個或少數細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結構的子細胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據。菌落：單個或少數細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉菌落細菌的菌落特征因種而異菌落細菌的菌落特征因種而異放線菌1、結構：單細胞原核分支狀的菌絲（基內菌絲、氣生菌絲）放線菌1、結構：鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素、慶大霉素

微生物中發(fā)現了幾千種抗生素，其中2/3是由放線菌產生的

應用:鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、微生物中發(fā)現了幾千種抗生素，其中2/病毒的結構病毒的結構病毒

病毒SARS病毒、禽流感病毒SARS病毒、禽流感病毒朊病毒（蛋白質病毒）朊病毒（蛋白質病毒）2、病毒的增殖：2、病毒的增殖：真菌真菌如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)結構酵母菌和霉菌青霉如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)結構酵母菌和霉菌青霉生殖直立菌絲營養(yǎng)菌絲腐生生活孢子生殖生殖直立菌絲營養(yǎng)菌絲腐生生活孢子生殖細菌的營養(yǎng)類型根據細菌所利用的能源和碳源的不同，將細菌分為兩大營養(yǎng)類型。自養(yǎng)菌（autotroph）異養(yǎng)菌（heterotroph）腐生菌寄生菌大部分病原菌細菌的營養(yǎng)類型根據細菌所利用的能源和碳源的不同，將細菌分為微生物包括哪五類：病毒細菌放線菌真菌原生動物特點：結構都相當簡單,個體多數十分微小。通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細胞結構，且體內一般不含有葉綠素，不能進行光合作用。原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物包括哪五類：病毒特點：結構都相當簡單,個體多數十分微小人教選修一21微生物的實驗室培養(yǎng)課件第一課時21、了解培養(yǎng)基的基礎知識，掌握培養(yǎng)基的配制、分裝方法。2、掌握常用的消毒和滅菌的方法，進行無菌技術的操作

一、教學目標無菌技術的操作。二、課題重點和難點：1、了解培養(yǎng)基的基礎知識，掌握培養(yǎng)基的配制、分裝方法。一、一、基礎知識：（一）培養(yǎng)基

培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、無機鹽等營養(yǎng)物質，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質,例如:生長因子(即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。一、基礎知識：（一）培養(yǎng)基培養(yǎng)基（培養(yǎng)液（一）.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質1.基本成分：思考：微生物“吃”什么？水、無機鹽、碳源、氮源⑴碳源無機碳源：有機碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物⑵氮源NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有機物為異養(yǎng)型微生物提供碳源、氮源、能源（一）.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質1.基本成分：思考（一）.培養(yǎng)基：1.基本成分：水、無機鹽、碳源、氮源2.特殊營養(yǎng)：維生素、堿基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、氧氣的需求：4.種類：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有無凝固劑瓊脂分離鑒定工業(yè)生產化學成分：物理性質：天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基（一）.培養(yǎng)基：1.基本成分：水、無機鹽、碳源、氮源2.特殊培養(yǎng)基類型配制特點主要應用物理性質固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多微生物的分離、計數等半固體培養(yǎng)基加入瓊脂較少觀察微生物運動、鑒定菌種、保藏菌種等液體培養(yǎng)基不加入瓊脂工業(yè)生產，連續(xù)培養(yǎng)化學組成合成培養(yǎng)基由已知成分配制而成，培養(yǎng)基成分明確菌種分類、鑒定天然培養(yǎng)基由天然成分配制而成，培養(yǎng)基成分不明確工業(yè)生產目的用途鑒別培養(yǎng)基添加某種指示劑或化學藥品鑒別不同種類的微生物選擇培養(yǎng)基添加（或缺少）某種化學物質

培養(yǎng)、分離出特定的微生物培養(yǎng)基類型配制特點主要應用物理性質固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多微生選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基:

分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基:

分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基:

分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基:

分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基:

分離導入了目的基因的受體細胞加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)基:

分離雜交瘤細胞選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基:

這些營養(yǎng)成分是構成細胞結構的元素和化合物的基本元素，碳源：如CO2、糖類、脂肪酸等有機物，構成微生物的結構物質和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨鹽、硝酸鹽、牛肉膏、蛋白胨等，主要用來合成蛋白質、核酸及含氮代謝物等。1、從細胞的化學元素組成來看，培養(yǎng)基中為什么都含有這些營養(yǎng)成分？課堂探究這些營養(yǎng)成分是構成細胞結構的元素和化合物的基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養(yǎng)基。1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g分析營養(yǎng)構成？牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（二）無菌技術無菌技術的概念

無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。

獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是防止外來雜菌的入侵，無菌技術就是防止雜菌污染的操作技術。（二）無菌技術無菌技術的概念無菌操作泛指在培消毒1、無菌技術的種類滅菌使用較為溫和的物理和化學方法（酒精、紫外線）來殺死部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子。使用較為強烈的理化因素殺死物體內外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。以化學劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達到完全無菌之過程。消毒1、無菌技術的種類滅菌使用較為溫和的物理和化學方法（

對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔消毒；將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌；接種的過程要在酒精燈火焰附近進行。避免已經滅菌處理的材料用具與周圍物品接觸對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔消毒；1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min9(牛奶）3、化學藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒;氯氣消毒水源（酒精擦拭雙手4、紫外線消毒：（工作臺、接種室）(能使蛋白質變性，還能損傷DNA的結構）……(1)消毒的方法3.常用的消毒與滅菌的方法1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min(1)消毒的方法3.（1）、灼燒滅菌：接種用具和接種過程中的試管口或瓶口放在酒精燈火焰的充分燃燒層中進行灼燒滅菌。試管口或瓶口等容易被污染的部位3、常用的消毒與滅菌的方法（2）、干熱滅菌：將玻璃器皿、金屬用具等能耐高溫并需要保持干燥的物品放到干熱滅菌箱內，在160～170OC中加熱1～2h即可。（3）、高壓蒸汽滅菌：將需滅菌的物品放到盛有水的高壓蒸汽滅菌鍋內煮沸，待冷空氣排盡后，密閉繼續(xù)加熱至鍋內壓力到100kPa，溫度到121OC后，維持15～30min即可。（1）、灼燒滅菌：接種用具和接種過程中的試管口或瓶口放在酒精1、灼燒滅菌2、干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。3、高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.(2)滅菌的方法：1、灼燒滅菌(2)滅菌的方法：1.無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實驗操作者的雙手

無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。P15-16旁欄思考1.無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外4.無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。課堂探究4.無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外拓展延伸定義常用方法微生物培養(yǎng)和組培的應用消毒使用較為溫和的物理或化學方法殺死物體表面或內部的部分菌體,但不傷及活組織煮沸玻璃儀器紫外線實驗室、操作臺、衣物等酒精溶液手、外植體等次氯酸鈉溶液等外植體滅菌使用強烈的理化因素殺死物體內外所有菌體、芽孢和孢子高壓蒸汽培養(yǎng)基、玻璃儀器、棉塞、牛皮紙等灼燒接種環(huán)、涂布器等干熱玻璃儀器拓展延伸定義常用方法微生物培養(yǎng)和組培的應用消毒使用較為溫和的單個或少數菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。3.功能：1.定義：三.菌落鑒定菌種的重要依據固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基上大量繁殖子細胞群體單個2.特征：大小、形狀、光澤度、3.功能：1.定義：三.菌微生物實驗室培養(yǎng)的基本操作程序1、器具的滅菌2、培養(yǎng)基的配制3、培養(yǎng)基的滅菌4、倒平板5、微生物接種6、恒溫箱中培養(yǎng)7、菌種的保存微生物實驗室培養(yǎng)的基本操作程序1、器具的滅菌三、實驗操作

1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細菌）三、實驗操作1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細菌）培養(yǎng)基的配制原則①目的要明確：根據培養(yǎng)的微生物種類、培養(yǎng)的目的等確定培養(yǎng)基的類型和配制量。②營養(yǎng)要協(xié)調：培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質的濃度和比例要適宜。③pH要適宜：細菌培養(yǎng)基pH中性或偏堿性，霉菌培養(yǎng)基呈酸性。培養(yǎng)基的配制原則①目的要明確：根據培養(yǎng)的微生物種類、培養(yǎng)的目（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計算：（根據微生物生長時對營養(yǎng)物質的需求）物質牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水重量5g10g5g20g定溶至1000mL2.稱量

準確稱取各種成分，注意事項：牛肉膏要放在稱量紙上稱量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，稱取時動作要迅速，稱后及時蓋上瓶蓋。三、實驗操作思考：該培養(yǎng)基從物理性質分屬于哪種？原因？含有幾種營養(yǎng)成分？牛肉膏提供上述哪幾種成分？（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計算：（根據微生物生長時3.溶化：先將牛肉膏連同稱量紙一起放入燒杯，加少量水，加熱至牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻璃棒取出稱量紙。加入蛋白胨和氯化鈉，用玻璃棒攪拌使之溶解，再加入瓊脂，不斷用玻璃棒攪拌，原因：防止瓊脂糊底而導致燒杯破裂。待溶解后，加自來水定溶至100mL。（熔化后滅菌前應該調節(jié)PH)

4.滅菌：將配制好的培養(yǎng)基放到錐形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮紙），連同培養(yǎng)皿（3～5套，用幾層報紙包好）一起放到高壓蒸汽滅菌鍋內滅菌。

5.倒平板：待培養(yǎng)基冷卻到50OC左右時倒平板。3.溶化：先將牛肉膏連同稱量紙一起放入燒杯，加少量水，加?思考3①溶化時為什么要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱?

②加瓊脂的目的是什么?可保證粘附在稱量紙上的牛肉膏也能溶于水中,減少誤差作為凝固劑?思考3①溶化時為什么要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱?可保證粘思考4

①在滅菌前,用牛皮紙、舊報紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶的目的是什么？②培養(yǎng)皿能否用高壓蒸汽滅菌？?在滅菌時能避免水蒸汽凝結時浸濕棉塞；在取出培養(yǎng)基錐形瓶時也能起到隔絕空氣中雜菌污染的作用不能,因為培養(yǎng)皿要保持干燥,應該用干熱滅菌思考4①在滅菌前,用牛皮紙、舊報紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶倒平板技術倒平板技術倒平板操作的討論

1.培養(yǎng)基滅菌后要冷卻到50OC時倒平板。用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？

用手觸摸錐形瓶，溫度下降到剛剛不燙手時即可開始倒平板。

2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？

通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。倒平板操作的討論1.培養(yǎng)基滅菌后要冷卻到50OC時倒

3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？

平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。

4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？

空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒1．計算、稱量2．溶化3．調pH：pH7．6

4．過濾：這一步可以省去。5．分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。6．加塞7．包扎操作步驟1．計算、稱量操作步驟8．滅菌:

將50ml培養(yǎng)基用玻棒轉移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。將培養(yǎng)皿用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內，在160～170℃下滅菌2h。9．倒平板:

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種.10．無菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。8．滅菌:編號成分含量①粉狀硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml練習：右表是某微生物培養(yǎng)基成分，據此回答：（1）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型是

。（2）若不慎將過量NaCl加入培養(yǎng)基中。如不想浪費此培養(yǎng)基，可再加入

，用于培養(yǎng)金黃色葡萄球菌。自養(yǎng)型微生物

含碳有機物

編號成分含量①粉狀硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2（3）若除去成分②，加入（CH2O），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)

。（4）表中營養(yǎng)成分共有

類。（5）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進行的是

。（6）右表中各成分重量確定的原則是

。（7）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應該增加的成分是

。自生固氮微生物

3調整pH

依微生物的生長需要確定

瓊脂（或凝固劑）

編號成分含量①粉狀硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml（3）若除去成分②，加入（CH2O），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)課題1微生物的實驗室培養(yǎng)第一課時專題2:微生物的培養(yǎng)與應用課題1微生物的實驗室培養(yǎng)專題2:微生物的培養(yǎng)與應用到目前為止，幾十項Nobel生理學和醫(yī)學獎，化學獎都與微生物學有關到目前為止，微生物包括哪五類：病毒細菌放線菌真菌原生動物原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物基礎知識微生物包括哪五類：病毒原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物的類群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌單細胞的動植物如草履蟲、單細胞藻類等微生物包含了除植物界和動物界以外的所有生物無細胞結構真核細胞細菌、藍藻、放線菌原核細胞特點：結構都相當簡單,個體多數十分微小.通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細胞結構.且體內一般不含有葉綠素.不能進行光合作用.微生物的類群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌單細胞的細菌的外形與大小細菌：單細胞不分枝的原核微生物。細菌細胞微小而透明，通常用適當染料染色后顯微鏡觀察圖1-1常見的三種細菌典型形態(tài)A.球菌

B.桿菌C.弧菌細菌的外形與大小細菌：單細胞不分枝的原核微生物。圖1-1細菌細胞由外向里依次有鞭毛、菌（纖）毛、莢膜、細胞壁、細胞膜、細胞質，細胞質中又有液泡、儲存性顆粒、核質等。細菌的構造圖1-3細菌的結構細菌細胞由外向里依次有鞭毛、菌（纖）毛、莢膜、細胞壁、細胞膜*細胞壁結構特點：堅韌且有彈性細胞壁有哪些功能？①固定細胞外形；

②保護細胞免受外力的損傷；

③阻攔大分子物質進人細胞；④使細胞具有致病性及對噬菌體的敏感性。傷寒桿菌細胞壁中含毒素*細胞壁結構特點：堅韌且有彈性②保護細胞免受外力的損傷芽孢有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。例如，有的細菌的芽孢，煮沸3小時以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風飄散。當環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細菌.芽孢有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓菌落：單個或少數細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結構的子細胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據。菌落：單個或少數細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉菌落細菌的菌落特征因種而異菌落細菌的菌落特征因種而異放線菌1、結構：單細胞原核分支狀的菌絲（基內菌絲、氣生菌絲）放線菌1、結構：鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素、慶大霉素

微生物中發(fā)現了幾千種抗生素，其中2/3是由放線菌產生的

應用:鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、微生物中發(fā)現了幾千種抗生素，其中2/病毒的結構病毒的結構病毒

病毒SARS病毒、禽流感病毒SARS病毒、禽流感病毒朊病毒（蛋白質病毒）朊病毒（蛋白質病毒）2、病毒的增殖：2、病毒的增殖：真菌真菌如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)結構酵母菌和霉菌青霉如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)結構酵母菌和霉菌青霉生殖直立菌絲營養(yǎng)菌絲腐生生活孢子生殖生殖直立菌絲營養(yǎng)菌絲腐生生活孢子生殖細菌的營養(yǎng)類型根據細菌所利用的能源和碳源的不同，將細菌分為兩大營養(yǎng)類型。自養(yǎng)菌（autotroph）異養(yǎng)菌（heterotroph）腐生菌寄生菌大部分病原菌細菌的營養(yǎng)類型根據細菌所利用的能源和碳源的不同，將細菌分為微生物包括哪五類：病毒細菌放線菌真菌原生動物特點：結構都相當簡單,個體多數十分微小。通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細胞結構，且體內一般不含有葉綠素，不能進行光合作用。原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物包括哪五類：病毒特點：結構都相當簡單,個體多數十分微小人教選修一21微生物的實驗室培養(yǎng)課件第一課時21、了解培養(yǎng)基的基礎知識，掌握培養(yǎng)基的配制、分裝方法。2、掌握常用的消毒和滅菌的方法，進行無菌技術的操作

一、教學目標無菌技術的操作。二、課題重點和難點：1、了解培養(yǎng)基的基礎知識，掌握培養(yǎng)基的配制、分裝方法。一、一、基礎知識：（一）培養(yǎng)基

培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、無機鹽等營養(yǎng)物質，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質,例如:生長因子(即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。一、基礎知識：（一）培養(yǎng)基培養(yǎng)基（培養(yǎng)液（一）.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質1.基本成分：思考：微生物“吃”什么？水、無機鹽、碳源、氮源⑴碳源無機碳源：有機碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物⑵氮源NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有機物為異養(yǎng)型微生物提供碳源、氮源、能源（一）.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質1.基本成分：思考（一）.培養(yǎng)基：1.基本成分：水、無機鹽、碳源、氮源2.特殊營養(yǎng)：維生素、堿基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、氧氣的需求：4.種類：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有無凝固劑瓊脂分離鑒定工業(yè)生產化學成分：物理性質：天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基（一）.培養(yǎng)基：1.基本成分：水、無機鹽、碳源、氮源2.特殊培養(yǎng)基類型配制特點主要應用物理性質固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多微生物的分離、計數等半固體培養(yǎng)基加入瓊脂較少觀察微生物運動、鑒定菌種、保藏菌種等液體培養(yǎng)基不加入瓊脂工業(yè)生產，連續(xù)培養(yǎng)化學組成合成培養(yǎng)基由已知成分配制而成，培養(yǎng)基成分明確菌種分類、鑒定天然培養(yǎng)基由天然成分配制而成，培養(yǎng)基成分不明確工業(yè)生產目的用途鑒別培養(yǎng)基添加某種指示劑或化學藥品鑒別不同種類的微生物選擇培養(yǎng)基添加（或缺少）某種化學物質

培養(yǎng)、分離出特定的微生物培養(yǎng)基類型配制特點主要應用物理性質固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多微生選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基:

分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基:

分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基:

分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基:

分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基:

分離導入了目的基因的受體細胞加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)基:

分離雜交瘤細胞選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基:

這些營養(yǎng)成分是構成細胞結構的元素和化合物的基本元素，碳源：如CO2、糖類、脂肪酸等有機物，構成微生物的結構物質和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨鹽、硝酸鹽、牛肉膏、蛋白胨等，主要用來合成蛋白質、核酸及含氮代謝物等。1、從細胞的化學元素組成來看，培養(yǎng)基中為什么都含有這些營養(yǎng)成分？課堂探究這些營養(yǎng)成分是構成細胞結構的元素和化合物的基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養(yǎng)基。1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g分析營養(yǎng)構成？牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（二）無菌技術無菌技術的概念

無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。

獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是防止外來雜菌的入侵，無菌技術就是防止雜菌污染的操作技術。（二）無菌技術無菌技術的概念無菌操作泛指在培消毒1、無菌技術的種類滅菌使用較為溫和的物理和化學方法（酒精、紫外線）來殺死部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子。使用較為強烈的理化因素殺死物體內外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。以化學劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達到完全無菌之過程。消毒1、無菌技術的種類滅菌使用較為溫和的物理和化學方法（

對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔消毒；將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌；接種的過程要在酒精燈火焰附近進行。避免已經滅菌處理的材料用具與周圍物品接觸對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔消毒；1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min9(牛奶）3、化學藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒;氯氣消毒水源（酒精擦拭雙手4、紫外線消毒：（工作臺、接種室）(能使蛋白質變性，還能損傷DNA的結構）……(1)消毒的方法3.常用的消毒與滅菌的方法1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min(1)消毒的方法3.（1）、灼燒滅菌：接種用具和接種過程中的試管口或瓶口放在酒精燈火焰的充分燃燒層中進行灼燒滅菌。試管口或瓶口等容易被污染的部位3、常用的消毒與滅菌的方法（2）、干熱滅菌：將玻璃器皿、金屬用具等能耐高溫并需要保持干燥的物品放到干熱滅菌箱內，在160～170OC中加熱1～2h即可。（3）、高壓蒸汽滅菌：將需滅菌的物品放到盛有水的高壓蒸汽滅菌鍋內煮沸，待冷空氣排盡后，密閉繼續(xù)加熱至鍋內壓力到100kPa，溫度到121OC后，維持15～30min即可。（1）、灼燒滅菌：接種用具和接種過程中的試管口或瓶口放在酒精1、灼燒滅菌2、干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。3、高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.(2)滅菌的方法：1、灼燒滅菌(2)滅菌的方法：1.無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實驗操作者的雙手

無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。P15-16旁欄思考1.無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外4.無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。課堂探究4.無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外拓展延伸定義常用方法微生物培養(yǎng)和組培的應用消毒使用較為溫和的物理或化學方法殺死物體表面或內部的部分菌體,但不傷及活組織煮沸玻璃儀器紫外線實驗室、操作臺、衣物等酒精溶液手、外植體等次氯酸鈉溶液等外植體滅菌使用強烈的理化因素殺死物體內外所有菌體、芽孢和孢子高壓蒸汽培養(yǎng)基、玻璃儀器、棉塞、牛皮紙等灼燒接種環(huán)、涂布器等干熱玻璃儀器拓展延伸定義常用方法微生物培養(yǎng)和組培的應用消毒使用較為溫和的單個或少數菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。3.功能：1.定義：三.菌落鑒定菌種的重要依據固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基上大量繁殖子細胞群體單個2.特征：大小、形狀、光澤度、3.功能：1.定義：三.菌微生物實驗室培養(yǎng)的基本操作程序1、器具的滅菌2、培養(yǎng)基的配制3、培養(yǎng)基的滅菌4、倒平板5、微生物接種6、恒溫箱中培養(yǎng)7、菌種的保存微生物實驗室培養(yǎng)的基本操作程序1、器具的滅菌三、實驗操作

1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細菌）三、實驗操作1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細菌）培養(yǎng)基的配制原則①目的要明確：根據培養(yǎng)的微生物種類、培養(yǎng)的目的等確定培養(yǎng)基的類型和配制量。②營養(yǎng)要協(xié)調：培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質的濃度和比例要適宜。③pH要適宜：細菌培養(yǎng)基pH中性或偏堿性，霉菌培養(yǎng)基呈酸性。培養(yǎng)基的配制原則①目的要明確：根據培養(yǎng)的微生物種類、培養(yǎng)的目（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計算：（根據微生物生長時對營養(yǎng)物質的需求）物質牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水重量5g10g5g20g定溶至1000mL2.稱量

準確稱取各種成分，注意事項：牛肉膏要放在稱量紙上稱量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，稱取時動作要迅速，稱后及時蓋上瓶蓋。三、實驗操作思考：該培養(yǎng)基從物理性質分屬于哪種？原因？含有幾種營養(yǎng)成分？牛肉膏提供上述哪幾種成分？（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計算：（根據微生物生長時3.溶化：先將牛肉膏連同稱量紙一起放入燒杯，加少量水，加熱至牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻璃棒取出稱量紙。加入蛋白胨和氯化鈉，用玻璃棒攪拌使之溶解，再加入瓊脂，不斷用玻璃棒攪拌，原因：防止瓊脂糊底而導致燒杯破裂。待溶解后，加自來水定溶至100mL。（熔化后滅菌前應該調節(jié)PH)

4.滅菌：將配制好的培養(yǎng)基放到錐形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮紙），連同培養(yǎng)皿（3～5套，用幾層報紙包好）一起放到高壓蒸汽滅菌鍋內滅菌。

5.倒平板：待培養(yǎng)基冷卻到50OC左右時倒平板。3.溶化：先將牛肉膏連同稱量紙一起放入燒杯，加少量水，加?思考3①溶化時為什么要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱?

②加瓊脂的目的是什么?可保證粘附在稱量紙上的牛肉膏也能溶于水中,減少誤差作為凝固劑?思考3①溶化時為什么要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱?可保證粘思考4

①在滅菌前,用牛皮紙、舊報紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶的目的是什么？②培養(yǎng)皿能否用高壓蒸汽滅菌？?在滅菌時能避免水蒸汽凝結時浸濕棉塞；在取出培養(yǎng)基錐形瓶時也能起到隔絕空氣中雜菌污染的作用不能,因為培養(yǎng)皿要保持干燥,應該用